初始污染菌實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證

1、初始污染菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證方案產(chǎn)品名稱：一次性包皮環(huán)切縫合器編制： 日期： 審核： 日期： 批準(zhǔn)： 日期： 江西狼和醫(yī)療器械股份限有限公司名目初始污染菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證方案1概述2驗(yàn)證目的3職責(zé)與驗(yàn)證申請(qǐng)4驗(yàn)證依據(jù)5驗(yàn)證方案6驗(yàn)證內(nèi)容初始污染菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證方案1.概述：初始污染菌的數(shù)量可以反映出車間環(huán)境衛(wèi)生的清潔度，與產(chǎn)品滅菌工藝、成品熱原及內(nèi)毒素有直接關(guān)系，故而要對(duì)其檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證，確認(rèn)其有效性及檢測(cè)精確性，從而優(yōu)化產(chǎn)品滅菌工藝及把握產(chǎn)品熱原及內(nèi)毒素，確保產(chǎn)品的平安性。2.目的： 通過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證檢測(cè)方法的適用性及計(jì)數(shù)用培育基的適用性。3.職責(zé)與驗(yàn)證申請(qǐng)：3.1質(zhì)量管理部供應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目方案、接收標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)

2、價(jià)等級(jí)及相關(guān)試驗(yàn)。3.2生產(chǎn)技術(shù)部負(fù)責(zé)按驗(yàn)證方案生產(chǎn)相關(guān)樣品初始污染菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證申請(qǐng)表驗(yàn)證組姓名職務(wù)單位黃燕組長(zhǎng)質(zhì)量管理部經(jīng)理江西狼和醫(yī)療器械股份有限公司龍章宏組員化驗(yàn)員蘇俊組員化驗(yàn)員胡梓鵬組員化驗(yàn)員批 準(zhǔn)經(jīng)爭(zhēng)辯：同意以上成員組成驗(yàn)證小組，依據(jù)此方案對(duì)本公司的產(chǎn)品的初始污染菌試驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證。批準(zhǔn)人： 年 月 日4.依據(jù)：中國(guó)藥典2015版5.驗(yàn)證方案：5.1試驗(yàn)操作人員確認(rèn)；5.2試驗(yàn)室試驗(yàn)設(shè)備及器材的確認(rèn)；5.3產(chǎn)品取樣及方法確認(rèn)。6.驗(yàn)證內(nèi)容：6.1菌種和菌液制備6.1.1 菌種 試驗(yàn)用菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5 代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0 代），并接受適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行

3、保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。6.1.2菌液制備接種金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌的培育物至胰酪大豆胨液體培育基中或胰酪大豆胨瓊脂培育基上，3035培育1824小時(shí)；接種白色念珠菌的培育物至沙氏葡萄糖液體培育基中或沙氏葡萄糖瓊脂培育基上，2025培育2-3天，上述培育后的新穎培育物用PH7.0無(wú)菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌化鈉溶液制成每lml菌數(shù)小于100cfu(菌落形成）的菌懸液。接種黑曲霉的培育物至沙氏葡萄糖瓊脂面培育基上，2025培育57天，加人35 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后

4、，接受適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0無(wú)菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每lml孢子數(shù)量小于100cfu的孢子懸液。菌懸液若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在28 在24h 內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液存在28，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)用。6.2計(jì)數(shù)培育基適用性檢查6.2.1需氧菌的計(jì)數(shù)分別取1ml的金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌懸液，接種至胰酪大豆胨液體培育基管或胰酪大豆胨瓊脂培育基平板。金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌在30-35，培育不超過(guò)3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25，培育不超

5、過(guò)5天。每一試驗(yàn)菌株平行制備2 管或2 個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)比培育基替代被檢培育基進(jìn)行上述試驗(yàn)。6.2.2霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)分別取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌懸液，接種至沙氏葡萄糖瓊脂培育基。在20-25，培育不超過(guò)5天。每一試驗(yàn)菌株平行制備2 管或2 個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)比培育基替代被檢培育基進(jìn)行上述試驗(yàn)。6.2.2結(jié)果判定被檢固體培育基上的菌落平均數(shù)與對(duì)比培育基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2 范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)比培育基上的菌落全都；被檢液體培育基管與對(duì)比培育基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好。6.3計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)6.3.1供試液的制備：洗脫液用0.9%的滅菌生理鹽水，檢

6、品液制備在10000級(jí)環(huán)境中進(jìn)行。6.3.2 接種和稀釋按下列要求進(jìn)行供試液的接種和稀釋,制備微生物回收試驗(yàn)用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過(guò)供試液體積的1%。為確認(rèn)供試品中的微生物能被充分檢出，首先應(yīng)選擇最低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。（1）試驗(yàn)組 取上述制備好的供試液，加入試驗(yàn)菌液，混勻，使每1ml供試液或每張濾膜所濾過(guò)的供試液中含菌量不大于100cfu。（2）供試品對(duì)比組 取制備好的供試液, 以稀釋液代替菌液同試驗(yàn)組操作。（3）菌液對(duì)比組 取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液,按試驗(yàn)組操作加入試驗(yàn)菌液并進(jìn)行微生物回收試驗(yàn)。若因供試品抗菌活性或溶解性較差的緣由導(dǎo)致無(wú)法選擇最低

7、稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)接受適宜的方法對(duì)供試液進(jìn)行進(jìn)一步的處理。假如供試品對(duì)微生物生長(zhǎng)的抑制作用無(wú)法以其他方法消退，供試液可經(jīng)過(guò)中和、稀釋或薄膜過(guò)濾處理后再加入試驗(yàn)菌懸液進(jìn)行方法適應(yīng)性試驗(yàn)。 6.3.3 抗菌活性的去除或滅活供試液接種后，按下列“微生物回收”規(guī)定的方法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)。若試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)比組菌落數(shù)的值小于菌液對(duì)比組菌數(shù)值的50%，可接受下述方法消退供試品的抑菌活性。 增加稀釋液或培育基體積。 加入適宜的中和劑或滅活劑。6.3.4 微生物的回收依據(jù)6.2的計(jì)數(shù)培育基所用的試驗(yàn)菌逐一進(jìn)行微生物回收試驗(yàn)，回收試驗(yàn)接受平皿法和薄膜過(guò)濾法。6.3.4.1 平皿法-傾注

8、法取6個(gè)直徑90mm 的無(wú)菌平皿。2個(gè)分別注入照上述“試驗(yàn)組”制備的供試液1ml；2個(gè)分別注入照上述“供試品對(duì)比組”制備的供試液1ml；2個(gè)分別注入照上述“菌液對(duì)比組”制備的供試液1ml。每個(gè)平皿注入1520ml 溫度不超過(guò)45熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培育基，混勻，凝固，倒置培育。6.3.4.2 薄膜過(guò)濾法薄膜過(guò)濾法所接受的濾膜孔徑應(yīng)不大于 0.45m,直徑一般為50mm,若接受其他直徑的濾膜,沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。選擇濾膜材質(zhì)時(shí)應(yīng)保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)接受適宜的方法滅菌。使用時(shí),應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后,若需要用沖洗液沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量一般為100ml。總沖洗量不得超過(guò)1000ml,以避開(kāi)濾膜上的微生物受損傷。取照上述 “試驗(yàn)組”、“供試品對(duì)比組”和“菌液對(duì)比組”制備的供試液適量（一般取相當(dāng)于1g、1ml 或10cm2 的供試品, 若供試品中所含的菌數(shù)較