分生復習總結

1、名詞解釋：1、退火（annealing）:兩條寡核苷酸引物在適當溫度下，分別依據堿基互補結合在模板DNA擴增區(qū)域兩端，稱為退火。2、表達載體：指用于在受體細胞中表達（轉錄和翻譯）外源基因的載體。除了具備復制起始位點、篩選標志和多克隆位點3個基本元件外，還需帶有外源基因在真核或者原核細胞中表達（轉錄和翻譯）所必須的DNA構件，如：啟動子、終止子、阻遏蛋白結合位點、核糖體結合位點等。3、多克隆位點：（MCS，multiple cloning sites）載體上含有的一個人工合成的DNA片段，其上含有多個單一酶切位點，是外源DNA的插入部位。具備條件：是載體中的一段堿基序列，由數個酶切位點組成。這些

2、位點在載體上都是單一位點。4、非融合性蛋白： 指利用DNA重組技術，將一段外源基因導入細菌后，自身單獨表達的、不與細菌中表達的任何蛋白質或多肽相融的外源蛋白產物。5、目的基因：指要研究或應用的基因，也就是要克隆或表達的基因或者基因的一個片段。6、Genomics:基因組學，是闡明整個基因組結構、結構與功能關系以及基因之間相互作用的科學。根據研究目的不同而分為3個不同的亞領域：1.結構基因組學（structural genomics）整個基因組的遺傳制圖、物理制圖及DNA測序。 2.功能基因組學(functional genomics)認識、分析整個基因組所包含的基因、非基因序列及其功能。 3.

3、比較基因組學(comparative genomics)比較不同物種的整個基因組，增強對各個基因組功能及發(fā)育相關性的認識。7、SNP：single nucleotide polymorphism，單核苷酸多態(tài)性，是指基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。在人群中SNP的發(fā)生頻率至少大于1%，SNP是人類可遺傳的變異中最常見的一種，也是基因組中最為穩(wěn)定的變異。 其最大程度地代表了不同個體之間的遺傳差異，因而可作為研究多基因疾病、藥物遺傳學及人類進化的重要遺傳標記 。8、假基因：（pseudogenes，）是指與某些有功能的基因結構相似，但不能表達產物的基因。假基因的產生是由于功

4、能基因發(fā)生突變或cDNA插入所致。由突變而引起的功能缺失通常是在編碼區(qū)引入了終止密碼子，這種假基因稱為重復假基因或傳統(tǒng)假基因。由插入了mRNA反轉錄生成的cDNA而造成的假基因稱為加工假基因或返座假基因。 9、雜合子丟失（loss of heterozygosity，LOH）: 是指從親代遺傳而來的受精卵開始就帶有某等位基因突變的雜合子個體再次發(fā)生遺傳損傷，導致野生型顯性基因突變或缺失形成突變純合子，失去原有的雜合狀態(tài)。舉例：視網膜母細胞瘤發(fā)生的“二次打擊理論”認為：親代遺傳而來的一個rb基因或生殖細胞已經遭受一次打擊（RB變?yōu)閞b），此RB/rb雜合子再次發(fā)生損傷可使得原有的正常RB也丟失，

5、由此引起癌變。10、Oncogene：癌基因，指細胞內控制細胞生長和分化的基因，它的結構異?；虮磉_異常，可以引起細胞癌變。廣泛存在于從單核細胞到人類在內的基因組中，在進化上高度保守，表達產物對細胞的正常生長、增殖與分化發(fā)揮著精密的調控作用，異?；罨龠M細胞惡性轉化，誘導腫瘤發(fā)生。包括所有編碼生長因子、生長因子受體以及與生長相關的信號分子和轉錄因子的基因。11、基因診斷（gene diagnosis）：是利用現代分子生物學技術從DNA/RNA的水平進行檢測，分析體內致病基因的存在、變異和表達狀態(tài)，從而對疾病作出診斷的過程。12、基因治療(：是通過將外源性正?；驅氩∽兗毎?、或將特定的基因

