標(biāo)本溶血對(duì)ELISA檢測(cè)乙肝表面抗原的影響

1、標(biāo)本溶血對(duì)ELISA檢測(cè)乙肝表面抗原的影響【關(guān)鍵詞】 乙肝 在臨床檢測(cè)中，常常遇到溶血的標(biāo)本。溶血對(duì)ELISA檢測(cè)乙肝表面抗原（HBsAg）究竟是否有影響，各文獻(xiàn)報(bào)道很不一致，本文對(duì)標(biāo)本溶血的原因及其對(duì)ELISA檢測(cè)乙肝表面抗原的影響進(jìn)行簡要的討論。1 標(biāo)本溶血的原因溶血是臨床檢驗(yàn)中最常見的一種干擾和影響因素。溶血可分為體內(nèi)溶血和體外溶血 1 。體內(nèi)溶血可由物理因素（如人工心臟瓣膜或大血管手術(shù)后）、化學(xué)因素（如惡性瘧）和藥物毒性反應(yīng)等因素引起。體外溶血可由物理因素（抽血時(shí)負(fù)壓過大、水浴溫度過高、冰凍、振蕩等機(jī)械性破壞）、化學(xué)因素（血樣接觸表面活性劑）和代謝因素（如遺傳病引起紅細(xì)胞脆性增加）引起

2、。在臨床上常見的引起標(biāo)本溶血的原因包括 2 :由于病人嚴(yán)重脫水、低血容量休克等原因?qū)е麓┐汤щy造成的溶血;由于抽血器具質(zhì)量不合格如真空管負(fù)壓不夠或塑料試管質(zhì)量較差導(dǎo)致的溶血;用干燥管采血為了盡快分離血清用竹簽攪拌不當(dāng)引起的溶血等。2 標(biāo)本溶血對(duì)乙肝表面抗原檢測(cè)的影響一些研究沒有發(fā)現(xiàn)標(biāo)本溶血對(duì)HBsAg檢測(cè)的影響。李穗芬 3 對(duì)20例HBsAg陰性和10例HBsAg陽性病人的溶血和非溶血標(biāo)本包括10例OD值在臨界值附近的標(biāo)本進(jìn)行了對(duì)照，結(jié)果非溶血和溶血標(biāo)本的陰、陽性結(jié)果完全一致。20例HBsAg陰性和10例OD值在臨界值附近的樣本，溶血與對(duì)應(yīng)非溶血標(biāo)本OD值間差異沒有顯著性;10例HBsAg陽性

3、樣品，溶血標(biāo)本OD值明顯大于對(duì)應(yīng)非溶血標(biāo)本OD值。因此得出結(jié)論，標(biāo)本溶血不影響HBsAg結(jié)果的判定，只是使HBsAg陽性標(biāo)本的OD值提高。許斌等 4 對(duì)HBsAg強(qiáng)陽性樣品的非溶血與溶血（Hb濃度為241g/L）標(biāo)本的A值作了對(duì)照后未發(fā)現(xiàn)兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，得出結(jié)論:溶血對(duì)HBsAg的檢測(cè)沒有影響（嚴(yán)格意義上應(yīng)表述為:溶血對(duì)HBsAg強(qiáng)陽性標(biāo)本的檢測(cè)沒有影響）。單桂秋等 5 的研究也顯示，HBsAg陽性樣品的非溶血與溶血標(biāo)本的A值間經(jīng)t檢驗(yàn)差異無顯著性。其他的一些研究則發(fā)現(xiàn)，溶血對(duì)HBsAg的檢測(cè)有影響。錢厚明等 6 發(fā)現(xiàn)，在17例溶血標(biāo)本中，初檢的5例HBsAg陽性標(biāo)本，經(jīng)重新抽血復(fù)檢后有2例

