上海地區(qū)漢族人高血壓腦卒中與腎素系基因多態(tài)性的關(guān)系

1、    上海地區(qū)漢族人高血壓腦卒中與腎素系基因 多態(tài)性的關(guān)系        【摘要】目的探討血管緊張素原(angiotensinogen, AGT)和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin converting enzyme, ACE)基因多態(tài)性與高血壓性腦卒中的關(guān)系。方法應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)257例單純高血壓患者(essential hypertension, EH)，和218例高血壓性腦卒中患者(其中131例出血性腦卒中，87例缺血性腦卒中)AGT基因M235

2、T變異多態(tài)和ACE基因插入(I)缺失(D)多態(tài)。結(jié)果缺血性腦卒中患者ACE基因DD基因型及D等位基因頻率明顯高于出血性腦卒中和單純性EH(P0.05)，基因型DD/II的優(yōu)勢(shì)比分別為3.25(2.204.79)及2.87(2.034.06)，等位基因DI的優(yōu)勢(shì)比分別是1.83(1.382.43)及1.69(1.272.24)；而AGT基因Met235Thr多態(tài)及聯(lián)袂DD+TT/非DD非TT在各組之間差異均無(wú)顯著性(P0.05)。結(jié)論ACE基因DD基因型和D等位基因可能系高血壓時(shí)缺血性腦卒中的危險(xiǎn)因子?！娟P(guān)鍵詞】高血壓性腦卒中；腎素-血管緊張素系統(tǒng)；基因；多態(tài)性 Association betw

3、een hypertensive cerebrovascular stroke and renin-angiotensin system gene polymorphism from Chinese cohort in ShanghaiWEI Xianglong(Department of Cardiology，Affiliated Zhujiang Hospital，the First Military Medical University, Guangzhou, Guangdong, 510282 P. R. China. E-mail: weixlhl)WANG Guliang(Depa

4、rtment of Clinical Laboratory of Zhujiang Hospital, Affiliated Zhujiang Hosptial, the First Military Medical University, Guangzhou, Guangdong, 510282 P.R.China.)JIANG Chaoxin(Shanghai Institute of Hypertension, Ruijin Hospital, Shanghai Second Medical University, Shanghai, 200025 P. R. China)LI Diyu

5、an(Department of Clinical Laboratory of Zhujiang Hospital, Affiliated Zhujiang Hosptial, the First Military Medical University, Guangzhou, Guangdong, 510282 P.R.China.)ZHAO Guangsheng(Department of Clinical Laboratory of Zhujiang Hospital, Affiliated Zhujiang Hosptial, the First Military Medical Uni

6、versity, Guangzhou, Guangdong, 510282 P.R.China.)【Abstract】ObjectiveTo evaluate the association between hypertensive cerebrovascular stroke and renin-angiotensin system gene polymorphism from Chinese cohort. MethodsThe polymorphisms of angiotensinogen(AGT) and angiotensin-converting enzyme(ACE) from

7、 257 cases of simple essential hypertension(EH) and 218 cases of hypertensive stroke(131 hemorrhagic cases and 87 ischemic cases were detected by PCR-RFLP. ResultsThe frequencies of DD genotype and D allele of ACE gene in ischemic stroke were significantly higher than those in hemorrhagic stroke and

8、 EH, and the odds ratios(OR) of DD/II genotype were 3.25(2.20-4.79) and 2.87(2.03-4.06), while the OR of D/I allele were 1.83(1.38-2.43) and 1.69(1.27-2.24) respectively. Otherwise, there was no difference in frequency distribution of Met235Thr mutation polymorphism and DD+TT/non DD non TT combined

9、among the three groups. ConclusionThe I/D polymorphism of ACE gene may be one of the risk factors and susceptible genetic markers for ischemic stroke with essential hypertension in Chinese.【Key words】stroke;renin-angiotensin system;gene;polymorphism* Project No. 96-2-298, supported by the Scientific

