食品微生物課件資料整理

1、緒言微生物概念 特點 種類 發(fā)展史（人物）第一章 細菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu) 細菌(Bacteria) 是一種單細胞，具備細胞壁，呈二分裂繁殖的原核微生物。 第一節(jié) 細菌的形態(tài)一、 細菌的大小2、 細菌的基本形態(tài) 細菌的基本形態(tài)；球狀 、桿狀、螺旋狀 分別稱為球菌、桿菌和螺旋菌.(一)球菌(cocci) 細胞呈球形或近似球形(二)桿菌(bacillus)細胞呈桿狀或圓筒狀，是細菌中種類最多的 一般分為兩類。單桿菌 大腸桿菌 鏈桿菌 炭疽芽孢桿菌(三)螺旋菌(spirillarbacteria)細胞呈彎曲狀，根據(jù)其彎曲情況不同可分為弧菌和螺旋菌二類。弧菌 逗號弧菌 螺菌 鼠咬熱螺菌 三、細菌染色方法 細菌

2、的染色方法一般可分為單染色法、復(fù)染色法和特殊染色法3種。(一)單染色法 如美藍或石炭酸復(fù)紅等染色(二)復(fù)染色法 常用的有革蘭氏染色法和抗酸性染色法等。 革蘭氏染色法 （Gram strain) 草酸銨結(jié)晶紫染色 革蘭氏氏碘液媒染 95酒精脫色 沙黃或稀釋石炭酸復(fù)紅復(fù)染 革蘭氏染色結(jié)果 細菌染色后顯示出2種不同顏色，細菌呈紫色的稱革蘭氏陽性細菌(G+)，呈紅色的稱革蘭氏陰性細菌(G-)。 意義 細菌分類，臨床選藥。(三)特殊染色法 此法主要用來觀察細菌細胞的各種結(jié)構(gòu)，常用的特殊染色法有莢膜染色法、鞭毛染色法，芽孢染色法等。 第二節(jié) 細菌的結(jié)構(gòu) 細菌的結(jié)構(gòu)可分為基本結(jié)構(gòu)和特殊結(jié)構(gòu)。 基本結(jié)構(gòu) 細胞

3、壁 細胞膜 包括細胞質(zhì)核物質(zhì)細胞內(nèi)含物(一) 細胞壁（cell wall）是包裹在細胞膜外面較為堅韌而又略具彈性的一層膜。約10-25nm厚。1、 G+細胞壁 ( Gram passive bacteria cell wall) 主要由二部分組成肽聚糖為G+細胞壁主要成分，占 6090其他化學(xué)成分磷壁酸為革蘭氏陽性細菌特成分，蛋白質(zhì)、多糖和少量類脂。2、G-細胞壁(Gram negative bacteria cell wall) 其細胞壁分為內(nèi)壁層和外壁層內(nèi)壁層 肽聚糖內(nèi)、內(nèi)層為脂蛋白層外壁層中、中間為磷脂層 外、最外層脂多糖外膜蛋白(OMP)外膜中多種蛋白質(zhì)的統(tǒng)稱。包括 微孔蛋白 起分子篩

4、的作用 脂蛋白 與細菌黏附及某些物質(zhì)的吸收有關(guān)。新用途 細菌分型、鑒定及流行病學(xué)調(diào)查；用作抗原生產(chǎn)疫苗。3細胞壁的功能 保護細胞及維持細胞外形的功能排斥較大外物的進入和阻留菌體內(nèi)某些物資逸出，具選擇分子篩作用 細菌的抗原性有關(guān) 致病性有關(guān) 抗生素藥物敏感性有關(guān) 染色有關(guān) 噬菌體的敏感性有關(guān) 原生質(zhì)體（Protoplast） G+細菌經(jīng)溶菌酶或青霉素完全除去細胞壁， 形 成的僅由細胞膜包裹細胞質(zhì)的菌體。 原生質(zhì)球 G-細菌經(jīng)溶菌酶僅除去肽聚糖，形成仍有外膜層包裹的菌體。 L型細菌 指細菌自發(fā)、或經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)形成的遺傳穩(wěn)定的細胞壁缺陷株。 細菌的特殊結(jié)構(gòu) 細菌的特殊結(jié)構(gòu)包括 莢膜 鞭毛 菌毛 芽胞

5、（一）莢膜(capsule）某些細菌細胞壁外圍包繞一層界限分明、 且不易被洗脫的粘液性物質(zhì)，其厚度02 µm，稱為 莢膜。厚度02 µm者，稱為微莢膜。 化學(xué)組成 主要是 水 、多糖 功能 是細菌毒力的組成部分，與細菌的致病性有關(guān)。 （二）鞭毛(flagellum)所有的弧菌、螺菌，大多數(shù)的桿菌，以及極少數(shù)球菌，在菌體上附著有細長呈波狀彎曲的絲狀物稱為鞭毛。是細菌的運動器官 化學(xué)成分 蛋白質(zhì) 鞭毛纖細，長度 320m，直徑僅1020nm，不能直接在光學(xué)顯微鏡下觀察到。(三)菌毛(pilus，fimbriae)許多革蘭氏陰性細菌菌體上比鞭毛更細、短而 直硬的絲狀附屬物，稱作菌

6、毛。菌毛量數(shù)較多(100500根)，遍布菌體表面。化學(xué)成分 蛋白質(zhì) 普通菌毛 具粘附作用，幫助細菌粘附細胞上，構(gòu)成細菌的侵襲力。 性菌毛 與細菌的性接合有關(guān)。(四)芽胞 (Spore)某些細菌在一定的條件下細胞質(zhì)脫水濃縮，在菌體內(nèi)形成有多層膜包裹的圓形或卵圓形小體，稱作芽胞。芽胞折光性強，壁厚，不易著色。一個細菌形成一個芽孢，一個芽孢又形成一個細菌。 功能 芽孢對外界理化因素有強大的抵抗力。思考題1.細菌的大小、基本形態(tài)2.細菌的基本結(jié)構(gòu)和特殊結(jié)構(gòu)（試?yán)L制細菌結(jié)構(gòu)模式圖）3.比較革蘭氏陽性和陰性細菌細胞壁的異同4.細菌脂多糖的組成和功能5.細菌特殊結(jié)構(gòu)概念及主要功能 第二章 真菌 (fungi

7、) 真菌為不含葉綠素，以腐生或寄生方式生長，進行有性或無性繁殖真核細胞型微生物。 細胞質(zhì)內(nèi)含有各種細胞器，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等，無高爾基體。 真菌種類繁多，約5000多個屬、10萬個以上的種，對人類、動物致病的約有500個種，按其致病部位分為淺部真菌和深部真菌。真核微生物真菌 酵母菌 霉菌 蕈類 顯微藻類 原生動物 第一節(jié) 酵母菌 酵母菌是一類單細胞真菌的俗稱，分類學(xué)上分屬于 ： 子囊菌綱和半知菌類。特征:1.   個體一般以單細胞狀態(tài)存在；2.   多數(shù)營出芽生殖，有的裂殖；3.   能發(fā)酵糖類產(chǎn)能；4. 

