保健食品中褪黑素的測(cè)定

1、保健食品中褪黑素的測(cè)定Determination of melatonin in health food1范圍本方法規(guī)定了以褪黑素為有效成分的膠囊或片劑包裝的保健食品中褪黑素的測(cè)定方法。本方法適用于以褪黑素為有效成分的膠囊或片劑包裝的保健食品中褪黑素的測(cè)定。本方法高效液相色譜-紫外檢測(cè)法的檢出限為 0.5ng；取 樣量0.5g時(shí)，檢出濃度為0.07mg/kg。本方法高效液相色譜- 熒光法的檢出限為 30pg，線性范圍為0.050.50ng。第一篇高效液相色譜-紫外檢測(cè)法2原理試樣中的褪黑素經(jīng)溶解、稀釋、過濾后，使用具有紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。3試劑

2、除非另有說明，在分析中僅使用確定為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當(dāng)純度的水。3.1甲醇:色譜純。3.2無水乙醇：優(yōu)級(jí)純。3.3三氟乙酸：優(yōu)級(jí)純。3.4高效液相色譜流動(dòng)相： 甲醇：水：三氟乙酸=45: 55： 0.053.5褪黑素(Melatonin )標(biāo)準(zhǔn)品：Sigma公司產(chǎn)品。3.6褪黑素標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精確稱量30mg褪黑素標(biāo)準(zhǔn)品于 100mL容量瓶中，加入 70%乙醇溶解后定容至刻度。準(zhǔn)確吸取2mL上述溶液于10mL容量瓶中，加入流動(dòng)相(3.4)定容至刻度，此溶液濃 度為 0.060mg/mL。4儀器設(shè)備4.1高效液相色譜儀：附紫外檢測(cè)器。4.2超聲波清洗器2. 3離心機(jī)。3.分析步驟

3、5.1試樣處理：使用研缽將片劑或膠囊研成粉末并使之混合均勻。5.2精確稱量約一粒片劑或膠囊的重量于10mL容量瓶中，以70%乙醇定容至刻度，使用超聲波清洗器提取10min。將提取液離心至澄清。準(zhǔn)確量取上清液2mL于10mL容量瓶中，以流動(dòng)相定容至刻度，混勻后經(jīng)0.45卩m濾膜過濾后進(jìn)行色譜分析。5.3測(cè)定液相色譜參考條件531.1 色譜柱：C18, 4.6mnX 250mm。紫外檢測(cè)器：檢測(cè)波長：222nm。5.3.1.3 流速：0.8mL/min。柱溫：室溫332色譜分析量取10卩L標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣凈化液注入高效液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。色譜圖0.1400

4、.1300.1200.1100.1000.0900.0800.0700.0600.0500.0400.0300.0200.0100.0001.004.505.00Minutes5.506.006.507.007.508.008.509.00褪黑素標(biāo)準(zhǔn)色譜圖6.分析結(jié)果的表述6.1計(jì)算h10>C X10XX1000hs2X=(1)h-試樣的峰高或峰面積；hs-標(biāo)準(zhǔn)的峰高或峰面積；c-褪黑素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/mL ;m-試樣質(zhì)量，g。6.2結(jié)果表示：計(jì)算結(jié)果保留二位有效數(shù)字。7.技術(shù)參數(shù)準(zhǔn)確度：本方法的回收率在92.7 %102.6 %之間。精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的

5、絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的5% 。第二篇高效液相色譜熒光法1原理試樣中褪黑素經(jīng)甲醇反復(fù)提取，制成甲醇溶液，按一定比例進(jìn)行稀釋后，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，以熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間定性和與標(biāo)準(zhǔn)品峰面 積比較進(jìn)行定量。9試劑9. 1甲醇：重蒸。9. 2褪黑素標(biāo)準(zhǔn)品：純度為 99.7 %。9. 2. 1儲(chǔ)備溶液：精密稱取褪黑素標(biāo)準(zhǔn)品O.OIOOg，用甲醇溶解并配成1g/L的儲(chǔ)備溶液，于-20 C保存。9. 2. 2使用溶液：使用前精密量取一定量標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備溶液， 根據(jù)褪黑素在儀器上的響應(yīng)情況，用甲醇稀釋成標(biāo)準(zhǔn)使用溶 液。10儀器10. 1高效液相色譜儀：附熒光檢測(cè)器和微處理機(jī)。1

6、0. 2離心機(jī)10. 3超聲波清洗機(jī)11試樣制備片劑研細(xì)備用；膠囊內(nèi)容物混合均勻備用。12分析步驟12. 1提取精密稱取試樣 0.2000g于5mL的刻度試管中，加甲醇約3mL,超聲振蕩10min，離心，取上清液于10mL容量瓶中，再加甲醇約 3mL于殘?jiān)校?按前述方法重復(fù)提取 2次，合并上清液，加甲醇至刻度，搖 勻。取此溶液適量，用甲醇稀釋并定容，制成試樣溶液待測(cè)。12. 2測(cè)定12. 2. 1高效液相色譜條件12. 2. 1. 1 色譜柱：Ci8 4.6mmx 250mm不銹鋼柱。12. 2. 1. 2流動(dòng)相：甲醇。12. 2. 1. 3 流速：1mL/min。12. 2. 1. 4 進(jìn)樣量：10412. 2. 1. 5檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器，激發(fā)光波長286nm,發(fā)射光波長352nm12. 2. 2色譜分析將儀器調(diào)至最佳狀態(tài)后，分別將10 L標(biāo)準(zhǔn)溶液及凈化后試樣液注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量.本方法線范性圍為。13分析結(jié)果的表述13.1計(jì)算m1 x V?x 1000X = x n(2)mx V1X 1000式中：X -試樣中褪黑素的含量，mg/kg ;m 1 -被測(cè)樣液中褪黑素的含量，ng;試樣重量，g;V i-樣液進(jìn)樣體