waters-液質(zhì)聯(lián)用

1、1 適用范圍本設(shè)備配備ACQUlTY UPLC液相色譜儀、XeVO TQ- SmiCrO MS/MS質(zhì)譜儀，適用于食品、藥品中各種有機物的定性、定量 分析，是一種具有高靈敏度的檢測儀器，儀器由主機、計算機和數(shù)據(jù) 處理軟件等組成。2.職責(zé)2.1操作人員按照本規(guī)程操作儀器，認真填寫實驗使用記錄。2.2保管人員負責(zé)對儀器進行定期維護和保養(yǎng)。2.3科室負責(zé)人負責(zé)監(jiān)督檢查規(guī)程的執(zhí)行。3操作程序日常操作步驟：準(zhǔn)備UPLC->設(shè)置樣品表一-> 運行樣品一-定量 打印報告o注：如果一個星期內(nèi)不運行樣品請不要尖質(zhì)譜儀，使其保持真空。 建立新方法和PrOjeCt的操作步驟：準(zhǔn)備UPLC -建立新 的P

2、rOjeCt用標(biāo)準(zhǔn)品調(diào)諧編輯質(zhì)譜方法編輯UPLC方法一一設(shè)置樣品表一-運行樣品一-定量一-> 打印報告。3.1開機：3.1.1徹底開機順序（儀器已矢閉）確定MS及其它儀器電源電纜已 連接，開氮氣發(fā)生器、開氨氣，小表<0.1 mpa。打開計算機電源 > 等 待WindOWS正常啟動 > 電腦界面右下角網(wǎng)絡(luò)圖標(biāo)紅叉。打開UPLC自 動進樣器電源，等到電腦界面右下角網(wǎng)絡(luò)圖標(biāo)出現(xiàn)感嘆號！。打開 UPLC泵電源，等約30s或者是有響聲。打開質(zhì)譜電源，等待5min， 離子源透視鏡里面亮。打開MaSSIynX軟件，masslynx主界面- 左狽instrument MaSS tune

3、界面菜單欄 VaCUUiTI-PUmP 同樣界面左側(cè)偏上 CIiagnOStiCS-VaCUUm-analyserMSl turboSPeecl%要在5分鐘內(nèi)升到80。至少抽真空4個小時 > 查看真空狀 態(tài)主界面InaSS COnSOIe界面左側(cè) XeVO tq ms CleteCtOr加號展開-TIS CliSPIay >碰撞室真空度 > 達到1.32E-5 mBar。3.1.2日常開機順序（儀器未尖閉）開氮氣發(fā)生器、開氨氣，小表 <0.1 mpa，打開MaSSlynX軟件，進入工作站。3.2建立項目點擊file下的PrOjeCt WiZarCl ,出現(xiàn)對話框，單擊y

4、es出 現(xiàn)對話框，輸入PrOjeCt JoCatiOn為C:MS DATA ,單擊next,選 擇 Create existing PrOjeCt as template,并 以 c: 為模板，單擊 finish .點擊 OK。3.3準(zhǔn)備UPLC系統(tǒng)準(zhǔn)備液相的一般流程：準(zhǔn)備流動相 > 準(zhǔn)備樣 品 >灌注二元泵 >灌注自動進樣器 >建立液相方法 > 平衡液相3.3.1. 準(zhǔn)備流動相用0.22Um的膜過濾緩沖液，所有的緩沖液和超純 水都要新配制，超純水和緩沖液使用不得超過二天，緩沖鹽一定要是 可揮發(fā)的，而且濃度不要大于IOmM。3

5、.3.2. 樣品要求所有樣品盡量用流動相初始梯度比例的溶劑來溶解， 并用0.22Um的膜過濾。3.3.3 灌注二元泵在MaSSlynX主界面，單擊MS COnSOIe）進入UPLC 交互顯示界面'點擊左欄 ACqUity UPLC SyStelT> COntrOl > Start UP SyStem，單擊QSM，選擇需要用到的流動相位置，如A和B，選擇 Seal WaSh ，時間設(shè)為 3 分鐘。單擊 SM，選擇 StrOng WaSh 5 CyCIeS , SamPle Syringe 20 單擊 EqUilibrate to MethOCl ，將流 速設(shè)為 0 J 單擊