10、 Research Funds of the Ministry of Health, PRC腎素-血管緊張素系統(tǒng)(簡(jiǎn)稱腎素系)在調(diào)節(jié)血管張力、水電解質(zhì)內(nèi)環(huán)境方面起重要作用，因此我們?cè)谘芯磕I素系基因多態(tài)性與高血壓病關(guān)聯(lián)的基礎(chǔ)上1，進(jìn)一步探討腎素系基因多態(tài)性與高血壓性腦卒中的關(guān)系，籍以分析腎素系基因突變可能作為高血壓性腦卒中的危險(xiǎn)因子及其預(yù)報(bào)價(jià)值。1對(duì)象和方法1.1研究對(duì)象瑞金醫(yī)院高血壓科和急診科患者，均有高血壓病史，且來(lái)自同一地區(qū)，非一、二級(jí)親屬，分別按1978年WHO高血壓標(biāo)準(zhǔn)和1995年第四屆全國(guó)腦血管病會(huì)議標(biāo)準(zhǔn)選取單純性高血壓患者257例，平均年齡65±18歲；高血壓性腦卒中患者

11、218例(其中腦出血131例，腦缺血87例)，平均年齡67±14歲。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1基因組DNA的提取外周血細(xì)胞經(jīng)SDS和蛋白酶K消化，酚氯仿去除蛋白，提取基因組DNA。1.2.2PCR鑒定血管緊張素原(angiotensinogen, AGT)和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)基因多態(tài)類型參照已建立的方法1。1.3統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算各組等位基因頻率，并按Hardy-Weinberg平衡法檢驗(yàn)樣本的群體代表性。組間頻率比較采用四格表2檢驗(yàn)，相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)率以優(yōu)勢(shì)比(odds ratio,OR)及其95%可信區(qū)間(confidence

12、interval, CI)表示。2結(jié)果2.1AGT和ACE基因多態(tài)類型見(jiàn)1、2。2.2群體代表性檢驗(yàn)單純性高血壓患者和腦卒中患者AGT和ACE基因型分布，經(jīng)2檢驗(yàn)P0.05，符合Hardy-Weinberg平衡，表明患者來(lái)自同一群體。2.3單純高血壓(EH)組、高血壓腦卒中組ACE及AGT基因分布特征，見(jiàn)表1。1AGT基因M235T變異多態(tài)類型M：分子量標(biāo)準(zhǔn)；1：MM；2：MT；3：TTFig 1 Genotypes of AGT gene M235T variantM:marker; lanes 1-3: MM, MT, and TT genotypes, respectively2ACE基

13、因插入缺失多態(tài)類型1、2、3分別為DD、ID、II基因型Fig 2 Genotypes of ACE gene I/Dlane 1-3:DD, ID, and II genotypes, respectively表1單純EH組、高血壓腦卒中組ACE和AGT基因型及等位基因多態(tài)分析Table 1 The frequency distribution of genotypes and alleles of AGT and ACE gene in EH and stroke groupsGroups(組別)No. of cases(例數(shù))ACE genotype(ACE基因型)Allele freq

14、uency(等位基因頻率)AGT genotype(AGT基因型)Allele frequency(等位基因頻率)IIIDDDIDMMMTTTMTSimple EH(單純EH高血壓)25790119480.580.4214811620.210.79Haemorrhagic stroke(出血性腦卒中)1315156240.600.401466510.360.64Ischemic stroke(缺血性腦卒中)871744260.450.55831480.270.73出血性腦卒中組與單純EH組ACE和AGT基因型及等位基因頻率相比差別均無(wú)顯著性意義(P0.05)。缺血性腦卒中ACE DD基因型及D

15、等位基因頻率明顯高于出血性，DI的OR為1.87(1.272.75)，也明顯高于單純EH組，DI的OR為1.71(1.212.42)；而在腦卒中組AGT基因M235T基因型及等位基因分布無(wú)論缺血性或出血性腦卒中及單純EH組間差異無(wú)顯著性意義(P0.05)。2.4AGT和ACE基因多態(tài)性聯(lián)袂分析無(wú)論在單純性EH、出血性腦卒中及缺血性腦卒中組之間，DD+TT非DD非TT基因型頻率比較差異均無(wú)顯著性(P0.05)，見(jiàn)表2。 3討論高血壓是腦卒中發(fā)生的危險(xiǎn)因子，腦卒中患者約76.5%與高血壓有關(guān)，因此與高血壓病有關(guān)的基因可能也是高血壓性腦卒中的候選基因，遺傳因素也是腦卒中發(fā)生、發(fā)展的重要原因2。確定高