6、導入非病變細胞、或向功能或生物學特性異常的細胞中導入細胞本不表達的基因等，使導入基因表達產物在體內發(fā)揮作用，或采用適當的技術抑制細胞內過度表達的基因，從而達到治療疾病目的的一種方法。13、生物信息學：是一門新的前沿交叉學科，采用數理和信息科學理論、技術和方法研究生命現象，理解和組織與生物分子相關的信息。目前的研究重點和關鍵突破主要是在基因組學和蛋白質組學兩方面，是人們能夠從核酸和蛋白質的序列數據開始，經一系列分析手段歸納和預測其中所蘊藏的關于結構與功能的信息。14、表觀遺傳學：是指在DNA序列不發(fā)生改變的情況下，基因的表達水平與功能發(fā)生改變，并產生可遺傳的表型。其特征可概括為DNA序列不變，可

7、遺傳，具有可逆性。在分子角度也可定義為“在同一基因組上建立并將不同基因表達（轉錄）模式和基因沉默傳遞下去的染色質模板變化的總和”。15、染色質重塑：染色質和單個核小體內發(fā)生的任何可檢測到的變化。重塑的染色體表現為對核酸酶高度的敏感以及組蛋白結構和位置改變等特點。目前已知有兩類復合體調節(jié)染色質重塑：ATP依賴的染色質重塑復合體和染色質共價修飾復合體。 16、CpG island：CpG 島，CpG指“CG”核苷酸對，其中G在DNA鏈中緊隨C后。在脊椎動物中，CpG二核苷酸是最重要的甲基化位點，它在人類基因組中呈不均勻分布。但在一些區(qū)域CpG常成簇存在，人們將這段富含CpG的DNA稱為CpG島，通

8、常長度在1-2kb左右。CpG島常位于轉錄調控區(qū)附近，在基因組中，約有60%以上基因的啟動子含有CpG島，它的甲基化與基因的轉錄調控密切相關。 17、RNAi：RNA interference, RNA干擾，是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（dsRNA）誘發(fā)的、有特定酶參與的同源mRNA高效特異性降解（特異性基因沉默）的現象。它在轉錄水平、轉錄后水平和翻譯水平上阻斷基因的表達。 18、反式作用因子（trans-acting factor）：又稱轉錄因子（TF），指存在于真核細胞內、能識別并結合特定的DNA序列，使基因開放或關閉的一組序列特異性的DNA結合蛋白。TF一般具有三個功能結構域

9、: DNA識別結合域，轉錄激活域，蛋白質-蛋白質結合域；能特異性識別和結合順式作用元件；結合后通過促進或抑制轉錄起始復合物形成過程中的各步反應，以激活或阻遏下游基因的表達。問答題：1. 試述PCR技術的基本原理、過程和引物設計原理。（1）基本工作原理：在體外模擬體內的DNA復制的過程，以擬擴增的DNA分子為模板；用2個寡核苷酸片段作為引物，分別在擬擴增片段的DNA兩側與模板DNA鏈互補結合，提供3OH末端；在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復制的機制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，不斷重復這一過程，即可使目的DNA片段得到擴增。PCR反應的特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。(2

10、)過程：在反應管中加入反應緩沖液、dNTP、DNA模板和DNA聚合酶，混勻后加石蠟油封蓋液面防止反應液的揮發(fā)。然后將反應管置于PCR儀中開始以下循環(huán)反應。 1、變性：加熱使雙鏈DNA模板解旋成單鏈（T：95左右）。模版DNA在95左右的高溫條件下雙螺旋的氫鍵斷裂，雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA并游離于反應液中；（解鏈） 2、退火：降溫使引物與DNA模板互補區(qū)域結合形成雜交鏈（T：55左右）。兩個寡核苷酸引物在適當溫度下，分別依據堿基互補結合在模版DNA擴增區(qū)域兩端，DNA聚合酶開始合成新鏈；（引物與模版連雜交，新鏈開始合成） 3、延伸：溫度升至72左右，Taq DNA聚合酶催化以引物為起始點的5