6、Start開始灌注時間大約為9 min左右。設(shè)定流 速、平衡液相 在 MaSSIynX主界面，單擊Inlet MethOd圖標(biāo)，打開液相方法編輯 窗口，單擊 StatUS > ACQIJITY AClClitiOnal StatUS，進入液相控制 臺，單擊A或B或流速的位置，出現(xiàn)流速、比例設(shè)定對話框，設(shè)定液相流速與比例，單擊對勾，開始平衡液相，如果后面要做調(diào)諧，可設(shè) 定流速0.2 mlmin5有機相與水相的比例為50:50。3.4準(zhǔn)備質(zhì)譜3.4.1.計算化合物單同位素質(zhì)量數(shù)MaSSlynX主界面> 單擊Tools> MOIeCUIar Weight Calculator,輸入

7、化合物的分子式（大寫-注意 Cl、Br等正確的輸入方法），注意選單同位素MOnOiSO ,Ion Mode:離 子化模式,+ve正離子» -Ve負離子,單擊 CaICUIate。3.4.2用IntelIiStart進行自動調(diào)諧 在MaSSlynX主界面單擊MSTUne圖 標(biāo)，打開調(diào)諧窗口，單擊IOn MOde > ES+或ES-，單擊APl GaS圖標(biāo)打開氮氣，單擊打開高壓 選擇MS MOde圖標(biāo)，設(shè) 定液相流速0.2 mlmin,水：乙睛的比例為50:50。把標(biāo)準(zhǔn)品調(diào)諧液放 入質(zhì)譜儀塑料瓶位置處的A （或B）號位（注:濃度在200 PPb左右） 單擊 FlUicIiCS ,選

8、擇 ReSerVOir 為 A ,Flow State 為 LC 模式，點擊 PUrge 圖標(biāo)。PUrge結(jié)束后，將FIOW State改為COmbine模式，設(shè)定 FUnCtiOn為MSl SCarl，MaSS為計算出化合物的質(zhì)量數(shù)，SParI為5， 點擊進樣，開始進樣，直到離子的響應(yīng)比較穩(wěn)定。保存調(diào)諧文件： FiIe > SaVe AS至已建的項目下。在MaSSlynX主界面，選擇MS COnSOle> XeVO TQ MS DeteCtOr 選 擇 IntelliStart ，選 擇 SamPIe TUne and DeVelOP MethOcl ， ES+ 單擊 Start

9、 圖標(biāo)，出現(xiàn) IntelIiStart 自動調(diào) 諧編輯窗口 ，選擇SWitCh to AdVanCeCl mode，輸入COmPOUnCl name （化合物名稱MOIeCUIar Mass/FOrmUIa （分-7 -子量或分子式）AddUCt A+ （ M+H + ，選擇 LOacl EXiSting SamPIeTUne,在SamPIe TUne Name方 框后的“。”處調(diào)用開始保存的調(diào)諧文件'在DeVeIOP MRM MethOCl 前 的方框打鉤，并在方框出輸入MRM方法的文件名，路徑為已建的項 目下。在 Print RePOrt 前方框打鉤,COne VOItage ，

10、COIIiSiOn Energy 處為默認值、FIUiCliCS 下的 FIOWPath 選擇 COlnbineCl 模 式，SamPIe ReSerVOir 和 SamPIe FIOW Rate 參數(shù)與 FUlCliCS 下 COmbinecl 模式下的進 樣參數(shù)保持一致。單擊右邊的Start開始自動調(diào)諧。調(diào)諧成功，會有綠 勾出現(xiàn)，查看intellistart報告。3.4.3 查看intellistart中自動生成的質(zhì)譜方法：從MaSSLyrlX主窗 口，單擊MS MethOCl，出現(xiàn)MS MethOcl編輯對話框,選擇File > OPen) 選擇InteIliStart中保存的質(zhì)譜

11、方法的文件，雙擊方法,如發(fā)現(xiàn)自動調(diào)諧 生產(chǎn)的質(zhì)譜方法中部分參數(shù)有誤,則可以在ChanneIS窗口手動修改參 數(shù)，填寫relentinon WindOW中的end時 間，此時間必須與液相色譜 方法運行時間保持一致,選擇AUtO Dwell,單擊OK，點擊File> SaVe As,保存質(zhì)譜方法文件。3.5建立液相方法3.5.1編輯液相方法在液相方法編輯窗口，單擊Inlet，輸入溶劑名 稱，run time及梯度洗脫程序，梯度洗脫程序中最后階段時間必須與 run time符合，單擊OK,選擇FiIe > SaVe AS保存方法，單擊LOaCl MethOCl ，平衡液相。3.5.2 建