4、仍為陽性，另3例轉(zhuǎn)陰。認(rèn)為是溶血導(dǎo)致了假陽性的出現(xiàn)。劉玉振等 7 研究發(fā)現(xiàn)，溶血對(duì)HBsAg的檢測(cè)有影響，當(dāng)紅細(xì)胞濃度>25%造成的溶血可導(dǎo)致假陽性。龍憲和等 8 研究發(fā)現(xiàn)，無論在健康人還是乙肝病毒感染者中，溶血均導(dǎo)致了ELISA一步法檢測(cè)HBsAg假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，而采用二步法則可以保證結(jié)果判讀無誤。3 標(biāo)本溶血對(duì)乙肝表面抗原檢測(cè)影響的可能機(jī)制溶血是由于各種原因造成紅細(xì)胞破壞，胞內(nèi)血紅蛋白（Hb）等物質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液進(jìn)入血清。溶血對(duì)ELISA的影響主要是反應(yīng)孔對(duì)溶血血清中Hb的非特異性吸附和溶血時(shí)細(xì)胞內(nèi)液對(duì)血清的稀釋作用。單桂秋等 5 的實(shí)驗(yàn)也證明了溶 血對(duì)血清具有稀釋作用。 在E

5、LISA試驗(yàn)中，酶標(biāo)反應(yīng)板孔包被物的濃度是一個(gè)相對(duì)定值，抗原抗體反應(yīng)存在最適比例和后帶現(xiàn)象，因此，HBsAg濃度與A值只是在一定的范圍內(nèi)呈一定的線性關(guān)系;當(dāng)HBsAg達(dá)到一定濃度時(shí)A值的變化進(jìn)入平臺(tái)期;當(dāng)HBsAg濃度太高時(shí)，A值反而會(huì)降低。因此，溶血可以使HBsAg濃度很高的樣品的A值升高（在一定程度上解決了后帶現(xiàn)象）;當(dāng)HBsAg濃度與A值呈線性關(guān)系時(shí)才會(huì)因溶血的稀釋作用使A值下降;當(dāng)HBsAg濃度近臨界值時(shí)，可能造成假陰性。Hb具有類過氧化物酶活性，其作用與辣根過氧化物酶類似，如果反應(yīng)孔非特異吸附Hb而殘留，則可催化底物顯色，使本底A值升高甚至造成假陽性。如果洗滌質(zhì)量好，則可能大大減少或

6、排除非特異性吸附的干擾。單桂秋等 5 的實(shí)驗(yàn)未體現(xiàn)血中Hb非特異性吸附的影響。龍憲和等 8 采用二步法操作可以排除溶血釋出的Hb對(duì)HBsAg檢測(cè)的影響也說明洗板質(zhì)量在ELISA檢測(cè)中的重要性?？傊?，溶血對(duì)ELISA檢測(cè)HBsAg有一定的影響，影響的性質(zhì)及其大小因所使用的試劑、測(cè)定方法、標(biāo)本HBsAg的有無及濃度高低、洗板的質(zhì)量好壞而異。參考文獻(xiàn)1 靳敏.溶血對(duì)臨床生化檢驗(yàn)影響的探討.廣西醫(yī)學(xué)，2002，24（9）:1363-1364.2 張小潔，劉建芝.真空采血標(biāo)本溶血原因分析及預(yù)防措施.護(hù)士進(jìn)修雜志，2001，16（3）:180.3 李穗芬.標(biāo)本溶血對(duì)乙肝表面抗原檢測(cè)的影響.廣州醫(yī)藥，2001，32（5）:65.4 許斌，朱虎定.ELISA檢測(cè)HBsAg影響因素的探討.臨床檢驗(yàn)雜志，2000，18（4）:232.5 單桂秋，蘇建婷.溶血及脂濁樣品對(duì)ELISA檢測(cè)乙肝表面抗原的影響.臨床檢驗(yàn)雜志，1999，17（2）:102-103.6 錢厚明，趙江燕，張燕.應(yīng)重視ELISA檢測(cè)HBsAg灰區(qū)范圍內(nèi)樣品的復(fù)檢.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2002，17（3）:156.7 劉玉振，張淑琴，馬宏偉.溶血對(duì)抗-HCV、