11、'3' DNA鏈延伸反應，形成新生DNA鏈。在4種dNTP底物及Mg2+存在下，DNA聚合酶在最適作用溫度下將單核苷酸按堿基互補配對原則從引物的3-端摻入，使引物沿著53方向延伸合成新股DNA。每一循環(huán)的產物再繼續(xù)作為下一循環(huán)的模版。（合成新鏈）每一循環(huán)的產物再繼續(xù)作為下一循環(huán)的模板。循環(huán)次數：2535，不超過40次(3)引物設計總原則：提高擴增的效率和特異性。 一般原則：1、長度：1640個核苷酸，以18-24個為最佳。 2、引物末端：3端的堿基最好選T、G、C而不選A。 3、引物內、引物間不應有互補序列 4、引物應位于基因組DNA的保護區(qū)，且與非特異擴增區(qū)無同源性 5、引物

12、的GC含量和Tm值:G+C堿基含量應保持在40%-75%之間，以維持Tm在56-62范圍內。 6、3端必須與模板DNA互補配對，3端的堿基最好選T、G、C而不選A。 7、5端可游離，添加修飾位點。（3）引物設計原理：引物設計的總原則就是提高擴增的效率和特異性。 引物的位置：用于基因組DNA的引物序列應位于基因組DNA的保守區(qū)，且與非擴增區(qū)無同源序列。若以cDNA為模版，則首先應盡力使引物和產物保持在mRNA的編碼區(qū)內，其次盡量將引物放到不同的外顯子上，以便使特異的PCR產物與從污染DNA中產生的產物在大小上相區(qū)別； 引物的長度：每一條引物長度（與模版DNA序列互補的部分）以1824mer為最佳

13、； 引物末端：3-端堿基最好選T、G、C而不選A，5-端堿基無嚴格限制。一對引物之間不應存在互補序列，每一個引物內部也應避免形成二級結構； 引物的GC含量和Tm值：G+C堿基含量應保持在40%75%之間，以維持Tm在5662范圍內。2. 制備目的基因常用的方法有哪幾種？簡述重組DNA的基本過程。 制備目的基因常用的方法有：酶切法直接獲得目的DNA片段；體外擴增合成目的DNA片段；篩選文庫獲得目的DNA片段；化學合成PCR搭接法獲得目的DNA片段。也可用計算機克隆法：首選對擬克隆的DNA序列在種屬間進行同源性或相似性比較，找出目的DNA的保守序列并作為引物合成靶序列以減少盲目性。 重組DNA基本

14、過程包括：欲進行重組的DNA片段（目的基因）的獲??；載體的選擇及準備；目的DNA片段與載體的連接；重組DNA導入宿主細胞；含重組DNA宿主細胞的克隆化及鑒定。 五大環(huán)節(jié)。 一、(1)構建基因組DNA文庫后從中篩選目的基因 （2)構建cDNA文庫后從中篩選目的基因 (3）設計一對目的基因引物，用PCR或RT-PCR技術體外擴增目的基因片段 (4）化學合成已知序列的長度不是太大的DNA片段 （5)直接用限制酶從基因組DNA、或cDNA片段，或含目的基因的重組體上切取。 重組DNA技術的基本過程： 制備目的基因和相關載體。 將目的基因和有關載體進行連接 將重組的DNA導入受體細胞 DNA重組體的篩選

15、和鑒定 DNA重組體的擴增、表達和其它研究 （或）1、載體的選擇和制備分；2、制備目的基因片段切 3、DNA片段的重組連接接；4、重組DNA導入受體細胞導 5、轉化子的篩選篩；6、重組子的篩選篩；7、重組子的鑒定鑒 8、克隆擴增或表達擴/表；9、基因工程的后處理分3、簡述表達載體和克隆載體在結構上的異同。（1）克隆用質粒載體的結構簡單，其主要功能是可攜帶目的DNA在宿主細胞中復制擴增，從而經過克隆篩選獲得克隆篩選獲得重組DNA。pBR322和pUC18/19是經典代表，目前用的多是改進而來的。結構上含有復制起始點，篩選標記，多個單一酶切位點（獲多克隆位點MCS）。（2）表達用質粒載體是在克隆載

16、體的基礎上，加上用于插入基因能夠在宿主細胞（原核細胞或真核細胞）內表達所需的必要元件，如啟動子、終止子、核糖識別位點等。原核表達的質粒載體：除具備一般克隆載體所具有的必要元件外，還需要在MCS的上下游分別提供啟動子和終止子，從而使其與插入基因共同組成完整的轉錄單位。真核表達質粒載體：一般由兩部分組成，一部分用于在原核細胞中復制及篩選，一部分用于在真核細胞中復制、篩選及表達。 （一）克隆載體的結構：（a）必須是一個復制子，能在受體細胞中復制：1、復制起點 Ori。 2、復制區(qū)。3、復制終點 term。（b）帶有抗藥性基因：Tet r：編碼膜蛋白，阻止Tet進入細胞；Amp r：-內酰胺環(huán)水解酶；