8、;  細胞壁常含有甘露聚糖；5.   喜在含糖量較高、酸度較大的水生環(huán)境中生長。分布： 偏酸性的含糖環(huán)境。水果、蔬菜、蜜 餞的表面，果園 土壤中與環(huán)境有關(guān)。 種類： 據(jù)1982年的資料，已知的酵母有56屬，500多種。酵母菌與人類的關(guān)系極其密切。（一） 酵母菌的形態(tài)和大小 細胞直徑比細菌粗10倍左右，因此在光學(xué)顯微鏡下可以模糊地看到它們細胞內(nèi)的各種結(jié)構(gòu)分化。酵母菌細胞的形態(tài)通常有球狀、卵圓狀、橢圓狀、柱狀或香腸狀等多種。（二） 繁殖方式 1、 無性繁殖1、 裂殖 借細胞橫分裂法繁殖,與細菌類似.如八孢裂殖酵母。進行裂殖的酵母菌種類較少。2、 芽殖 出芽痕

9、和誕生痕： 在母細胞的細胞壁上出芽并與子細胞分開的位點稱出芽痕，子細胞細胞壁上的位點稱誕生痕。由于多重出芽，致使酵母細胞表面有多個小突起。假菌絲 有的酵母菌進行芽殖后，長大的子細胞不與母細胞立即分離，并繼續(xù)除芽，細胞成串排列，這種菌絲狀的細胞串就稱為假菌絲。熱帶假絲酵母；產(chǎn)朊假絲酵母3、 有性生殖 適宜的條件下，二倍體細胞減數(shù)分裂形成子囊孢子。 1、有性繁殖的過程：一般通過鄰近的兩個性不同的細胞各自伸出一根管狀的原生質(zhì)突起，隨即相互接觸、局部融合并形成一個通道，再經(jīng)過質(zhì)配、核配形成雙倍體細胞接合子。接合子進行減數(shù)分裂，形成4個或8個子核，每一個子核和周圍的細胞質(zhì)一起，在其表面形成孢子壁后就形成

10、子囊孢子。一般一個子囊可產(chǎn)生4-8個子囊孢子。 酵母菌培養(yǎng)的特征1. 菌落形態(tài)特征：大而厚，圓形，光滑濕潤，粘性，顏色單調(diào)。常見白色、土黃色、紅色。 2.馬鈴薯培養(yǎng)基 第二節(jié) 霉菌(molds) 霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu) 霉菌的菌落特征 霉菌的繁殖及生活史 霉菌的代表屬 概念 分類位置 分布 應(yīng)用 危害一、 霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu) 霉菌的菌體由分枝或不分枝的菌絲（hyphae)構(gòu)成。菌絲是真菌營養(yǎng)體的基本單位。菌絲是中空管狀結(jié)構(gòu)，直徑一般310m，有分枝。 按功能分有隔菌絲和無隔菌絲。 按功能分 1、 有隔菌絲 2、 無隔菌絲按分化程度分： 依形態(tài)分：1、營養(yǎng)菌絲(Vegetatile hypha): 在固體培

11、養(yǎng)基上伸入基內(nèi)的菌絲. 行吸收養(yǎng)料之功能.2、氣生菌絲(Aerial hypha): 向空中生長的菌絲. 發(fā)育到一定階段可分化成 孕育（繁殖）菌絲（Reproductive hypha）.二、霉菌的培養(yǎng)特征三、霉菌的繁殖 有性繁殖 無性繁殖一、 無性繁殖1. 子囊孢子形成特征：形成于菌絲的特化結(jié)構(gòu)孢子囊內(nèi)。 孢子形態(tài)：近圓形。 舉例：根霉、毛霉。2. 分生孢子(Canidinm):形成特征：由分生孢子梗頂端細胞特化而成的單個或簇生的孢子。 孢子形態(tài)：極多樣。舉例：曲霉、青霉。3. 節(jié)孢子形成特征：由菌絲斷裂而成。孢子形態(tài)：常呈成串短柱狀。舉例：白地霉。4. 厚垣孢子形成特征：部分菌絲細胞質(zhì)濃縮

12、、變圓，周圍生出厚壁而成。孢子形態(tài)：圓形、柱形等。 舉例：總狀毛霉。二、有性繁殖1. 卵孢子有性結(jié)構(gòu)及其形態(tài)特征：由大小不同的配子囊結(jié)合后發(fā)育而成。 小配子囊稱雄器；大配子囊稱藏卵器。 所屬分類地位：卵菌綱。2. 接合孢子 有性結(jié)構(gòu)及其形態(tài)特征： 是由菌絲生出的結(jié)構(gòu)大小相似、形態(tài)相同或略有不同兩個配子囊接合后發(fā)育而成。所屬分類地位：接合菌綱3.子囊孢子有性結(jié)構(gòu)及其形態(tài)特征：在子囊中形成。 子囊：兩性細胞接觸以后形成的囊狀結(jié)構(gòu)。子囊的形成有兩種方式： 兩個營養(yǎng)細胞直接交配而成，其外面無菌絲包裹； 從一個特殊的、來自產(chǎn)囊體菌絲（稱為產(chǎn)囊絲）的結(jié)構(gòu)上產(chǎn)生子囊，多個子囊外面被菌絲包圍形成子實體，稱為子

13、囊果。 所屬分類地位：子囊菌綱子囊果的形狀:子囊果(Ascocarp)： 子實體（一種有性結(jié)構(gòu)) ,多個子囊外部由菌絲體組成共同的保護組織結(jié)構(gòu), 稱為子囊果。子囊包在其中。子囊果有三種類型：閉囊殼 子囊殼 子囊盤5. 擔(dān)孢子有性結(jié)構(gòu)及其形態(tài)特征： 擔(dān)子菌所特有，經(jīng)兩性細胞核配合后產(chǎn)生的外生孢子。因著生在擔(dān)子上而得名。 所屬分類地位：擔(dān)子菌綱四、常用與常見霉菌的代表屬（一）根霉分類地位 分布 形態(tài)特征 繁殖方式 代表種 應(yīng)用(二)毛霉代表種總狀毛霉、高大毛霉、魯氏毛霉、梨形（三） 曲霉（四） 青霉酵母菌細胞結(jié)構(gòu)酵母菌的細胞 結(jié)構(gòu)與其他真核生物基本相同， 右圖是電子顯微鏡下的釀酒酵母 細胞結(jié)構(gòu)示意

