人參皂苷Rg1對慢性腦缺血致癡呆大鼠BDNF及受體TrKB表達的影響2

1、 慢性腦缺血是臨床上常見的腦損傷之一，是阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease，AD）、血管性癡呆（Vascular dementia，VD）和Binswanger（皮層下動脈硬化性腦?。┎〉榷喾N疾病發(fā)展過程中的一個共同病理過程。發(fā)病早期以認知功能損害為主要表現(xiàn)，可構成持久或進展性的認知與神經功能障礙的病理生理學基礎。 BDNF（腦源性神經營養(yǎng)因子）為神經營養(yǎng)因子家族中的一種，在神經元損傷后再生修復和防止神經細胞退行性變等多方面發(fā)揮重要作用。 異常的BDNFmRNA表達可能引起神經元營養(yǎng)不足并進一步帶來認知方面的障礙。 人參的主要成分是人參皂苷。人參皂苷Rg1是皂苷的主要成分之一，具

2、有如下作用： 1. 人參皂苷Rg1抗氧化機制. 2. 人參皂苷Rg1抗凋亡機制。 3. 人參皂苷Rg1能夠促進Ach（乙酰膽堿）釋放，神經末梢重新攝取Ach。 4. 人參皂苷Rg1可以對tau蛋白的過度磷酸化產生影響。 1.研究目標研究目標 本實驗通過永久性結扎大鼠雙側頸總動脈（2VO）制作出慢性腦缺血致癡呆的動物模型，經人參皂苷Rg1治療一至四個月后觀察大鼠的行為學變化及海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)BDNF（腦源性神經營養(yǎng)因子）及受體TrKB（酪氨酸激酶受體B ）表達的陽性細胞數(shù)，探討人參皂苷Rg1對慢性腦缺血致癡呆大鼠的學習記憶障礙的改善作用。 2.研究內容研究內容 2.1慢性腦缺血的動物模型的

3、制備 2.2學習記憶能力的測定 2.3組織病理學測定 2.4 BDNF(腦源性神經營養(yǎng)因子)及受體TrKB（酪氨酸激酶受體B ）的免疫組織化學測定 2.5 RT-PCR 2.6 western blot（蛋白質印跡 ） 1. 本實驗通過永久性結扎雙側頸總動脈（2VO）制作出慢性腦缺血的動物模型。是研究慢性腦缺血致癡呆的理想動物模型。 2. Morris水迷宮法進行大鼠學習記憶功能的行為學測定。定位航行實驗：反映動物空間記憶的獲得情況?？臻g探索實驗：反映記憶的保持能力。 3. 首次研究了人參皂苷Rg1對認知功能及神經可塑性有重要作用的BDNF-TrKB信號傳導通路的影響。1.動物模型制備通過永久

4、性結扎大鼠雙側頸總動脈（2VO）制作出慢性腦缺血的動物模型。假手術組除不結扎、不剪斷雙側頸總動脈外，其余過程與手術組及治療組相同。2.給藥方式：Rg1治療組給予腹腔內注射Rg1（5mg/kg），每天一次，連續(xù)注射。正常組、假手術組、模型組給予每日腹腔內注射生理鹽水1毫升。3.學習記憶能力的測定利用Morris水迷宮方法檢測不同時間點（術后1個月、2個月、3個月、4個月）各組大鼠（正常組、假手術組、模型組、Rg1治療組）的學習記憶功能；術前各組大鼠先進行訓練，測試程序為定位航行試驗和空間探索試驗。4.組織病理學測定通過HE染色，光鏡觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)的組織病理學變化。 5.免疫組

5、織化學檢測 免疫組化染色方法采用免疫組織化學方法連續(xù)檢測各組、各時間點大鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)的BDNF及受體TrKB的表達變化。測定陽性細胞數(shù),進行定性和定量分析。 6. RT-PCR TRIZOL試劑提取取視交叉后4mm處至小腦的腦組織的總RNA，設計BDNF和TrKB特異性引物，用beta-acting作為內參探討各組織中相關蛋白在mRNA水平的表達情況western blot 視交叉后4mm處至小腦的腦組織的總蛋白，行SDS-PAGE電泳，專膜至硝酸纖維膜，利用BDNF和TrKB特異性抗體，用beta-acting作為內參探討相關蛋白在蛋白水平的表達情況。計劃一年半內完成本項目的研究

6、2013年3月-2013年5月（1）實驗動物的選擇（2）分組前Morris水迷宮定向航行試驗和空間探索試驗（3）行2VO術完成慢性腦缺血大鼠的模型制備2013年5月-2013年7月（1）分組后Morris水迷宮定向航行試驗和空間探索試驗（2）繼續(xù)飼養(yǎng)至慢性腦缺血后4個月2013年8月-2014年3月處死大鼠取腦組織進行如下檢測：（1）組織病理學觀察（2）免疫組織化學檢測（3）RT-PCR檢測和western blot檢測2014年4月-2014年6月對實驗結果進行分析，對治療效果進行綜合評價，并進一步改進。上述研究進程將根據實際情況進行調整9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022-3

7、-62022-3-6Sunday, March 06, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-3-62022-3-62022-3-63/6/2022 8:08:27 PM11、人總是珍惜為得到。2022-3-62022-3-62022-3-6Mar-226-Mar-2212、人亂于心，不寬余請。2022-3-62022-3-62022-3-6Sunday, March 06, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022-3-62022-3-62022-3-62022-3-63/6/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月6日星期日2022-3-6202

8、2-3-62022-3-615、一個人炫耀什么，說明他內心缺少什么。2022年3月2022-3-62022-3-62022-3-63/6/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022-3-62022-3-6March 6, 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2022-3-62022-3-62022-3-62022-3-6 研究工作基礎：本項目組的成員長期從事神經病研究工作基礎：本項目組的成員長期從事神經病學，內分泌學、生物化學等方面的工作，均具有學，內分泌學、生物化學等方面的工作，均具有碩士學位，能夠從各方面為本項目提供了技術與碩士學位，能夠從各方面為本項目提供了技術與理論的支持。理論的支持。 現(xiàn)有條件：現(xiàn)有條件：黑龍江省醫(yī)院和吉林大學第一醫(yī)院可為本試驗提供石蠟切片機、