17、Kan r： Kan P , neo p；Cam r：氯霉素乙酰基轉移酶（C）具有多克隆位點（d）可導入受體細胞（2） 表達載體的結構： 表達載體=克隆載體 + 表達元件 原核表達載體：“啟動子核糖體結合位點克隆位點轉錄終止信號”； 真核表達載體的基本轉錄元件： 原核序列（克隆用）+ 真核序列（表達用） 復制子 真核抗藥基因+真核表達元件 抗藥基因 （或真核復制起始點） 真核表達元件：“啟動子/增強子克隆位點轉錄終止信號poly(A)加尾信號”另一版答案：克隆載體是用來在受體細胞中克隆和擴增DNA片段的載體。1、可導入受體細胞2、能夠在受體細胞中復制3、具有克隆位點4、帶有藥物抗性基因，便于篩

18、選 表達載體是用來在受體細胞中轉錄和翻譯外源基因的載體。原核表達載體的表達構件表達載體 = 克隆載體+表達元件。 “啟動子核糖體結合位點克隆位點轉錄終止信號真核表達載體的基本成分： 啟動子和增強子轉錄終止和加尾信號4、試述怎樣進行疾病基因的定位和克隆。疾病基因的定位：可選用連鎖分析、候選基因關聯分析、全基因組關聯分析等研究方案。研究單基因遺傳病的基因一般應用連鎖分析；針對已知候選基因可進行關聯分析；在無假說條件下可使用全基因組關聯分析進行研究。疾病基因的克隆包括定位克隆和功能克隆兩策略。定位克隆確定基因在染色體上的位置；獲得基因所在區(qū)段的克隆重疊群；確定候選基因的染色體片段；從這些片段中篩選出

19、目的基因，并作突變檢測驗證和功能分析。功能克?。菏菑牡鞍踪|到DNA的研究路線，尤其是出生缺陷引起的分子病。先獲得純化的蛋白，再：根據已知部分氨基酸序列合成寡核苷酸作為探針，篩選cDNA文庫；或：利用特異性抗體篩選表達型cDNA文庫。在獲得陽性克隆后，經學列測定和動能分析確定其是否為致病基因。也可通過比較正常和疾病情況下mRNA表達差異來克隆疾病相關基因。定位：連鎖4分析和關聯分析是定位疾病相關基因的重要手段，1、研究單基因遺傳疾病一般應用連鎖分析，即是利用與致病基因相連的某些基因座作為遺傳標志，通過鑒定遺傳標志的存在而判斷個體是否帶有致病基因。2、針對已知候選基因可進行關聯分析即是觀察候選基因

20、異常與疾病性狀在人群中的統(tǒng)計學關系。3、在無假說條件下可使用全基因組關聯分析進行研究。即是通過掃描整個基因組觀察哪些基因與疾病表型間存在關聯，將這些不同的遺傳變異與某些性狀聯系起來。克?。杭膊』虻目寺“ǘㄎ豢寺『凸δ芸寺煞N，定位克?。篴、通過家系連鎖分析資料或染色體異常等數據確定基因在染色體上的位置。b、通過染色體歩移、染色體區(qū)帶顯微切割等技術獲得基因所在區(qū)段的克隆重疊群。C、確定含有候選基因的染色體片段。D、從這些片段中進一步篩選目的基因并作突變檢測驗證和功能分析功能克隆：指從致病基因的功能出發(fā)克隆該致病基因。有以下兩種方式“a、根據已知的部分的氨基酸序列合成寡核苷酸作為探針，篩選cD

