綠豆芽淀粉酶的活性及應(yīng)用

1、綠豆芽淀粉酶的活性及應(yīng)用綠豆芽淀粉酶的活性及應(yīng)用生物工程生物工程1302-171302-17號(hào)號(hào)盧丹盧丹摘要摘要目的：測(cè)定綠豆芽生長(zhǎng)不同時(shí)期酶的活性。方法：采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法, 對(duì)影響綠豆芽淀粉酶活性測(cè)試的“最適條件”進(jìn)行研究。結(jié)果：綠豆芽在生發(fā) 84h 左右, 溫度 60, p H5. 0, 底物體積質(zhì)量 20g /L , 酶體積質(zhì)量0. 5g /L , 底物與酶作用時(shí)間 60m i n 時(shí), 淀粉酶活性最高。結(jié)論：通過(guò)對(duì)綠豆芽生長(zhǎng)的不同時(shí)期酶活性的研究, 為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)綠豆芽淀粉酶應(yīng)用提供理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：綠豆芽; 淀粉酶; 酶活性1 1、材料與方法材料與方法1. 1 實(shí)驗(yàn)材料綠豆、 甜玉

2、米為市購(gòu)。1. 2 主要試劑C u S O 4 5H 2 O 、 酒石酸鉀鈉 、 氫氧化鈉、亞鐵氰化鉀、可溶性淀粉均為分析純?cè)噭? 次甲基藍(lán)、麥芽糖為生化試劑。1. 3 實(shí)驗(yàn)方法1. 3. 1 綠豆芽的制備方法選擇發(fā)芽率高、發(fā)芽好的綠豆, 最好選擇新綠豆. 洗凈,挑去混在豆子里的雜質(zhì)、蟲(chóng)蛀豆、 半粒豆等,以免影響豆芽質(zhì)量 . 將選好的綠豆加清水浸泡4 h 后,放入器皿中. 并上下翻動(dòng),使之均勻. 種殼破裂后 ,將余水淋盡, 后裝器皿發(fā)芽 ,保持室溫 25 30 . 當(dāng)芽長(zhǎng) 1 c m時(shí), 溫度要保持在 28 40 之間,相對(duì)濕度 90% 為宜. 3 4 h 淋 1次水, 水溫要低于氣溫. 氣溫

3、較低時(shí) ,要淋溫水, 每隔 5 6 h 淋水1次。2 2、結(jié)果與討論、結(jié)果與討論 2. 1 結(jié)果 2. 1. 1綠豆芽萌發(fā)不同時(shí)期酶活性的情況 在試驗(yàn)中采用對(duì)比的方法 ,對(duì)萌發(fā)不同時(shí)期的豆芽進(jìn)行測(cè)定, 比較不同時(shí)期酶提取液在 40 時(shí)水解 1%淀粉溶液 1 h 后產(chǎn)生的還原糖量 , 從而計(jì)算出淀粉酶的活性 . 通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn), 得出綠豆芽在生發(fā) 84 h 時(shí)淀粉酶活性最強(qiáng) ,其活力值為 43U/g .見(jiàn)表 1 2. 1. 2 不同因素對(duì)綠豆芽酶活性的影響 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)可通過(guò)較少的試驗(yàn)次數(shù) ,較快地找到達(dá)到最佳試驗(yàn)結(jié)果的試驗(yàn)組合, 采用 L8 ( 27）正交表 ,安排酶濃度 ( E ) 、底物濃度

4、 ( S ) 、p H 、溫度( T ) 和酶反應(yīng)時(shí)間 ( t ) 5個(gè)實(shí)驗(yàn)因素,每個(gè)因素 2個(gè)水平 ,共進(jìn)行 8次試驗(yàn)組合 . 為確定影響酶活性的最適條件, 第 1次試驗(yàn)取 T= 30, 60 ; p H= 3. 0,7. 0; t = 60, 90m i n ; S = 30, 5 g /L , E= 0. 5, 5 g /L ,完成各組酶活性測(cè)試. 結(jié)果見(jiàn)表 2. 由表 2可知 ,第 6組酶活性最高 ,即 T = 60 ,p H= 3. 0, S =30 g /L , E= 0. 5 g /L , t = 60 m i n , 并發(fā)現(xiàn)各組之間酶活性差異很大.為縮小指標(biāo)水平間差異 ,在第

5、6組試驗(yàn)條件附近安排第二次試驗(yàn) ,仍采用 L8 ( 27) 正交表進(jìn)行篩選,確定試驗(yàn)條件: T=50, 60 ; p H=4. 0, 5. 0;t = 60, 70 m i n ; S= 10, 20 g /L , E=2. 5, 0. 5 g /L , 完成各組酶活性測(cè)試. 結(jié)果見(jiàn)表 3. 由表 3可知,第 3, 6組酶活性較高,其余組較低. 在第 3, 6組試驗(yàn)條件附近再安排第三次正交試驗(yàn)設(shè)計(jì), 注意縮小實(shí)驗(yàn)因素水平間差距 ,將 E 固定為 1 g /L ,采用 L 9 ( 34) 正交表, 即取 T= 50, 55, 60; p H=4. 0, 5. 0, 6. 0; t =60, 70

6、, 80 m i n ; S= 10,15, 20g /L , E= 2. 5, 0. 5g /L ,測(cè)得酶活性 ,并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,完成各組酶活性測(cè)試 . 結(jié)果見(jiàn)表 4 由表 4可知, 酶活性最高的試驗(yàn)組合是第 7 組,即 T=60 ; p H=5. 0; t =60 m i n ; S=20 g /L ,E= 0. 5 g /L .2. 22. 2 討討 論論2. 2. 1 發(fā)芽時(shí)間對(duì)綠豆芽中淀粉酶活性的影響本試驗(yàn)從綠豆開(kāi)始萌發(fā)出芽時(shí)測(cè)定還原糖含量的變化,從而推算淀粉酶活性的變化，在綠豆芽生長(zhǎng)周期中，淀粉酶的活性先是由低變高 ,再由高變低. 經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)得到: 綠豆芽在生發(fā)84h時(shí)淀粉酶活性最高

7、.2. 2. 2 達(dá)到最高酶活性的最適條件利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),可以通過(guò)較少的試驗(yàn)次數(shù)較快地找到綠豆芽淀粉酶活性測(cè)試的最適條件 ,由表 6可知 , 當(dāng) T=60 , p H=5. 0, S=10 g /L ,E= 0. 5 g /L , t = 60m i n 時(shí)酶活性最高, 可以認(rèn)為這是測(cè)試綠豆芽淀粉酶活性的最適條件 ,在綠豆芽淀粉酶活性測(cè)試中 , 應(yīng)圍繞此條件安排試驗(yàn) , 以期得到較好的試驗(yàn)效果3 3 結(jié)結(jié) 論論1) 淀粉酶活性 . 通過(guò)在綠豆芽萌發(fā)周期的不同階段對(duì)豆芽中淀粉酶活性的測(cè)定, 得出豆芽在生發(fā) 84 h 時(shí) ,淀粉酶活性最強(qiáng) , 活力值為 43 U/g . 由對(duì)比試驗(yàn)得出, 綠豆芽在生發(fā) 84 h 時(shí)淀粉酶活性最強(qiáng).2) 淀粉酶活性的最適條件 . 由正交試驗(yàn)得出,淀粉酶在溫度為 60, p H為 5. 0,底物濃度為 20 g /L ,酶濃度為 0. 5g /L ,酶與底物作用時(shí)間為 60 m i n 時(shí) ,酶活性最大.3) 綠豆芽汁淀粉酶在處理玉米原料中的應(yīng)用 . 利用