14、圖。霉菌的繁殖方式 第三章 病毒 病毒的概念：含有一種類型的核酸，只能在活的、敏感細胞內(nèi)以復(fù)制方式增殖的非細胞型微生物。二、病毒的特性 1、 病毒個體極小。用普通光學(xué)顯微鏡不能查見，必須用電子顯微鏡觀察才能見到。 2、 沒有細胞結(jié)構(gòu)。每種病毒只含有一種核酸；DNA或RNA。 3、 嚴(yán)格寄生在活的宿主細胞上。4、 對抗生素不敏感，對干擾素敏感 。 第一節(jié) 病毒的形態(tài)與結(jié)構(gòu) 一、病毒的大小與形態(tài)(一) 病毒的大小 病毒大小的測量單位是 納米(nm)。(二) 病毒的形態(tài) 形態(tài)有球形、桿形、磚形、絲狀、蝌蚪狀等。二、病毒的化學(xué)組成與結(jié)構(gòu)病毒子（virion): 形態(tài)、結(jié)構(gòu)完整，有感染性的病毒顆粒。（一

15、）核酸 決定病毒的遺傳和變異。1.特點： （1）病毒只含一種核酸，構(gòu)成病毒體的芯髓。 （2）核酸結(jié)構(gòu)類型多化樣 核酸可分單股或雙股、線狀或 環(huán)狀、分節(jié)段或 不分節(jié)段 。 mRNA的堿基序列作為標(biāo)準(zhǔn)，凡與此相同 的核酸稱為正股，與其互 補的則為負股。 每個病毒粒子的核酸含量因種而異,從1%一2%至35%一45%。 核酸長度是一定的，一般由1000nt-200kb核苷酸組成。 所含基因數(shù)目差異也很大，小病毒只含4-8個基因，大病毒如痘病毒則含有多于200個基因。 有些病毒去除囊膜和衣殼，裸露的DNA或RNA也能感染細胞，這樣的核酸稱為傳染性核酸。 病毒核酸能作為mRNA或者能利用宿主細胞的RNA聚

16、合酶轉(zhuǎn)錄病毒的mRNA病毒核酸不分節(jié)段。（二）蛋白質(zhì)1.非結(jié)構(gòu)蛋白：指由病毒基因組編碼的，在病毒復(fù)制或基因表達調(diào)控過程中具有一定功能， 但與病毒結(jié)構(gòu)無關(guān)的蛋白質(zhì)。 2. 結(jié)構(gòu)蛋白：系指構(gòu)成一個形態(tài)成熟的有感染性 的病毒顆粒所必需的蛋白質(zhì)。是構(gòu)成病毒衣殼的成分和囊膜的主要成分。衣殼衣殼是圍繞核酸的蛋白質(zhì)外殼（1）對基因組起到保護作用，免其受到外界環(huán)境的影響。（2）對無包膜的病毒而言，在病毒吸附到宿主細胞上時，蛋白質(zhì)衣殼的吸附蛋白與宿主細胞上的受體結(jié)合。 （3）抗原性：誘導(dǎo)特異性抗體、致敏淋巴細胞。1、二十面體衣殼(icosahedral capsids) 二十面體有20個等邊三角形的平面，12

17、個頂角，30條邊。2、螺旋衣殼(helical capsids) 螺旋衣殼類似于一個圓筒，RNA在中心部分，盤旋呈螺旋狀，核酸的外面包圍著 蛋白質(zhì)衣殼，它是由結(jié)構(gòu)亞單位一個緊挨著 一個地呈螺旋狀排列而成。3、復(fù)合衣殼(complexform capsids) 復(fù)合對稱型一個代表是痘病毒。噬菌體的衣殼也屬復(fù)合型。（三）脂類、糖類 主要存在于囊膜中，脂溶劑可去除囊膜，使病毒喪失活性。來自宿主細胞，與囊膜病毒的吸附和穿入宿主細胞的作用有關(guān)。1、囊膜(envelope) 許多病毒粒子的外面包圍著一層彈性膜。囊膜是在病毒復(fù)制時因出芽穿過宿主細胞膜時獲得的。囊膜由蛋白質(zhì)和類脂構(gòu)成，其中糖蛋 白系病毒基因組

18、所編碼，脂質(zhì)來源于宿主細胞。2、刺突(spike) 一些病毒的囊膜上具有功能性的突起物。刺突有兩種 神經(jīng)氨酸酶 病毒吸附到宿主細胞時，該酶與細胞膜發(fā)生作用。流感病毒，新城疫病毒。 血凝素 可促進病毒凝集紅血球細胞的能力。流感病毒、腺病毒。 第二節(jié) 病毒的復(fù)制(replication) 病毒利用它自身的遺傳物質(zhì)作為模板，以宿主細胞的酶系統(tǒng)、原材料、能量來合成病毒自身的核酸和蛋白質(zhì)，再組裝成完整的病毒顆粒。 上述過程也就是病毒感染宿主，引致疾病的過程 。 病毒的復(fù)制時間因種而異 如脊髓灰質(zhì)炎病毒在神經(jīng)細胞中增殖需6-8h，單純皰疹病毒在上皮細胞中需1230h，腺病毒在呼吸道細胞中的復(fù)制周期則需48

19、h 。病毒的一步生長曲線：以感染時間為橫坐標(biāo)，病毒效價為 縱坐標(biāo)，繪制出的病毒特征曲線。 病毒復(fù)制周期基本上可劃分5個連續(xù)的階段：吸附，穿入和脫殼，生物合成、裝配及釋放。 研究病毒的復(fù)制周期有助于了解病毒的致病機理，從而采取有效措施阻斷其正常復(fù)制，達到防治病毒性疾病的目的。一、病毒的增殖過程 (一)吸附(adsorption) 病毒吸附開始其增殖的第一步。（1） 無囊膜病毒 細胞種類、遺傳特性均影響病毒的寄生。與宿主靶細胞上的受體結(jié)合。（2） 有囊膜病毒 囊膜上特異的分子與宿主靶細胞上精確的受體結(jié)合。（3） 痘病毒例外 能吸附在任何細胞和任何適宜的帶電荷的細胞表面，并不需要特殊的受體。(二)穿