12、立樣品列表 在MaSSlyrIX主窗口，選擇File > New建 立一個 空白的表SamPleliSt。輸入文件名FiIe Name，樣品信息FiIeTeXt，雙 擊MS File，選擇質(zhì)譜方法，雙擊InIet File)選 擇液相方法，在 BOttIe中輸入樣品瓶的位置，在InjeCt VOlUme中輸入進樣體積，可右 鍵> Add,增加樣品表的行數(shù),保存樣品表：File > SaVe AS o3.6數(shù)據(jù)采集和處理361.選中要采集的樣品，單擊RUn > Start J選擇ACqUireSamPIe Data OnIy,，單擊OK開始進樣并采集。3.6.2在采集過程

13、中，可查看色譜圖，點擊ChrOmatOgram窗口，點 擊 Real-time UPdate icon .如果不能見整個 TIC 圖，單擊 DefaUlt Range 圖標(biāo)。如果方法中包括多個通道,可通過DiSPlay > MaSS查 看 如果方 法中包括多個檢測器或多個FUnCtion,可通過DiSPlay > TlC查看3.6.3處理多個FUnCtiOn的數(shù)據(jù)如果質(zhì)譜方法中有多 個 FUnCtiOn ，如有三個 FUnCtiOn ，如想看第二個 FUnCtiOn，MS SCarl 的數(shù)據(jù)。 在色譜圖窗口，點擊DiSPlay > TlC，選中MSSCan，選擇

14、 Add trace 、單擊 OK。 如想查第二個FUnCtion, DaUghter SCan質(zhì)譜圖，在色譜 圖 中'選擇 DiSPlay > TIC）選擇 SCanWaVeDS Add trace ，單擊 OK o.選擇PrOCeSS > COmbine SPeCtra.分別用右鍵輸入信號 和本底噪 音.單擊OK.得 到DaUghter SCarl的質(zhì)譜 圖，單擊PrOCeSS >SmOOth ,，單擊 OK。3.7數(shù)據(jù)處理外標(biāo)定量法3.7.1 在MaSSlynX主頁面單擊TargetIynX/Edit method，出現(xiàn)定量方法 編輯

15、對話框，單擊新建方法圖標(biāo)，新建一個定量方法。3.7.2單擊Add new COmPOUnCl （添加新的化合物）圖標(biāo)，添加一個 新的化合物。3.7.3 單擊菜單欄 update,選中 QUantitatiOn IOrl 和 COmPOUnCl Name （前面打勾）在MaSSIynX主頁面，打開中等偏下低濃度標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖，DiSPlay/Mass ChrOmatOgram選出要定量的化合物的離子對，一 般強度高的化合物用來做為定量離子，另一個離子對則作為確證離 子,用鼠標(biāo)右鍵在定量離子對色譜圖上拉一下,則COlTlPOUnCl name,ACqUiSitiOn FUnCtiOn NUmber

16、） QUantification Trace, PrediCtecl RetentiOn TilTle和RetentiOn Time WindOW將自動輸入到定量方法中。注意：在色 譜圖上拉的時候，要遵循兩個原則，拉的位置要以色譜峰的峰尖左右 對稱，拉的寬度要超過峰的起點和終點。3.7.4單擊工作曲線圖標(biāo)，在工作曲線設(shè)置頁面， 填入 COnCentratiOn Units:濃度單位'例如 ngml, ug/kg，PPb） PPm 等。COnCentratiOn Of Standard: LeVel -選擇 COrc.A。 POIynOInial TyPe -選擇Linear.（可根據(jù)自

17、己行業(yè)的規(guī) 定）CalibratiOn Origin_ 選擇 exclude （排除原點），include （包含原點）,force （強制過原點）Weithting FUnCtiOn （權(quán) 重）_1/x （根據(jù) 自己行業(yè)規(guī)定）PrOPagate CalibratiOn ParalneterS_ 如 果所有的化合物均用相同的工作曲線的參數(shù)，選YeS3.7.5 打開積分參數(shù)列表，選中 APeX TraCk EnabIeCl （打勾，YES），IntegratiOn WindOW EXtent 輸入 2，選中 PrOPagateIntegratiOn ParameterS （打勾），如果色譜峰并不

