生化實(shí)驗(yàn)-血糖的測(cè)定（課堂PPT）

1、.1.2血糖：指血液中的單糖：葡萄糖血糖：指血液中的單糖：葡萄糖血糖水平：血漿中葡萄糖濃度血糖水平：血漿中葡萄糖濃度血糖總維持在恒定水平：血糖總維持在恒定水平： 3.96.7mmol/L.3v調(diào)節(jié)血糖水平的激素：胰島素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。v血糖水平異常：高血糖及糖尿病；低血糖.4臨床：血糖檢測(cè)是目前診斷糖代謝異常相關(guān)疾臨床：血糖檢測(cè)是目前診斷糖代謝異常相關(guān)疾病的主要依據(jù)。病的主要依據(jù)?？蒲校涸诖x疾病的研究中，常測(cè)定血糖。在科研：在代謝疾病的研究中，常測(cè)定血糖。在某些藥物的研究中，也涉及血糖的測(cè)定。某些藥物的研究中，也涉及血糖的測(cè)定。.5體液糖的測(cè)定項(xiàng)目：體液糖的測(cè)定項(xiàng)目：血糖

2、濃度測(cè)定口服糖耐量試驗(yàn) 糖化血紅蛋白試驗(yàn)糖化血清白蛋白測(cè)定胰島素測(cè)定C-肽測(cè)定等.6測(cè)定測(cè)定方法方法無(wú)機(jī)化學(xué)法：無(wú)機(jī)化學(xué)法： Folin-Wu法法有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法酶法：酶法：葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法.7葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶- -過(guò)氧化物酶法原理過(guò)氧化物酶法原理（1）葡萄糖）葡萄糖O2H2O（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2H2O 紅色醌式物質(zhì)紅色醌式物質(zhì)505nm.8分光光度計(jì)的原理分光光度計(jì)的原理生物化學(xué)的四大研究技術(shù)：生物化學(xué)的四大研究技術(shù)：.9分光光度計(jì)的工作原理分光光度計(jì)的工作原理.10朗伯朗伯- -比爾定律比

3、爾定律朗伯定律朗伯定律：A=k1L 比爾定律比爾定律：A=k2C朗伯朗伯-比爾定律比爾定律：如同時(shí)考慮液：如同時(shí)考慮液層厚度和溶液濃度對(duì)吸光度的層厚度和溶液濃度對(duì)吸光度的影響，則吸光度與溶質(zhì)的濃度影響，則吸光度與溶質(zhì)的濃度和溶液的厚度的乘積成正比。和溶液的厚度的乘積成正比。 A=KLC .11朗伯-比爾定律應(yīng)用A標(biāo)=KC標(biāo)LA樣=KC樣L 標(biāo)準(zhǔn)品法測(cè)定未知樣品含量標(biāo)準(zhǔn)品法測(cè)定未知樣品含量C樣=A樣A標(biāo)C標(biāo).121. 接通電源，接通電源，調(diào)整波長(zhǎng)調(diào)整波長(zhǎng)。2. 比色杯中加入空白及待測(cè)樣品，并放入分光光度計(jì)中比色杯中加入空白及待測(cè)樣品，并放入分光光度計(jì)中，注意：加入樣品量不超過(guò)比色杯體積的，注意：

4、加入樣品量不超過(guò)比色杯體積的2/3。3. 調(diào)模式為調(diào)模式為“透射比透射比”，對(duì)空白對(duì)照進(jìn)行調(diào)對(duì)空白對(duì)照進(jìn)行調(diào)“0”（開(kāi)蓋（開(kāi)蓋）和調(diào)）和調(diào)“100”（閉蓋）。（閉蓋）。4. 調(diào)模式為調(diào)模式為“吸光度吸光度”，將空白對(duì)照調(diào)將空白對(duì)照調(diào)“0”，測(cè)定待測(cè)，測(cè)定待測(cè)樣品的吸光度值。樣品的吸光度值。.13.14.15.16（1）取取4支試管，按下表加入試劑支試管，按下表加入試劑: :試劑試劑標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管(ml)測(cè)定管測(cè)定管1(ml)測(cè)定管測(cè)定管2(ml)空白管空白管(ml)血清樣品血清樣品0.020.02葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.02蒸餾水蒸餾水0.02酶酚混合試劑酶酚混合試劑3.003.003.00