16、血壓腦卒中的相關(guān)或易感基因，對(duì)于闡明腦卒中的發(fā)病機(jī)理以及早期預(yù)報(bào)、有效防治具有重要意義。Sharma等3最早進(jìn)行了ACE與腦血管病關(guān)系的人群研究，發(fā)現(xiàn)在28例腦卒中患者與19名正常對(duì)照者中無(wú)差別；而Kario和Margaglion等4，5報(bào)道，具有ACE基因DD型發(fā)生缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)度比其他型高。高血壓缺血性腦卒中組ACE基因型分布明顯高于正常對(duì)照組及單純高血壓組，且ACE DD基因和D等位基因伴有雙親至少1人在60歲前患卒中的陽(yáng)性家族史者明顯高于陰性家族史者6。但也有不同報(bào)道7，分歧在于研究對(duì)象的差異，如研究地區(qū)、臨床標(biāo)準(zhǔn)及樣本大小等。本研究結(jié)果顯示，缺血性腦卒中組ACE DD基因型及D等

17、位基因均明顯高于出血性腦卒中組及單純高血壓組，且DD基因型優(yōu)勢(shì)比大約是D等位基因的2倍，提示ACE基因I/D多態(tài)可作為缺血性腦卒中的危險(xiǎn)因子，預(yù)測(cè)EH易感缺血性腦卒中的危險(xiǎn)度，是否存在數(shù)量級(jí)關(guān)系有待進(jìn)一步研究。表2AGT和ACE基因多態(tài)性聯(lián)袂分布Table 2 Combined distribution of genotypes of AGT and ACE gene polymorphismGroups(組別)No. of cases(例數(shù))DD+TTnon-DD non-TTSimple EH(單純EH)25730108Heamorrhagic stroke(出血性腦卒中)1311167I

18、schemic stroke(缺血性腦卒中)87846雖然前期研究1發(fā)現(xiàn)AGT基因M235T多態(tài)性與高血壓關(guān)聯(lián)，與國(guó)外薈萃(meta-analysis)報(bào)道8相近，但我們?cè)诒狙芯恐形匆?jiàn)AGT基因M235T多態(tài)與腦卒中關(guān)聯(lián)。有資料表明，高水平血漿ACE長(zhǎng)期作用可累及動(dòng)脈壁結(jié)構(gòu)性改變(血管平滑肌細(xì)胞增殖、血管壁增厚)，ACEI能保護(hù)心血管、腦、腎等重要臟器9。而ACE濃度與基因多態(tài)性有關(guān)10。國(guó)外薈萃分析和我們的前期研究均未發(fā)現(xiàn)ACE基因與EH明顯關(guān)聯(lián)1，但卻可能通過(guò)影響組織局部ACE活性而與心血管、腦及腎等重要臟器損傷有關(guān)，可見(jiàn)局部因素(如腎素-血管緊張素系統(tǒng))對(duì)高血壓靶器官的影響較大。高血壓病

19、除血壓高外，同時(shí)存在內(nèi)皮細(xì)胞受損、白細(xì)胞激活及血小板活化等異常11，這些因素都與血栓形成有關(guān)，使得高血壓病患者易發(fā)生缺血性腦卒中。因此，對(duì)DD基因型高血壓患者進(jìn)行早期的個(gè)體化防治具有重要價(jià)值。志謝瑞金醫(yī)院高血壓科和急診科提供患者血樣本和臨床資料，特此致謝 基金項(xiàng)目：衛(wèi)生部科研基金(No 96-2-298)作者單位：魏向龍（510282 廣州，第一軍醫(yī)大學(xué)附屬珠江醫(yī)院心內(nèi)科）姜朝新（檢驗(yàn)科）王谷亮（上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院高血壓研究所）李迪元（上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院高血壓研究所）趙光勝（上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院高血壓研究所）參考文獻(xiàn)1，Li DY, Wang GL， We

20、i XL, et al.Association study of gene mutation of renin system with essential hypertension in Chinese.Acta University Medicinal Second Shanghai，1998，1889-92.李迪元，王谷亮，魏向龍，等.腎素系基因突變與原發(fā)性高血壓關(guān)聯(lián)性研究. 上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，18：89-92.2，Kiely DK, Wilf PA, Cupples LA, et al. Familial aggregation of stroke: the framing

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