無蛋白血濾液的制備_第1頁
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無蛋白血濾液的制備_第3頁
無蛋白血濾液的制備_第4頁
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文檔簡介

1、實(shí)驗(yàn)一 無蛋白血濾液的制備（無蛋白血濾液制備的基本原理是以蛋白質(zhì)沉淀劑沉淀蛋白，用過濾法或離心法除去沉淀的蛋白。常用的方法有三氯醋酸法、氫氧化鋅法、黑燈改良法及福林-吳憲法（鎢酸法），本實(shí)驗(yàn)采用最后一種方法，即鎢酸法制備無蛋白濾液。·實(shí)驗(yàn)原理： 鎢酸鈉與硫酸混合，生成鎢酸。血液中的蛋白質(zhì)在pH小于其等電點(diǎn)的溶液中時(shí)，可被鎢酸沉淀。沉淀液過濾或離心，上清液即為無色、透明、pH約為6的無蛋白血濾液。可供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素、尿酸及氯化物等項(xiàng)目測定使用。·實(shí)驗(yàn)試劑：10%鎢酸鈉溶液，1/3 mol/L硫酸溶液·實(shí)驗(yàn)對象：新鮮雞血·操作步驟： 取50ml

2、錐形瓶或大試管1支，吸取充分混勻的抗凝血1份（1ml），擦凈管外血液，緩慢放入錐形瓶或試管底部 準(zhǔn)確用10ml移液管加入7ml蒸餾水，隨加隨搖，但也不能過于劇烈 再加入1ml硫酸溶液，隨加隨搖 放置約5min后，若振搖亦不再發(fā)生泡沫，說明蛋白質(zhì)已完全變性沉淀，用濾紙過濾后即得完全無色的無蛋白血濾液·實(shí)驗(yàn)過程（附圖）：1.取 樣這是未加入蒸餾水的抗凝血，可觀察到血色鮮艷明亮，沒有凝血塊或雜質(zhì)2.加清水混勻蒸餾水隨加隨搖于血液中后可以觀察到無任何變化，只是血液顏色稍稍變淺，血液粘稠度有所下降3.加入硫酸溶液加入硫酸溶液并混勻后，可以觀察到血液顏色變得暗淡，但并沒有出現(xiàn)凝聚等反應(yīng)現(xiàn)象，這一步主要是為鎢酸（鈉）與血液中的蛋白反應(yīng)提供酸性環(huán)境。4.加入鎢酸鈉溶液加入鎢酸鈉溶液并且混勻后，可觀察到血液顏色變?yōu)樽睾稚?，且變得渾濁有氣泡；容器壁上有痕漬，這是因?yàn)檠褐械牡鞍着c鎢酸作用而發(fā)生沉淀的結(jié)果5.過濾收集清液濾過后可看到離心管中的血清液無色澄澈，故實(shí)驗(yàn)操作成功附錄：以上實(shí)驗(yàn)過程（圖片）是第二次操作的結(jié)果，第一次操作時(shí)因?yàn)榧尤朐噭r(shí)過快，沒有做到隨加隨搖，故有很多氣泡，效果不是很理想，遂

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