20、人(penetration)和脫殼(uncoating) 病毒進入細胞的過程叫做穿入。宿主細胞內(nèi)的酶類消化衣殼，使之溶解的過程稱之脫殼。大約有3種方式(1)直接穿入： 病毒吸附到宿主細胞膜上，與受體位點相配，細胞膜打開缺口，病毒核酸進入細胞漿。(2)內(nèi)吞作用： 完整的病毒被吞入(類似吞噬作用)，胞內(nèi)酶消化衣殼，釋放出病毒核酸。(3)融合： 病毒的囊膜與細胞膜融合，核衣殼進入細胞。胞內(nèi)酶消化衣殼，釋放出病毒核酸。這種方式有利于病毒的侵入和散播，可直接從一個細胞直接進入另一個細胞，保護病毒免受外界環(huán)境的干擾。（三)生物合成(biosynthesis)病毒生物合成的重要內(nèi)容包括基因組的復(fù)制，mRNA

21、的轉(zhuǎn)錄、病毒蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)譯。各種病毒有不同的生物合成場所，如腺病毒的核酸在宿主細胞核中進行，而脊髓灰質(zhì)炎病毒在核酸細胞漿中進行。病毒生物合成的重要步驟是mRNA的合成，根據(jù)核酸類型和mRNA合成方法不同可將病毒分成6組。(四)裝配(assmbly) 由合成的蛋白質(zhì)衣殼和核酸組裝配成完整的子代病毒粒子的過程稱為裝配。病毒核酸和蛋白質(zhì)的生物合成是分別進行的。大多數(shù)DNA病毒 核酸在細胞核內(nèi)復(fù)制，蛋白質(zhì)在細胞質(zhì)合成，最后在細胞核內(nèi)裝配。 大多數(shù)RNA病毒 核酸復(fù)制和蛋白質(zhì)的合成均在細胞質(zhì)中進行。(五) 釋放(release)成熟的病毒粒子從感染細胞內(nèi)轉(zhuǎn)移到細胞外的過程稱為釋放。 （1）無囊膜的二十面體

22、對稱型病毒 以細胞破裂釋放，如腺病毒。 （2）有囊膜的病毒 以出芽方式帶上核膜進入細胞質(zhì)中，再由胞質(zhì)釋放出來，在釋放過程中獲得囊膜。痘病毒。 （3）一些病毒留在細胞內(nèi)，通過細胞之間的接觸而擴散 。流感病毒。 第三節(jié) 病毒的培養(yǎng)一、樣品處理 病理組織磨碎制成1：10懸液，經(jīng)3000r/min離心15min取上清液。加青霉素、鏈霉素 1000-10000單位 /ml，37 1小時 4 處理24小時備用 。 二、 病毒的培養(yǎng) （一）動物接種 1、本動物 2、實驗動物 小白鼠、豚鼠、大鼠、兔或猴等。每種病毒都有自己的易感宿主范圍。 （二）雞胚培養(yǎng) 受精雞胚作為病毒生長培養(yǎng)基具有價廉、無 菌，易于操作等

23、優(yōu)點。 1、 選用孵育711天的受精卵。 2、 將病毒材料用注入雞胚的定部位(如絨毛尿囊腔、卵黃囊、羊膜腔、尿囊膜）。 3、 接種后，受精卵在37 培養(yǎng)，使病毒增殖。（三）細胞培養(yǎng) 細胞(組織)培養(yǎng)是常用方法，幾乎所有的動物病毒均可進行細胞培養(yǎng)。致細胞病變效應(yīng)(cytopathogenic effect，CPE) 和病毒細胞反應(yīng)的結(jié)果可以判斷病毒是否在細胞中增殖。 1、培養(yǎng)細胞的類型： (1)原代細胞 動物組織經(jīng)胰蛋白酶消化處理，使細胞分散培養(yǎng)而得到的細胞。常用腎和睪丸等，胚胎和幼畜的細胞比較容易生長。 優(yōu)點 是病毒對天然宿主的細胞最為敏感。 缺點 是往往含有潛伏的病毒，如牛組織中常帶有牛病毒

24、性腹瀉病毒；猴組織中常攜sv40病毒。（2）繼代細胞 原代細胞用胰蛋白酶處理， 繼續(xù)培養(yǎng)的細胞。仍為二倍體，因此稱為二倍體細胞。 優(yōu)點是細胞碎瑣較少，細胞均勻，對病毒的敏感性與原代細胞差別不大，而且容易得到。這種細胞可在體外連續(xù)傳代40-60次而性狀保持正常。(3) 傳代細胞系(cell lines) 來源腫瘤組織或正常組織細胞在培養(yǎng)過 程中腫瘤化了。屬于異倍體細胞。 如 HeLa、PKl5、BHK21等細胞系。 優(yōu)點是容易培養(yǎng)，生長迅速，隨時可以獲得。缺點 是對病毒的分離不夠敏感，也不能用此制備疫苗，因為將它們接種到動物體內(nèi)有引起腫瘤的潛在危險。4、細胞培養(yǎng)的方法 (1) 靜置培養(yǎng)。 將細胞

25、懸液分裝在適宜的玻瓶，放置恒溫箱內(nèi)靜置培養(yǎng)。細胞沉降并貼附在玻面上后生長分裂，最后長成細胞單層。(2) 轉(zhuǎn)管培養(yǎng) 細胞在玻瓶內(nèi)培養(yǎng)時，玻瓶不斷緩慢旋轉(zhuǎn)(810rh)，細胞貼附于玻瓶四周，并長成單層。此法培養(yǎng)面積大，細胞接觸空氣多，生長良好。大規(guī)模細胞培養(yǎng)疫苗的生產(chǎn)均用此法。5、細胞培養(yǎng)的過程 雞胚 剪碎 洗滌 胰酶消化 加入營養(yǎng)液 37 培養(yǎng)。(3) 懸浮培養(yǎng) 細胞在懸浮條件下培養(yǎng)，并不斷通人過濾滅菌的空氣。此法主要用于大量生產(chǎn)細胞。 也用于疫苗的生產(chǎn)。(4) 組織塊培養(yǎng) 這是最原始的方法。將組織剪碎后令其粘附在玻面上，加入營養(yǎng)液后培養(yǎng)。此法手續(xù)麻煩，不能大量制備，目前極少應(yīng)用。5、細胞病變效

