有關(guān)物質(zhì)方法學驗證pdf

1、有關(guān)物質(zhì)方法學驗證(HPLC法一、檢測波長與流動相條件的確定。一般有國家標準的并不改變國家標準,可直接參照國家標準,可不做。確實有需要的,檢測波長一般用紫外掃描確定,流動相可以多種流動相比較確定,選取其中最合適的。二、系統(tǒng)適用性取樣品,按照有關(guān)物質(zhì)供試品濃度配制溶液,進樣,記錄圖譜。理論板數(shù)應(yīng)符合規(guī)定,分離度應(yīng)大于2.0或符合規(guī)定、拖尾因子應(yīng)0.8-1.2或符合規(guī)定。有已知雜質(zhì)并且雜質(zhì)對照品可獲得的:配制6份相同濃度的雜質(zhì)溶液進行分析,該雜質(zhì)峰峰面積的相對標準差應(yīng)不大于2.0%,保留時間的相對標準差應(yīng)不大于1.0%。另外,理論板數(shù)應(yīng)符合規(guī)定,分離度應(yīng)大于2.0或符合規(guī)定、拖尾因子應(yīng)0.8-1.

2、2或符合規(guī)定。三、專屬性1、空白溶劑干擾試驗。取溶解樣品用的溶劑,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。觀察溶劑圖譜情況。有輔料的,做空白輔料試驗。2、降解試驗降解對照品溶液:取樣品,按照有關(guān)物質(zhì)供試品濃度配制溶液,進樣,記錄圖譜。高溫降解溶液:取樣品,按照有關(guān)物質(zhì)供試品濃度配制溶液,于一定溫度水浴中放置一段時間,補充溶劑至刻度,濾過,進樣,記錄圖譜。酸降解溶液:取樣品,置量瓶中,加入適量流動相溶解,再加入少量一定濃度鹽酸溶液,常溫放置或于一定溫度水浴中放置一段時間,取出,冷卻,加同濃度氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)p H值至中性,再加溶劑稀釋至刻度,濾過,進樣,記錄譜圖。有輔料的,做空白輔料酸破壞對照。堿降解溶液:

3、取樣品,置量瓶中,加入適量流動相溶解,再加入少量一定濃度氫氧化鈉溶液,常溫放置或于一定溫度水浴中放置一段時間,取出,冷卻,加同濃度鹽酸溶液調(diào)節(jié)p H值至中性,再加溶劑稀釋至刻度,濾過,進樣,記錄譜圖。有輔料的,做空白輔料堿破壞對照。過氧化氫降解溶液:取樣品,置量瓶中,加入適量流動相溶解,再加入少量雙氧水,常溫放置或于一定溫度水浴中放置一段時間,取出,冷卻,加溶劑稀釋至刻度,濾過,進樣,記錄譜圖。有輔料的,做空白輔料氧化破壞對照。3、中間體、降解物、已知其它雜質(zhì)與主成分的分離度試驗及定位試驗取中間體配置成一定濃度,進樣,記錄圖譜。取降解對照品溶液,加入少量中間體,進樣,記錄圖譜。取降解物配置成一

4、定濃度,進樣,記錄圖譜。取降解對照品溶液,加入少量降解物,進樣,記錄圖譜。取已知其他雜質(zhì)配置成一定濃度,進樣,記錄圖譜。取降解對照品溶液,加入少量已知雜質(zhì)對照品,進樣,記錄圖譜。可接受的標準:空白對照應(yīng)無干擾,主峰與雜質(zhì)峰應(yīng)完全分離,已知雜質(zhì)峰與其它峰應(yīng)能完全分離,分離度不得小于2.0。四、檢測限與定量限一般采用信噪比法。取對照品,加溶劑稀釋至很小濃度,進樣,記錄圖譜,觀察信噪比。信噪比10:1,為定量限;信噪比為3:1,為檢測限。有已知雜質(zhì)并且雜質(zhì)對照品可得的,須用已知雜質(zhì)對照品同時做。可接受標準:雜質(zhì)峰與噪音峰信號的強度比應(yīng)不得小于3。雜質(zhì)峰與噪音峰信號的強度比應(yīng)不得小于10。另外,配制6

