癌胚抗原(CEA)測定(化學(xué)發(fā)光法測定)

1、西安長安醫(yī)院 檢 驗 科癌胚抗原  (CEA)測定(化學(xué)發(fā)光法測定)文件編號：CA-JY-CZ-MY第 二 版 執(zhí)行日期：2010-1-4共5頁 第1頁  原理 癌胚抗原是一種糖蛋白，由胎兒胃腸道上皮組織、胰和肝的細(xì)胞所合成，屬于非器官特異型腫瘤相關(guān)抗原物。適用于結(jié)腸癌、肺癌、胃癌的輔助診斷。本檢驗科使用日本東曹AIA-1800型全自動免疫分析儀進(jìn)行測定，采用微粒子捕捉酶免疫分析技術(shù)(MEIA)。CEA測定利用雙抗體夾心法原理：已包被了抗體的塑料微珠試劑中，加入待測標(biāo)本后，經(jīng)溫育，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體、形成“抗體抗原酶標(biāo)記抗體復(fù)合物”。然后將其轉(zhuǎn)移到玻璃纖維柱上，用緩

2、沖液洗滌，沒有結(jié)合的抗原、酶標(biāo)抗體被洗掉，結(jié)合抗原抗體的塑料微珠則被保留在纖維柱濾膜的上方。這時再加入底物：4-甲基傘型酣磷酸鹽(4-Mup)。酶標(biāo)抗體上的堿性磷酸酶將4-Mup分解,脫磷酸后形成甲基傘型酣(4-Mu)，它在365nm激發(fā)光的照射下，發(fā)出448nm的熒光，經(jīng)過熒光讀數(shù)儀的記錄、放大，計算出所測物質(zhì)的含量。2 標(biāo)本采集與處理2.1原始樣本類型：血清、血漿或全血（應(yīng)用抗凝劑為肝素鈉、枸櫞酸鈉、ACD、CPDA-1或EDTA）、尿液(晨尿、隨即尿、24小時尿等)或其他體液(羊水等)。2.2樣本量：根據(jù)不同項目樣本量不等（83l-238l）。2.3患者準(zhǔn)備：嚴(yán)禁使用接受過鼠單克隆抗體診

3、斷或治療的病人樣本，引起體內(nèi)含有人抗鼠抗體（HAMA），當(dāng)這些樣品在使用含鼠單克隆抗體分析試劑進(jìn)行測試時，引起結(jié)果升高或降低。2.4樣本采集方法：一般采用靜脈采血。樣本采集要求： 避免過度溶血，必須在無菌體條件下采集； 確保離心速度（10000轉(zhuǎn)/分鐘）和時間（10分鐘），避免顆粒物質(zhì)的干擾。避免樣品的反復(fù)凍融，溶解后的樣品需低速震蕩或輕輕顛倒混勻已獲得穩(wěn)定的結(jié)果。若樣品中有顆粒物質(zhì)，紅血球或渾濁物質(zhì)必須離心使其澄清后再進(jìn)行測試。2.5樣品的穩(wěn)定期和保存：上機(jī)3小時內(nèi)完成檢測；2-8標(biāo)本可保存1-14天；若需長期保存（1年內(nèi)），必須將血清分離出來，冷凍保存（-10或更冷）。3  &#

4、160;試劑3.1 所有試劑均購自東曹公司 TOSOH相關(guān)校準(zhǔn)品TOSOH相關(guān)校準(zhǔn)品1TOSOH相關(guān)校準(zhǔn)品2 TOSOH樣本稀釋液 TOSOH基質(zhì)：4-甲基傘形酮酰磷酸TOSOH基質(zhì)溶解液 TOSOH清洗液TOSOH緩沖液3.2 試劑準(zhǔn)備與檢查： 從冰箱中取出1號液（底物液）放入儀器 從冰箱中取出相關(guān)測試試劑放入儀器 檢查所有試劑和緩沖液是否在有效期內(nèi)，超過有效期的試劑不可使用 檢查所有試劑和緩沖液是否足夠檢查所有消耗品（纖維杯或反應(yīng)杯）是否足夠，廢液或廢物是否清空3.3 試劑保存條件： 試劑盒、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品在2-8保存。其他試劑室溫保存。3.4 試劑性能可接受性： 按測定項目資料手冊中質(zhì)量