21、NA文庫，b、利用特異性抗體篩選表達型cDNA 文庫。5、試舉例說明癌基因誘導腫瘤發(fā)生的基本原理。 癌基因廣泛存在于從單核細胞到人類在內的基因組中，在進化上高度保守，表達產物對細胞的正常生長、增殖與分化發(fā)揮著精密的調控作用。許多癌基因是對細胞的生長增殖發(fā)揮正性調控作用的功能基因，當這些基因發(fā)生結構性異?；罨瘯r，必然導致細胞生長增殖與分化異常，部分細胞甚至發(fā)生惡性改變形成腫瘤?！净罨┗蚩烧T導腫瘤發(fā)生的幾個典型機制：染色體異位突變、基因點突變、基因擴增、DNA重排、病毒基因組LTR（長末端重復序列）整合、癌基因的低甲基化修飾改變。】1、染色體易位突變活化癌基因誘導腫瘤發(fā)生。如：2、 基因點突變

22、活化癌基因誘導腫瘤發(fā)生。如3、 3、基因擴增活化癌基因。如4、 DNA重排。另一版本答案：5、 病毒基因組LTR序列整合活化。如6、 癌基因的低甲基化修飾改變活化癌基因誘發(fā)腫瘤。如6、比較原核基因組和真核基因組的結構和功能的特點。 原核基因組的結構和功能的特點 1、基因組通常由一條環(huán)狀雙鏈DNA分子組成，DNA雖與蛋白結合，但不形成染色體結構，只是習慣上將之稱為染色體。 2基因組中只有1個復制起點。 3、具有操縱子結構，由數個功能上相關聯的結構基因串聯、與相關的調控區(qū)組一起構成基因表達單位，轉錄產物為多順反子。 4、結構基因無重疊現象，基因組中的任何一段DNA順序不會用于編碼兩種蛋白質。 5、

23、基因序列是連續(xù)的，無內含子。 6、編碼區(qū)在基因組中所占的比例（約占50）遠遠大于真核基因組，非編碼區(qū)主要是一些調控序列。7、基因組中重復序列很少。編碼蛋白質的結構基因多為單拷貝，但編碼rRNA的基因往往是多拷貝的，這有利于核糖體的快速組裝。 8、具有編碼同工酶的基因（isogene）。這是一類結構上不完全相同，而功能相同的基因。例如在大腸桿菌中含有2個編碼乙酸乳酸合成酶同工酶的基因, 和2個編碼分支酸變位酶同工酶的基因。9、細菌基因組中存在著可移動的DNA序列，包括插入序列和轉座子。10、在DNA分子中具有多種功能的識別區(qū)域，如復制起始區(qū)、復制終止區(qū)、轉錄啟動區(qū)和終止區(qū)等，這些區(qū)域往往具有特殊

24、的序列，并且含有反向重復序列；真核基因組的結構和功能的特點 1、每種真核生物都有一定的染色體數目，除配子為單倍體外，體細胞一般為雙倍體。2、真核生物基因組遠遠大于原核生物的基因組，結構復雜，基因數龐大，具有許多復制起點，每個復制子大小不一。3、真核基因都由一個結構基因與相關的調控區(qū)組成，轉錄產物為單順反子，即一分子mRNA只能翻譯成一種蛋白質。真核生物中含有大量重復序列。4、真核生物基因組非編碼序列占90%以上。5、真核生物結構基因不連續(xù)，含內含子和外顯子，編碼序列被非編碼序列打斷。6、功能相關的基因構成各種基因家族，它們可串聯在一起，亦可相距很遠。7、真核生物基因組中也存在一些可移動的遺傳因

25、素。1）真核生物的基因組遠遠大于原核生物的基因組。2）真核生物基因具有許多復制起點，每個復制子大小不一。 原核生物只有一個復制起點。每一種真核生物都有一定的染色體數目，除了配子為單倍體外，體細胞一般為雙倍體，即含兩份同源的基因組，而原核生物的基因組則是單拷貝。3）真核基因都是由一個結構基因與相關的調控區(qū)域組成，轉錄產物為單順反子，即一分子mRNA只能翻譯成一種子蛋白質。原核基因具有操縱子結構。即幾個功能相關的結構基因串連在一起，連同它們的調控序列組成的一個轉錄單位。轉錄產物為多順反子。4）真核生物基因組中含有大量重復序列，而原核生物基因組除rRNA、tRNA基因外，重復順序不多。5）真核生物基