5、份最低定量限濃度的溶液,所測6份溶液雜質(zhì)峰保留時間的相對標準差應(yīng)不大于2.0%,峰面積的相對標準差應(yīng)不大于5.0%。五、線性關(guān)系試驗取對照品,配制成一定濃度(大于自身對照濃度貯備液,精密稀釋,或分別精密稱樣,制備一系列被測物質(zhì)濃度系列進行測定,至少制備 5個濃度。上述被測物質(zhì)濃度系列,以自身對照溶液濃度為中間濃度,向兩邊梯度延伸。比如先配制成自身對照溶液濃度兩倍的溶液,分別量取3、4、5、6、7m l置10m l 量瓶中,即得到相對濃度為60%、80%、100%、120%、140%(相對于自身對照濃度的系列溶液。取該系列溶液進樣,記錄色譜圖,計算回歸方程。若有已知雜質(zhì)并且雜質(zhì)對照品可得的,則取

6、已知雜質(zhì)對照品另作線性關(guān)系試驗,供試品中已知雜質(zhì)峰面積,應(yīng)在線性范圍內(nèi)。一般,此類線性關(guān)系試驗濃度從定量限濃度起,至雜質(zhì)對照品溶液濃度的120%或更高。可接受的標準為:回歸線的相關(guān)系數(shù)(R不得小于0.9990。六、精密度1、重復(fù)性無已知雜質(zhì)的。取樣品,配制成自身對照濃度,由同一人員在相同操作條件下,連續(xù)進樣6次,記錄圖譜,計算r s d。有已知雜質(zhì)的。取雜質(zhì)對照品溶液,由同一人員在相同操作條件下,連續(xù)進樣6次,記錄圖譜,計算r s d?？山邮艿臉藴蕿?r s d不得大于2.0%。2、中間精密度A、取樣品,由不同人員,在不同時間,使用不同儀器,按照測定法測定同一樣品的有關(guān)物質(zhì)。計算檢查結(jié)果的R

7、S D。R S D不大于2.0%。可以5名人員分別使用5臺儀器,于不同工作日測定。儀器也可3臺。B、配制6份雜質(zhì)濃度(一般為0.1%相同的供試品溶液,分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試。R S D不大于2.0%。七、溶液穩(wěn)定性取供試品溶液,規(guī)定條件下放置8小時,分別于0、2、4、6、8小時進樣,記錄色譜圖,觀察主峰峰面積變化并計算R S D,觀察主要雜質(zhì)及總雜質(zhì)峰面積變化并計算R S D,觀察是否有新雜質(zhì)。確定溶液是否穩(wěn)定,不穩(wěn)定的應(yīng)注明立刻進樣。取自身對照溶液同法測定。有已知雜質(zhì)的,應(yīng)另取雜質(zhì)對照品溶液同法測定。八、準確度一般以回收率試驗進行驗證。無已知雜質(zhì)的,可不做。有已知雜質(zhì)

8、的,須做加樣回收試驗驗證準確度。例如某雜質(zhì)的限度為0.2%,取已知雜質(zhì)含量的樣品適量9份,分別加入0.1 %、0.2%和0.3%的雜質(zhì)(各三份,稀釋到有關(guān)物質(zhì)供試品溶液濃度。每個樣品進一針,記錄色譜圖。另取雜質(zhì)對照品,按照標準配制成雜質(zhì)對照品溶液,進樣,記錄色譜圖。計算回收率。該項目的可接受的標準為:各濃度下的平均回收率均應(yīng)在80%-120%之間,如雜質(zhì)的濃度為定量限,則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%,相對標準差應(yīng)不大于10%。九、耐用性分別考察流動相比例變化±5%、流動相p H值變化±0.2、柱溫變化±5、檢測波長變化±5n m、流速相對值變化±20%以及采用三根不同批號的色譜柱進行測定時,儀器色譜行為的變化,每個條件下各測試兩次。可接受的標準為:各雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0,雜質(zhì)峰與其他成分峰必須達到基線分離;各條件下的雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)(n=6的相對標準差應(yīng)不大于2.0%,雜