18、是很對稱的色譜 圖，可先在色譜圖上先設(shè)定參數(shù)，積分，好積分參數(shù)滿意之后， PrOCeSS/integrate , /copy ,在 TargetIynX 方法中 ECIit/Past 就可 將其粘貼 到TargetIynX方法中。建議用APeX TraCk積分方法，SmOOth方法建 議用SmOOth iteration 1 ,smooth WiClth 2。重復(fù)上面 的過程'把其他幾個 化合物的信息全部加入，保存方法：File/Save As,保存到當(dāng)前項目的 MethDB文件夾中，正確的SamPIeIiSt表格模板，除了前面進樣時的選 項之外，還要有SamPle type, Con

19、A,等選中要處理的樣品、單擊 PrOCeSS SamPleS 出現(xiàn)下圖的對話框確保選中JIntegrate、SamPIe，CaIibrate StandarCl，QUantify SamPIe）選擇剛才編輯的 TargetIynX方法，單擊OK后，出現(xiàn)定量結(jié)果對話框。可根據(jù)自己的需 要,用鼠標(biāo)右鍵,Chang COIUmn Order來增加或減少SUmmary中的選 項。3.8尖機程序3.8.1日常尖機：如果流動相中有緩沖鹽必須先將緩沖鹽換成水，灌注2分 鐘，流速設(shè)為0.2mlmin，80%水相，沖洗至少30分鐘，換成80%有 機相，沖洗至少20分鐘，停流速，水相，沖洗至少30分

20、鐘，換成 80%有機相，沖洗至少20分鐘，停流速，柱溫為室溫。尖質(zhì)譜：主界面mass tune或者電腦下面儀器圖標(biāo)-界面 左側(cè)偏上 fluidics-flow State 選擇為 WaSte、尖氮氣、ITIaSS tune 界面或者電腦下面儀器圖標(biāo)工具欄第6個 > 矢高壓mass tune界面右 下角> 等待去溶劑氣溫度降低至100度以下mass tune界面或者電腦 下面儀器圖標(biāo)左側(cè)偏上。ES+source temperature desolvation >尖氮氣，點擊氮氣發(fā)生器開啟開矢。3.8.2徹底尖機先完成日常尖機 泄真空：t

21、une Page > VaCUUm > Ventyes >等待渦輪分子泵轉(zhuǎn)速降到10以下J masslynx主界面 左側(cè)instrumentMaSS tune-界面左側(cè)偏上 CIiagnoStiCS-VaCUUmsource turbo SPeeCl% 退出軟件，其他界面先退出，主界面最后退出矢質(zhì)譜電源 > 尖所有UPLC電源，計算機電源，儀器三個 電源順序無所謂,尖氮氣發(fā)生器，氮氣。如果有UPS，尖閉UPS電源，計算機電源。4日常維護、保養(yǎng)及注意事項4.1 儀器室要保持整潔、干凈、無塵；配套設(shè)施布局合理。4.2 儀器室溫度應(yīng)相

22、對穩(wěn)定，一般應(yīng)控制在20-25 OC，保持恒溫；相 對濕度最好為50-70%，室內(nèi)應(yīng)備有溫度計和濕度計，一般采用空調(diào)和 吸濕機調(diào)節(jié)溫度和濕度。4.3氣壓過濾機械泵油，停止樣品采集、停止流動相、尖閉高壓、尖 閉所有氣流，矢閉離子源內(nèi)的真空隔離閥。用一字鐮絲刀順時針方向 擰開機械泵上的GaS BalIaSt閥四分之一圈，運行30分鐘后再把GaS BallaSt閥旋轉(zhuǎn)到原來尖閉的位置。對于ESl源，至少每星期做一次， 對于APCl源，每天做一次。4.4 開高壓之前一定要先開氮氣，尖氮氣之前一定要先矢高壓。4.5 ESl離子化與溶劑密切相尖，在使用某些溶劑和添加物需要注意以 下幾個方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白質(zhì)和多肽分析，但對ESl 離