26、因組內非編碼序列占90%以上。基因組中非編碼序列所占比例是真核生物與細菌、病毒的重要區(qū)別。6）真核基因是斷裂基因，即編碼序列被非編碼序列間隔開來，基因內非編碼序列為內含子，被內含子隔開的非編碼序列則為外顯子。而原核基因是連續(xù)的，因此轉錄后不需要剪切。7）功能相關的基因構成各種基因家族。8）真核生物基因組中也存在一些可移動的遺傳因素，這些DNA順序并無明顯生物學功能，似乎為自己的目的而組織，故有私自DNA之稱，其移動多被RNA介導如逆轉座子，也有被DNA介導如DNA轉座子。 而細菌基因組中存在著可移動的DNA序列，包括插入序列和轉座子。7、 試舉例說明抑癌基因誘導腫瘤發(fā)生的基本原理。抑癌基因或抗

27、癌基因是一大類可以抑制細胞生長并具有潛在抑癌作用的基因。在癌的相應正常組織中有抑癌基因的正常表達，抑癌基因異常失活具有促進細胞惡性轉化的作用。抑癌基因異常失活的分子機制主要包括：1、基因組純合性或雜合性缺失導致抑癌基因失活；2、基因突變特別是點突變導致抑癌基因失活，最典型的是抑癌基因p53；3、癌蛋白作用導致抑癌蛋白失活，例如HPV的E6和E7分別與抑癌蛋白p53和RB結合使之失活；4、基因啟動子區(qū)高甲基化修飾導致抑癌基因失活等。癌基因失活可誘導腫瘤發(fā)生。抑癌基因失活的方式有以下幾種： 1）基因組純合性或雜合性缺失導致抑癌基因失活：如在家族性腺瘤性息肉病病人中，可見5q21位點純合性缺失，結果

28、在該位點發(fā)現并克隆鑒定了抑癌基因APC。 2）基因突變導致抑癌基因失活：基因突變，特別是點突變，是導致抑癌基因失活甚至轉變?yōu)榘┗虻闹饕獧C制之一。50%-60%的人類惡性腫瘤，如肺癌、胃癌等癌組織細胞中發(fā)現有P53基因突變。 3）癌基因作用導致抑癌基因蛋白失活：如SV40的大T抗原、腺病毒的E1B和高危型HPV的E6可以結合抑癌蛋白p53，使之失活，導致腫瘤發(fā)生。4） 基因啟動子區(qū)高甲基化修飾導致抑癌基因失活：抑癌基因啟動子區(qū)CpG島的高甲基化修飾是導致抑癌基因失活的重要分子機制之一。在許多腫瘤中，經?？梢詸z測到p16、p53等抑癌基因啟動子區(qū)CpG島高甲基化修飾變化，而且這往往是腫瘤發(fā)生的早

29、期事件。另一版本答案：8、 基因治療策略基因治療是通過在特定的靶細胞中有效表達重組目的基因達到治療的目的。策略如下：基因標記：奠定基因治療的臨床應用的基礎。（不含目的基因，但可追蹤回輸細胞在體內的命運）基因干預：采用特定方式抑制某個基因的表達，或者通過破壞某個基因使之不能表達，已達到治療目的。（反義RNA技術、核酶技術、RNA干擾技術、miRNA技術）基因置換：又稱基因矯正，將特定的目的基因導入到特定細胞，通過體內基因同源重組，替換致病缺陷基因，使胞內DNA恢復常態(tài)?；蛱砑樱河址Q基因增補，導入外源基因使靶細胞表達其本身不表達的基因。 總原則：直接補替缺陷基因；抑制非正?；虍a物表達；間接調節(jié)

30、機體本身免疫系統(tǒng)的抗病能力；利用外源基因對病變細胞造成特異性殺傷。 1. Gene correction（基因糾正）將致病基因的堿基進行糾正，而正常部分予以保留。 2. Gene replacement（基因置換）用正?；蛲ㄟ^體內基因同源重組，原位置換病變細胞內的致病基因，使細胞內的DNA完全恢復正常。 3. Gene augmentation（基因添加）將目的基因導入病變細胞或其它細胞，不去除異?；?，而是通過目的基因的非定點整合，使其表達產物補償缺陷基因的功能或使原有功能得以加強。 4. Gene interference（基因干預）利用反義技術特異封閉基因表達，抑制有害基因的表達。 5