26、應(yīng)(Cytopathic effect，CPE)： 病毒在感染的細胞中可以引起幾種不同表現(xiàn)的細胞病變效應(yīng)。由于CPE甚為穩(wěn)定，因此能夠作為病毒鑒定標(biāo)志之一。CPE相似不一定就是屬于同類或相近的病毒；另外還有一些病毒在細胞中生長時不導(dǎo)致CPE的表現(xiàn)。CPE大致可以分為4類： (1) 細胞的折光力增強，形態(tài)逐漸變圓，細胞死亡。 如腸道病毒。 (2) 細胞聚集成叢 如大多數(shù)腺病毒。 (3) 細胞融合形成多核的巨細胞，稱為合胞體，如副粘病毒、牛白血病病毒等。 (4) 胞漿中有空泡形成， 如猴病毒SV40、呼腸孤病毒等。 第四節(jié) 病毒的檢測一、電子顯微鏡和光學(xué)顯微鏡檢查 1、電子顯微鏡檢查是病毒研究與病

27、毒性疾病診斷的重要方法之一。1) 正染法：超薄切片法 超薄切片法的優(yōu)缺點： 優(yōu)點：可觀察病毒形態(tài)和形態(tài)發(fā)生過程 缺點：操作復(fù)雜，費時，但標(biāo)本可長時間保存2)負染技術(shù)負染是指通過重金屬鹽在樣品四周的堆積而加強樣品外周的電子密度，使樣品顯示負的反差，襯托出樣品的形態(tài)和大小。 負染法的優(yōu)缺點： 優(yōu)點：快速簡易（10-20min）；分辨率高；圖象清晰地病毒結(jié)構(gòu)缺點：敏感性低，要求病毒量在107以上；所有樣品應(yīng)處于懸浮狀態(tài) 2、光學(xué)顯微鏡檢查 包涵體檢查病毒感染細胞后在光學(xué)光學(xué)顯微鏡所見到的形態(tài)。病毒的的成分 狂犬病毒的Negri氏體病毒合成的工廠 痘病毒量病毒晶格狀排列的顆粒 呼腸孤病毒、腺病毒等。

28、二、血清學(xué)方法 1、紅細胞凝集（HA）紅細胞凝集抑制試驗（HI）一些病毒具有血凝性 流感病毒、雞新城疫病毒、兔出血綜和癥病毒等。對應(yīng)的抗血清 (抗體）使其血凝抑制。 2、中和反應(yīng) 3、免疫擴散試驗 4、熒光抗體技術(shù) 5、酶免疫檢測技術(shù) 三、現(xiàn)代分子檢測技術(shù)常用于病毒核酸檢測。靈敏、快速。PCR技術(shù)、核酸雜交、酶切圖譜分析、DNA芯片技術(shù)等。四、病毒的理化特性鑒定 1、病毒的核酸類型 培養(yǎng)物添加抑制劑 DNA或RNA酶酶切 2、對理化因素的抵抗力 脂溶性試驗 耐酸性試驗 溫度敏感試驗 消毒劑敏感試驗 第四章 細菌的生理 營養(yǎng)要求 細菌代謝 細菌培養(yǎng)條件 生長繁殖規(guī)律及特點 理論上分析細菌生命活動

29、的基本規(guī)律。生產(chǎn)實踐上人工培養(yǎng) 細菌鑒定 疫苗的制造 了解細菌的致病性和免疫機制抗藥性 一、細菌的物理性狀1、 光學(xué)性質(zhì) 細菌為半透明體。當(dāng)光線照射至細菌，部分被吸收，部分被折射，故細菌懸液呈混濁狀態(tài)。 2、表面積 細菌體積微小，表面積大，有利于同外界進行物質(zhì)交換。葡萄球菌直徑 1m。 1cm3體積表面積=60000cm2； 直徑為1cm的生物體。 cm3體積的表面積= 6cm2，兩者相差1萬倍。 3、帶電現(xiàn)象 細菌固體成分的50%80%是白質(zhì)，蛋白質(zhì)由兼性離子氨基酸組成。革蘭陽性菌pI為2-3，革蘭陰性菌pI為4-5，故在近中性或弱堿性環(huán)境中，細菌均帶負電荷，尤 以前者所帶負電荷更多。 4、

30、半透性 細菌的細胞壁和細胞膜都有半透性，允許水及部分小分子物質(zhì)通過，有利于吸收營養(yǎng)和排出代謝產(chǎn)物。5、滲透壓 細菌體內(nèi)含有高濃度的營養(yǎng)物質(zhì)和無機鹽，一般革蘭陽性菌的滲透壓高達 2025個大氣壓，革蘭陰性菌為56個大氣壓。細菌所處一般環(huán)境相對低滲，但有堅韌細胞壁的保護不致崩裂。 二、細菌需要的營養(yǎng)物質(zhì)(nutrients) 細菌在生長過程中，需要從外界吸收營養(yǎng)物質(zhì)。 營養(yǎng)物質(zhì) 是供給細菌分解和合成代謝所用的物質(zhì)。以維持它們完成各種生理活動，繁殖后代，保持其生命的延續(xù)性。 細菌的營養(yǎng)物質(zhì)可以分成兩類：1、必需的營養(yǎng)物質(zhì)，沒有它細胞不能生長。2、非必需的營養(yǎng)物質(zhì)，有了它可以被細胞利用，沒有它不影響細

31、胞生長。這些物質(zhì)大部分以有機物或無機物形式提供，小部分可以由氣體物質(zhì)提供，包括水分、碳源、氮 源、無機和生長因子。1、水分(water) 在細菌細胞中，水是主要組成成分，約占細胞干重的70一90。水也是最好的溶劑和介質(zhì)，保證細胞中生理生化反應(yīng)的正常進行、營養(yǎng)物的吸收和代謝產(chǎn)物的分泌。維持細胞的滲透壓和控制胞內(nèi)溫度。因此，水是細菌生長不可缺少的物質(zhì)。2、碳源 (carbon source) 構(gòu)成細菌固有成分和代謝產(chǎn)物的碳素來源；細菌的能量來源。細菌可利用的碳源種類很多，從簡單的無機碳到復(fù)雜的有機碳化合物都能被利用。最好碳源是單糖(葡萄糖、果糖)和雙糖 (麥芽糖、乳糖)和多糖(淀粉、糊精) 。3、