5、3.00充分混勻，充分混勻，37 水浴中保溫水浴中保溫20min；冷卻至室溫后冷卻至室溫后，505nm處比色處比色比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管光密度值。比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管光密度值。.17（2）計(jì)算）計(jì)算： 依據(jù)依據(jù)朗伯朗伯-比爾定律比爾定律： A=KLC 標(biāo)準(zhǔn)管葡萄糖濃度：標(biāo)準(zhǔn)管葡萄糖濃度：5mmol/L 測(cè)定管測(cè)定管葡萄糖含量葡萄糖含量（mmol/L）測(cè)定管光密度測(cè)定管光密度 標(biāo)準(zhǔn)管光密度標(biāo)準(zhǔn)管光密度5.18正確使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液正確使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液應(yīng)占比色皿的應(yīng)占比色皿的2/3。血糖測(cè)定應(yīng)在取血后血糖測(cè)定應(yīng)在取

6、血后2小時(shí)內(nèi)完成，放置太久，血小時(shí)內(nèi)完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。糖易分解，故使含量降低。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。 .19補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)測(cè)2-3名同學(xué)早餐后和空腹血糖的水平，并比較二者之間的區(qū)別。使用怡成JPS-5型血糖儀。.201 1、葡萄糖氧化酶、葡萄糖氧化酶- -過(guò)氧化物酶比色法過(guò)氧化物酶比色法測(cè)定血糖的原理。測(cè)定血糖的原理。2 2、分光光度計(jì)的正確使用。、分光光度計(jì)的正確使用。3 3、實(shí)驗(yàn)操作中存在的問(wèn)題。、實(shí)驗(yàn)操作中存在的問(wèn)題。.21葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶比色法過(guò)氧化物酶比色法Folin-Wu法法鄰鄰-甲苯胺法甲苯胺法.22原理原理

7、 葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使 Cu2+還原成還原成Cu+ ，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍(lán)色的鉬藍(lán)。通過(guò)，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍(lán)色的鉬藍(lán)。通過(guò)比色法測(cè)定藍(lán)色化合物，計(jì)算出血糖的含量。比色法測(cè)定藍(lán)色化合物，計(jì)算出血糖的含量。評(píng)價(jià)評(píng)價(jià) 穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對(duì)葡萄糖無(wú)特異性，受血中非糖穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對(duì)葡萄糖無(wú)特異性，受血中非糖還還 原物質(zhì)原物質(zhì)的影響。的影響?？崭拐Ｑ菂⒖贾悼崭拐Ｑ菂⒖贾?4.46.7mmol/L或或80-120mg/dL.23葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶比色法過(guò)氧化物酶比色法Folin-Wu法法鄰鄰-甲苯胺法甲苯胺法.24原理

8、原理 葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后，與鄰葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后，與鄰-甲苯胺縮合產(chǎn)甲苯胺縮合產(chǎn)生藍(lán)綠色的席弗生藍(lán)綠色的席弗(Schiff)堿，顏色的深淺與葡萄糖含量堿，顏色的深淺與葡萄糖含量成正比，可通過(guò)比色法測(cè)得血糖含量。成正比，可通過(guò)比色法測(cè)得血糖含量。評(píng)價(jià)評(píng)價(jià) 結(jié)果較可靠、但鄰結(jié)果較可靠、但鄰-甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性。甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性?？崭拐Ｑ菂⒖贾悼崭拐Ｑ菂⒖贾?3.96.1mmol/L或或70-110mg/dL.25葡萄糖氧化酶法：葡萄糖氧化酶法：該法特異性高，反應(yīng)條件溫和，能該法特異性高，反應(yīng)條件溫和，能反映血中葡萄糖的真實(shí)含量，且已推廣出試劑盒，反映血中葡

9、萄糖的真實(shí)含量，且已推廣出試劑盒，廣泛應(yīng)用與臨床。廣泛應(yīng)用與臨床。 Folin-Wu法：法：該法對(duì)葡萄糖無(wú)特異性，一切還原物質(zhì)該法對(duì)葡萄糖無(wú)特異性，一切還原物質(zhì)均可產(chǎn)生同樣的反應(yīng)。雖血液中葡萄糖為主要還原均可產(chǎn)生同樣的反應(yīng)。雖血液中葡萄糖為主要還原物質(zhì)，但仍存在其他非糖還原物質(zhì)，故該法其參考物質(zhì)，但仍存在其他非糖還原物質(zhì)，故該法其參考值較其他方法略高。值較其他方法略高。鄰鄰-甲苯胺法：甲苯胺法：該法涉及強(qiáng)酸、加熱等反應(yīng)條件，不該法涉及強(qiáng)酸、加熱等反應(yīng)條件，不便于大規(guī)模檢測(cè)，且使用的試劑具有毒性，臨床和便于大規(guī)模檢測(cè)，且使用的試劑具有毒性，臨床和科研上已很少采用?？蒲猩弦押苌俨捎?。.26思考題思考題1、為何不同檢測(cè)方法所提供的空腹正常血糖、為何不同檢測(cè)方法所提供的空腹正常血糖參考值存在差異？參考值存在差異