31、、免疫調節(jié)：將抗體、抗原或細胞因子的基因導入病人體內，改變病人免疫狀態(tài)，達到預防和治療的目的。 6、調節(jié)性基因治療： 導入編碼調控蛋白的基因，治療基因表達異常的疾病。 7、化療保護性基因治療： 導入單相或多相細胞毒性藥物的抗性基因，使正常細胞耐受化療藥物的能力大大提高。 8、特異性細胞殺傷性基因治療：利用DNA重組技術構建特異性殺傷靶細胞為目標的“奇異彈頭”，“彈頭”部分是分子重組的各種生物細胞毒素，它們以酶催化方式發(fā)揮抑制蛋白合成作用，造成細胞殺傷。 9、生殖細胞基因治療：生殖細胞或胚胎干細胞補償性治療或：（一）基因標記：是指僅把標記基因導入人體。（二）基因干預：是指采用特定的方式抑制某個基

32、因的表達，或者通過破壞某個基因使之不能表達，以達到治療疾病的目的。包括1.反義RNA技術，2.核酶技術，3.RNAi技術，4.miRNA技術（三）基因置換：又稱為基因矯正，是指將特定目的基因導入特定細胞，通過體內基因同源重組，以導入的正常目的基因原位替換病變細胞內致病缺陷基因，使細胞內的DNA完全恢復正常狀態(tài)。（四）基因添加：也稱基因增補，通過導入外源基因使靶細胞表達其本身不表達的基因。9、試述DNA甲基化對基因轉錄的抑制作用。DNA甲基化在轉錄水平抑制基因表達，其分子機制包括以下幾種模型：一、DNA甲基化直接干擾轉錄因子與順式作用元件的結合。許多轉錄因子識別包括CpG的GC富集序列，當CpG

33、被甲基化后，其中一些轉錄因子就不能結合DNA，從而降低基因的轉錄效率。二、甲基化CpG結合蛋白（MBP）介導DNA甲基化對基因表達的沉默。MBP與甲基化的DNA結合后可通過3種方式抑制基因轉錄：在基因的啟動子區(qū)域，MBP與DNA結合阻礙了轉錄因子與其相應的順式作用元件結合，從而抑制了基因的轉錄；在基因內，MBP與甲基化的DNA結合阻止轉錄過程中RNA聚合酶的延伸；MBP通過招募共抑制復合物，改變染色質結構來調控基因表達。三、DNMT介導DNA甲基化對基因轉錄的抑制。除催化DNA甲基化外DNMT自身還參與抑制性染色質的形成，直接調節(jié)基因表達。10、試述轉錄因子的分類并簡述各類轉錄因子在真核基因轉

34、錄起始調控中的主要作用機制。機制：轉錄因子TF,又稱反式作用因子,包括:1、通用轉錄因子：機制：由通用TF和RNA 聚合酶相互作用而形成復合體，可專一識別被轉錄基因的啟動子，決定基因的轉錄起始點并啟動基因轉錄。TFIID結合于TATA盒是轉錄起始的第一步，其他TFII順序結合于TBP-TATA復合體，使被保護的DNA 區(qū)域延長，TFIIH輔助RNA聚合酶II起始轉錄。2、序列特異性TF，包括轉錄激活因子和轉錄抑制因子機制：轉錄激活因子，具有轉錄DNA結構結合域和轉錄激活結構域，通過與通用TF相互作用而發(fā)揮轉錄功能，通過結合特異的順式作用元件而激活轉錄，可通過共激活因子而起作用；轉錄抑制因子，通過改變染色質結構來發(fā)揮抑制作用，某些可通過干擾基礎轉錄裝置而發(fā)揮抑制作用，可通過抑制轉錄激活因子的功能而發(fā)揮抑制作用。3輔助TF機制：包括共激活因子和共抑制因子，自身不與DNA結合，而是通過蛋白質相互作用連接TF和基礎轉錄裝置發(fā)揮作用調節(jié)染色質結構改變的TF4、 調節(jié)染色質結構改變的TF。DNA甲基化雖然沒有改變核苷酸順序及其組成，但可以在轉錄水平抑