32、氮源 (nitrogen source) 構(gòu)成細菌 細胞 物質(zhì)的蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸和含氮代謝產(chǎn)物，一般不能提供能量。氮源可分為無機氮源和有機氮源。 1)無機氮源 包括碳酸銨、硫酸銨、硝酸鹽、尿素、 NH、N等。細菌一般都能利用銨鹽或硝酸鹽作為氮源。 2）有機氮源包括 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏。4、無機鹽(mineral salts) 是細菌生長的必需物質(zhì)。它們?yōu)榧毎L提供必需的金屬或非金屬元素。 構(gòu)成細菌細胞的各種組分； 調(diào)節(jié)細胞的滲透壓、pH值和氧化還原電位； 有些元素如硫、鐵等可以供作自養(yǎng)微生物的能源。 細菌通常需要 Mg 、k 、Ca 、 Fe5、生長因子(growth factor)

33、 生長因子是細菌生長不可缺少的微量有機物質(zhì) 維生素 硫胺素、 核黃素。氨基酸 是細菌生長所必需的。某些細菌因缺乏某種酶類而不能自行合成特殊的氨基酸，必須由外界供給游離氨基酸或小分子肽。嘌呤和嘧啶 也是某些細菌的生長因子。它們的功能一般是構(gòu)成酶的輔基、輔酶或核酸的組成成分。三、細菌的營養(yǎng)類型 根據(jù)細菌生長所需要的碳源物質(zhì)分為 異養(yǎng)型 必須以復(fù)雜的有 機物作為碳源。自養(yǎng)型 能以簡單的無機物如CO2 作為 重要碳源和唯一碳源。根據(jù)細菌生長所需的能源分為 化能營養(yǎng)型 ；光能營養(yǎng)型。細菌可以劃分為光能自養(yǎng)型、光能異養(yǎng)型、化能自養(yǎng)型與化能異養(yǎng)型。1、光能自養(yǎng)型(photoautotroph)具有光合色素（

34、葉綠素），以光作為能源，并以CO2作為唯一碳源或主要碳源。藍細菌、紅硫細菌、綠硫細菌。2、光能異養(yǎng)型(photoheterotroph) 細菌具有光合色素，以光作為能源，它們也能利用CO2，但不能作為唯一碳源。必須在有機物存在情況下才能生長。 紅螺菌，這類細菌能利用低分子有機物迅速增殖，故而有可能用來凈化有機廢水，消除污染。3、化能自養(yǎng)型(chemoautotroph) 細菌生長所需的能量來自無機物氧化放出來的化學(xué)能，以無機的CO2或碳酸鹽作為碳源。 硫化細菌、硝化細菌、氫細菌和鐵細菌等，它們廣泛分布于自然界，對物質(zhì)轉(zhuǎn)換起重要作用4、化能異養(yǎng)型(chemoheterotroph) 以有機化合物

35、代謝作為碳源和能源。根據(jù)所利用的有機物的特性分為腐生菌、寄生菌 兼性腐生菌 一些病原菌常常是 兼性寄生菌，如結(jié)核桿菌和巴氏桿菌等。四、細菌的呼吸(respiration) 細菌從物質(zhì)氧化獲得能量的過程稱為呼吸。 有氧呼吸， 無氧呼吸 以有機物為基質(zhì)的生物氧化過程中，氧作為最終電子受氫體的，稱為有氧呼吸； 以無機物作為最終電子受體，稱為無氧呼吸； 以有機物作為最終電子受體的，稱為發(fā)酵。不同呼吸類型的細菌1、需氧菌(aerobic bacteria) 必須在有氧的環(huán)境中才能生長，它們通過有氧呼吸的方式獲得能量。許多常見細菌屬此類 結(jié)核桿菌、枯草桿菌、放線菌、真菌。這類微生物在瓊脂平板表面和液體培養(yǎng)

36、基的淺層中生長良好。2、厭氧菌(anaerobic bacteria) 厭氧菌的生長不需要分子氧。它們依靠無氧 呼吸或發(fā)酵而生活。 這些細菌又分為2種類型： 專性厭氧菌 這類細菌必須在嚴(yán)格無氧條件下才能生長，氧對它們有毒，如破傷風(fēng)桿菌等。 微氧厭菌 這類細菌暴露在氧中并不被殺死，如大多數(shù)乳酸菌，它們的產(chǎn)能實際上不需要氧，但氧分子對它們無害。3、兼性厭氧菌(facultative anaerobic bacteria)在有氧或無氧環(huán)境中都能生長，可以不同氧化方式獲得能量。 許多細菌屬此類。大腸桿菌，在缺氧時進行無氧呼吸；有氧時則進行有氧呼吸，將有機物徹底氧化成CO2和H20。 最近從大腸桿菌分離

37、出缺乏超氧化物歧化酶的突變株，這些突變株都為專性厭氧菌，短期暴露空氣既被殺死，所以認(rèn)為超氧化物歧化酶是一切與空氣接觸的微生物不可缺少的酶。五、 細菌的分解代謝(catabolism)（一）糖的利用 不同細菌利用糖的能力不同，即便是都能利用某一種糖，但代謝途徑可能不同，產(chǎn)物也不相同。 根據(jù)這一原則可選擇某種細菌生長最佳碳源及鑒定菌種。 最容易利用的是葡萄糖。此外，果糖、半乳糖等單糖；也可以利用糖醇，如甘露醇進行生長。 （一) 碳源利用試驗 (carbohydrate utilization test） (二) 單糖發(fā)酵試驗 (carbohydrate fermentation test) (三)

38、 枸櫞酸鹽利用試驗 (citrate utilization test) (四) VP試驗 (Voges-Proskauer test，VP test) (五) 甲基紅試驗 (methyl red test，MR test)(二)、蛋白質(zhì)與氨基酸的分解 大多數(shù)細菌不分解天然蛋白質(zhì)，如大腸桿菌與其它腸細菌不利用蛋白質(zhì)，但芽孢桿菌，變形桿菌等分解蛋白質(zhì)能力強。所以，微生物利用蛋白質(zhì)的能力可以作為菌種分類依據(jù)之一。 1、明膠液化試驗(gelatin liquefaction test) 2、吲哚試驗(靛基質(zhì)試驗，Indole test) 3、硫化氫試驗(hydrogen sulfide test)細