5、控制章節(jié)所規(guī)定內(nèi)容進(jìn)行質(zhì)量控制，結(jié)果必須在實驗室規(guī)定的可接受范圍內(nèi)。4   操作步驟   1 開機(jī)前檢查 a 察看電源是否正常安全通電 b 推主機(jī)下部的前門，打開后檢查洗凈水與分注液的用量是否滿足當(dāng)日用量廢試樣杯與廢吸嘴是否丟棄2 開機(jī)a更換75%酒精，放置基質(zhì)液b 打開電腦主機(jī)及AIA-1800電源, 點擊主業(yè)面進(jìn)入rootc 試樣吸嘴的設(shè)置及酶標(biāo)識試劑，檢體稀釋液的設(shè)置，按主機(jī)操作版面Reagent/Tip鍵，LED指示燈變?yōu)榫G色，打開試劑吸嘴護(hù)罩，將酶標(biāo)識試劑，檢體稀釋液設(shè)置在試劑托架上，將條形碼標(biāo)識面朝前d 試劑杯的設(shè)置，按主機(jī)操作版面

6、的Cup Sorter鍵，LED指示燈變?yōu)榫G色，拉開分類器抽屜將試劑托盤設(shè)置在分類器托盤上，將分類器抽屜推到底3 開機(jī)日檢4 日檢通過后，進(jìn)行標(biāo)本檢測，在樹形菜單上進(jìn)入界面設(shè)置標(biāo)本檢測項目，Assay鍵點擊開始測定5 測定完畢后，按主機(jī)操作版面的Cup Sorter及Reagent/Tip鍵，LED指示燈變?yōu)榫G色，打開試劑吸嘴護(hù)罩及分類器抽屜，收集試劑放入冰箱，更換基質(zhì)液， 放置75%酒精6 點擊關(guān)機(jī)，待窗口消失，關(guān)閉AIA-1800電源，在關(guān)閉電腦及主電源5 質(zhì)量控制：每批試劑都要使用東曹公司標(biāo)準(zhǔn)品作質(zhì)量控制，請參見AIA-1800儀器操作手冊。6  結(jié)果計算（定量分析）：利用點對

7、點數(shù)據(jù)產(chǎn)生方法來產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線機(jī)器會自動計算最終樣品濃度；7 報告格式： 各種定量單位通常采用ng/mL 8 參考值： 0-10ng/mL9 臨床意義：癌胚抗原是一種糖蛋白，由胎兒胃腸道上皮組織、胰和肝的細(xì)胞所合成，屬于非器官特異型腫瘤相關(guān)抗原物。適用于結(jié)腸癌、肺癌、胃癌的輔助診斷。9.1 主要用于對結(jié)腸直腸癌、胃癌、胰腺癌、肝細(xì)胞癌、肺癌、乳癌以及甲狀腺髓質(zhì)癌等患者的臨床監(jiān)測。9.2 結(jié)腸直腸癌患者CEA測定的敏感性高于其他腫瘤標(biāo)志物故常選CEA。初診時15% DukesA期患者CEA升高，而在C期和D期患者升高率分別達(dá)55%和70%。術(shù)前CEA升高的患者，無復(fù)發(fā)期和存活期都較

8、短。10 方法學(xué)性能精密度：采用NCCLS中的EPS-T2標(biāo)準(zhǔn)，測WithinRun,BetweenRun,RetweenDay和Total四個方面進(jìn)行精密度的評價，檢測方案為：測6套以上的血清盤，（每套3個以上的樣品），在3-4個試驗點，每天分兩個時間段，每個樣品做復(fù)管（每個樣品累計測80次以上），連續(xù)測20天以上，使用一個以上批號試劑和標(biāo)準(zhǔn)曲線?？偟腃V%值控制在8%以內(nèi)。正確度（準(zhǔn)確度）：采用與東芝原有的商品化試劑或市售的其他經(jīng)典的商品化試劑（如：HPLC或RIA）進(jìn)行相關(guān)性的比較，回歸方式一般采用Least Squares Linear Regression和/或Passing-Bablok Linear Regression方式，比較