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文檔簡介
1、食品中菌落總數(shù)的測定一、試驗目的(1) 學習和把握測定食品中菌落總數(shù)的基本方法(2) 學會菌落總數(shù)的報告方式二、試驗材料1、儀器與設備:恒溫培育箱、托盤天平、電爐、吸管、三角瓶、平皿、試管、試管架、酒精燈、滅菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蠟筆。2、 培育基和試劑:75%乙醇、0.85%生理鹽水、瓊脂培育基:胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水1000mL、pH 7.0±0.2 3、檢樣:利樂包裝鮮牛奶250ml三、試驗方法與步驟1、檢驗程序菌落總數(shù)檢驗程序:檢樣做成幾個適當倍數(shù)的稀釋液選擇2-3個適宜稀釋度各以1ml之量分別入滅菌平皿內(nèi)每皿內(nèi)加
2、入4615-20ml養(yǎng)分瓊脂置36±1恒溫箱內(nèi)培育(48±2)h取出 菌落數(shù)報告2、檢樣稀釋及培育(1)以無菌操作,將檢樣包裝打開,用吸管取25ml鮮牛奶,放于含有225ml滅菌生理鹽水的500ml滅菌玻璃三角瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預先置適當數(shù)量的玻璃珠),經(jīng)充分振搖做成1:10的均勻稀釋液。(2)用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,沿管壁緩緩注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)(留意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液,下同),振搖試管混合均勻,做成1:100的稀釋液。(3)另取1ml的滅菌吸管,按上項操作挨次作10倍遞增稀釋液,如此每遞增稀釋一次,即換用1支1ml滅菌吸管。(4)依據(jù)食品
3、衛(wèi)生檢驗標準要求和檢樣的菌落數(shù)量,選擇3個連續(xù)適宜稀釋度即10、101、102,分別在作10倍遞增稀釋的同時,即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi),每個稀釋度作兩個平皿。(5)稀釋液移入平皿后,應準時將涼至46養(yǎng)分瓊脂培育基注入平皿15ml20mL,并轉(zhuǎn)動平皿使與稀釋檢樣混合均勻,同時將養(yǎng)分瓊脂培育基傾入加有1ml稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內(nèi)作空白對比。 (6)等瓊脂凝固后,翻轉(zhuǎn)平板,置36±1恒溫箱內(nèi)培育(48±2)h取出,計算平板內(nèi)菌落數(shù)目乘以倍數(shù),即得1mL樣品所含菌落總數(shù)。 四、檢樣中細菌菌落總數(shù)的計算與報告1、菌落計算方法(1)菌落計數(shù)方法做平板菌落
4、計數(shù)時,可用肉眼觀查,必要時用放大鏡檢查,以防遺漏。在登記各平板的菌落數(shù)后,求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。(2)菌落計數(shù)的報告平板菌落數(shù)的選擇 選取菌落數(shù)在30300 CFU之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準。一個稀釋度使用兩個平板,應接受兩個平板平均數(shù),稀釋度的選擇應選擇平均菌落數(shù)在30300 CFU之間的稀釋度,乘以稀釋倍數(shù)報告之。若有兩個稀釋度,其生長的菌落數(shù)均在30300之間, 按以下公式計算:N = 樣品中菌落數(shù)C = 含適宜范圍CFU的平板菌落數(shù)之和n1 = 第一稀釋度(低稀釋度)平板個數(shù)n2 = 其次稀釋度(高稀釋度)平板個數(shù)d = 稀釋因子(第一稀釋度) 若全部稀釋度的平均菌落
5、數(shù)均大于300 CFU,則應按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之,若全部稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30 CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告若全部稀釋度及樣品原液均無菌落生長,則以小于l乘以最低稀釋倍數(shù)報告之,若全部稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300 CFU之間,其中一部分大于300 CFU或小于30 CFU時,則以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。菌落數(shù)的報告菌落數(shù)小于100 CFU 時,按“四舍五入”原則修約,以整數(shù)報告。菌落數(shù)大于或等于100 CFU 時,第3 位數(shù)字接受“四舍五入”原則修約后,取前2 位數(shù)字,后面用0 代替位數(shù);也可用
6、10 的指數(shù)形式來表示,按“四舍五入”原則修約后,接受兩位有效數(shù)字。若全部平板上為集中菌落而無法計數(shù),則報告菌落集中。若空白對比上有菌落生長,則此次檢測結(jié)果無效。稱重取樣以CFU/g 為單位報告,體積取樣以CFU/mL 為單位報告。3、試驗結(jié)果與記錄稀釋度菌落數(shù)皿號10101102報告數(shù)12稀釋液對比皿空白皿判定所檢測樣品菌落總數(shù)是否符合國家標準Phibro is required to respond to the FDA that Jianmin:· Is Prepared to add the follow
7、ing tests; light absorbing impurities, related substances and particle size to their OTC COA;· Will provide a COA as evidence that these tests have been conducted and added to the COA;· Will update VMF 6023 to include the data and report to support validation or verification of the methods used to analyze the tests cited above; and· Will provide us with a report or a statemen
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