39、菌的生化反應(yīng)是鑒別細菌的重要手段。其中吲哚試驗、甲基紅試驗、VP試 驗和枸櫞酸鹽利用試驗，簡稱為IMViC試驗，常用于大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌的鑒別。 典型的大腸桿菌的IMViC試驗結(jié)果是“一 一”，而產(chǎn)氣桿菌是“一一”。六、細菌合成代謝(anabolism) 細菌除了合成菌體必需成分外，還合成一些比較復(fù)雜的特殊產(chǎn)物。這些產(chǎn)物可積累在細胞內(nèi)，或排出細胞外積累在它們生活的環(huán)境中。 1、熱原質(zhì)(pyrogen)許多革蘭氏陰性菌在生長中能產(chǎn)生一種耐熱物質(zhì)，將它注入人體或動物體內(nèi)，可以引起發(fā)熱反應(yīng)，這種物質(zhì)被稱為熱原質(zhì)。熱原質(zhì)是革蘭氏陰性菌的脂多糖。2、毒素（toxin） 細菌的一些代謝產(chǎn)物對動植物細胞有毒

40、殺作用的稱毒素。毒素大多具有蛋白質(zhì)的性質(zhì)，其毒性很強，包括外毒素和內(nèi)毒素。 肉毒桿菌產(chǎn)生的內(nèi)毒毒素、破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)生的破傷風(fēng)毒素的毒性強，這些毒素是菌體生長過程產(chǎn)生并分泌到細胞外的，因此稱為外毒素。3、細菌素大多數(shù)細菌會產(chǎn)生抑制或殺死近緣細菌的物 質(zhì)，把這些物質(zhì)稱為細菌素。細菌素與抗生素不同，不具抗生素那樣的較廣泛的抗菌譜，只有具有特異性細菌素受體的近緣細菌才對細菌素敏感，吸附細菌素而被殺死。由于細菌之間產(chǎn)生的細菌素是不同的，因此有可能利用細菌素鑒定細菌。4、色素許多細菌在培養(yǎng)過程中合成的一些帶有不同顏色的代謝產(chǎn)物。常見的色素有紅、黃、綠、褐黑等色?？煞譃樗苄陨睾椭苄陨?。水溶性色素 可使

41、培養(yǎng)基帶上顏色，如綠膿桿菌產(chǎn)生綠膿菌素可使培養(yǎng)基呈黃綠色。脂溶性色素 局限在菌落上面，不擴散到培養(yǎng)基內(nèi)，如金黃色葡萄球菌的色素等。七、 細菌的培養(yǎng)(culture)（一）細菌的培養(yǎng)條件 細菌在適宜的環(huán)境條件下才能生長繁殖。影響生長的環(huán)境因素很多諸如營養(yǎng)、溫度、pH、氧及其他氣體等等。 1、營養(yǎng)物質(zhì) 根據(jù)各種細菌不同的營養(yǎng)要求，選用不同的培養(yǎng)基，以滿足其生長的需要。2、溫度 原核生物對溫度的適應(yīng)表現(xiàn)為多樣性，范圍7.5 75之間。最適生長溫度意味著維持最大速率生長的溫度。大體上分為三類 嗜熱菌 4590條件下生長， 嗜冷菌 一7520范圍內(nèi)生長。嗜溫菌 2045 3、pH 多數(shù)細菌最適生長的pH

42、范圍很窄，約為6.08.0。多數(shù)病原性細細菌(pH7.2-7.6)在中性或微堿環(huán)境中生長良好。 4、氣體 微生物對氣體的需求根據(jù)細菌對氧的需求可分為需氧菌、厭氧菌和兼性厭氧菌。5、滲透壓（二）培養(yǎng)基（culture medium）是人工配制的適合某些微生物生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。 培養(yǎng)基的種類 1、按物理性狀 液體培養(yǎng)基 增菌 試管斜面 保存菌種 固體培養(yǎng)基 瓊脂平板 分離純化細菌 半固體培養(yǎng)基 保存菌種 2、按用途 1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基 含有一般細菌生長所需的最基本 成分培養(yǎng)基。 如普通瓊脂培養(yǎng)基。 2）營養(yǎng)培養(yǎng)基 于基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入血液、血清、糖等營養(yǎng)豐富成分，可使?fàn)I養(yǎng)要求高的細菌生長的培養(yǎng)基。 如鮮

43、血瓊脂培養(yǎng)基。3) 鑒別培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基中加有能與目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，從而達到鑒別某種細菌目的培養(yǎng)基。 如 糖發(fā)酵培養(yǎng)基。 4) 選擇培養(yǎng)基 根據(jù)某些細菌的特殊營養(yǎng)或?qū)δ承┗瘜W(xué)物質(zhì)的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基要求的培養(yǎng)基。 如麥康凱培養(yǎng)基。 5） 厭氧培養(yǎng)基 （三）細菌的培養(yǎng)特性 1、液體培養(yǎng)基 生長表現(xiàn)為 渾濁、菌膜、沉淀 2、固體培養(yǎng)基 菌落 指細菌在固體培養(yǎng)基上經(jīng)一定時間生長繁殖形成肉眼所見的單個細菌集團。八、 細菌的群體生長規(guī)律（一）代時 (g) 是指完成一次細胞分裂所需要的間隔時間。代時又稱世代時間或增代時間。不同的細菌有不同的代時，多數(shù)為20分鐘左右，如大腸桿菌代時為17

44、分鐘，有的細菌生長緩慢，代時長達33小時。 二）細菌群體生長曲線 細菌在一個有限體系中的生長稱為群體生長。 任何細菌的群體生長均服從同一規(guī)律。 以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，細菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標(biāo)作圖可以得到生長曲線。 各種細菌的生長曲線不同，但大致都分為遲緩期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期和衰亡期4個階段。九、微生物生長量的測定方法1、直接法 （1） 測體積 取一定量培養(yǎng)液離心，量體積。 （2）稱干重 取一定量培養(yǎng)液離心，100-105 或40 ，80 低溫真空干燥，稱重。乳酸桿菌2 × 108/ml, 100ml為10-70mg 干重細胞。2、間接法1）生理指標(biāo)法 測細胞總氮含量粗蛋白總量氮含量%&#

45、215;6.25細菌12.5%，霉菌6.0%，酵母菌7.5%。碳含量其他2）比濁法 比濁管 Baso4 測定光密度值( OD) 采用波長范圍450-650 nm。3、計數(shù)法 平板菌落計數(shù)法 10倍梯度稀釋，至某一稀釋度，如各取0.2ml，加入平板培養(yǎng)基，計算菌落。 細菌總數(shù)(cfu/ml)稀釋度×5 ×某稀釋度平板菌落數(shù) 細菌的生長曲線？不同時期各有何特點？1、遲緩期(lag phage) 少量細菌接種新鮮培養(yǎng)基后，一般不立即進行繁殖，生長速度幾近于零。細菌數(shù)幾乎不增加，這段時期稱為延遲期或遲緩期。 特點 細胞體積增；新陳代謝活躍， RNA含量增高；對不良條件較敏感；細胞分

46、裂延遲。2、對數(shù)生長期(1og phase) 細菌以最大的分裂率 或倍增率生長，細胞數(shù)以幾何級數(shù)增加。細胞數(shù)對數(shù)的增加與時間呈直線關(guān)系。 該期的病原菌致病力最強，其形態(tài)、染色特性及生理活性均較典型，對抗菌藥物等的作用較為敏感。3、穩(wěn)定期(stationary phage)穩(wěn)定期又稱平衡期。細胞生長速度下降，逐漸趨向零，活細胞數(shù)與死細胞數(shù)幾乎相等，此時就開始了穩(wěn)定期。平衡期細胞內(nèi)的貯藏物(如肝糖、脂肪粒、淀粉等)和代謝產(chǎn)物的積累達到高峰，因此生產(chǎn)中應(yīng)考慮發(fā)酵液在此期放罐。對芽胞菌而言，此期形成大量的芽胞，適用于該菌的菌種保藏，或芽胞的收集。工業(yè)生產(chǎn)上常通過補料、調(diào)節(jié)pH等方法延長穩(wěn)定期，以便積累

47、更多的抗生素，提高產(chǎn)量。4、衰亡期(decline phase)經(jīng)過穩(wěn)定期的一段時間，微生物繼續(xù)培養(yǎng)，細胞數(shù)按幾何級數(shù)急劇減少，呈現(xiàn)對數(shù)死亡現(xiàn)象，此期稱為衰亡期。 衰亡期的細胞形態(tài)無典型，呈現(xiàn)多形性，甚至畸形，大小不一，革蘭氏染色性改變，有的細胞自溶，釋放出氨基酸，抗生素或酶類等。第四節(jié) 病原微生物實驗室安全21世紀(jì)在我國接連出現(xiàn)幾次人及動物重大疫病、環(huán)境污染以及生物恐怖的擔(dān)心，生物安全越來越重視。生物安全的概念和一般要求防止病原微生物及其他有害生物或物質(zhì)傳入實驗室“biosecurity”防止病原微生物及其他有害生物或物質(zhì)傳出實驗室“biosafety”實驗室人員自身安全“biosecuri

48、ty” ，“biosafety”病原微生物實驗室的生物安全分類 生物安全分類（BSL）分為14級BSL-1 從事對健康成人造成危害，但對實驗室作人員和環(huán)境可能有微弱危害的。BSL-2 實驗室工作人員和環(huán)境可能有中度危害的。BSL-3 從事危險病原微生物工作。禽流感病毒、口蹄疫病毒BSL-4 有造成氣溶膠感染和危及生命的病原微生物。埃博拉病毒、尼帕病毒。動物病原微生物的分類 2005年我國農(nóng)業(yè)部頒布動物病原菌分類名錄，將動物病原微生物也分為四類。 一類 動物病原微生物 口蹄疫病毒、高致病 性禽流感病毒、豬水泡病病毒等。 二類 動物病原微生物 豬瘟病毒、雞新城疫病毒、狂犬病病毒、藍舌病病毒、兔出血

49、癥病毒、炭疽桿菌、布氏桿菌。三類 動物病原微生物 偽狂犬病病毒、鴨瘟、鵝瘟病毒 、破傷風(fēng)梭菌、結(jié)核桿菌。四類 動物病原微生物 危險性小，低致病力、制備疫苗的弱毒菌（毒）種。 思考題1. 滅菌、消毒、防腐、無菌的概念。 2. 物理消毒滅菌方法主要有哪些？如何合理選 用這些消毒方法？3. 生物安全概念，bsl分為幾類？第五章 消毒與滅菌 微生物的生長繁殖影響外界環(huán)境，對人類及動物而言，微生物有其有益的方面也同時存在危害人類的方面，特別是病原微生物。因此人類必須對環(huán)境中的有害微生物施加影響，控制其生長繁殖。一般來說，通過消毒、滅菌等手段可能達到消滅有害微生物的目的。微生物控制的重要性體現(xiàn)在下列3個方

50、面：(一)防止疾病的發(fā)生和傳播有助于阻止微生物進入動物，或阻斷可能導(dǎo)致疾病發(fā)生的環(huán)節(jié)，也有一些方法如化療藥物可直接殺死或抑制機體內(nèi)的微生物，用以治療疾病。(二)防止微生物污染 人及動物生活的環(huán)境存在微生物，控制微生物能夠保證公共衛(wèi)生和人及動物健康。例如飲水污染。(三)防止微生物引起的原材料變質(zhì)和腐敗 微生物可以使藥物變質(zhì)腐敗，輕者使藥物失效，重者危及人類及動物健康，因此必須采取有效的控制方法?；靖拍?滅菌(sterilization) 用理化方法殺滅所有微生物的方式，包括芽胞與繁殖體，病原菌與非病原菌。物品滅菌或除菌后達到無菌狀態(tài)。 消毒(disinfection) 用理化方法殺滅病原菌和微

51、生物的繁殖體的過程，以達到防傳染病傳播的目的。 無菌(asepsis ) 是指沒有活的微生物。 無菌法(asepticism) 采取防止或杜絕任何微生物進入動物機體或其他物體的方法。 防腐 指采用物理或理化方法破壞抑制微生物生長繁殖的方法。 消毒劑(disinfectant) 指一種能殺滅病原菌和微生物繁殖體的化學(xué)藥物，通常用于無生命物體的表面，但毒性大，不能直接用于機體組織。 防腐劑(antiseptic) 指一種能抑制微生物生長繁殖 的化學(xué)藥物。通常直接用于生命體，與所應(yīng)用的物質(zhì)結(jié)合在一起，如在飲料、生物制品中加入防腐劑，可防止微生物生長。 第一節(jié) 物理因素對微生物的影響 物理的消毒滅菌方法包括：溫度、輻射、干燥、聲波等。 一、溫度（一）低溫 保存微生物。細菌 4 病毒 20 以下（二）高溫 微生物必須在適宜的溫度范圍內(nèi)才能生長良 好。超過最高生長溫度時，微生物細胞內(nèi)的有機分子發(fā)生生物化學(xué)變化，導(dǎo)致細胞死亡。包括蛋白質(zhì)變性，組分的化學(xué)變化或結(jié)構(gòu)分子的破壞等。 熱