人乳頭瘤病毒(HPV)疫苗的研究進展.docx

1、白,相信隨著人類基因組計劃的順利完成和各個基因功能的明確,IgA-N的相關(guān)基因必將得到充分闡明。參考文獻呂繼成，張宏，陳育青，等.家族性IgA腎病-777例中國IgA回顧調(diào)查分析J.中華腎臟病雜志,2004,20：57.1 TurnerMW.Mannoee-bindinglectin；thepluripotentmdeculeoftheinnateimmunesystemJ.ImmunolToday,1996,17(11)：532-540.2 GonqR,LiuZ,ChenZ,etal.Mannose-bindingproteingenepol-ymoiphisininfluencesthep

2、atternsofglomerularimmunedepoeitioninIgAnephropalhyJ,ZhoniuaYiXueYiChuanXueZaZhi,2001,18(2):83-87.3 GongR,LiuZ,ChenZ,etal.Geneticvariationofmannoee-bind-ingproteinaaeociatedwithglomendarimmunedepo«itioainIgAaephropa-thyJ.ChinMedJ(Engl),2002,115(2):192-196.4 ZhanZ,KunduGC,ZhengF,etal.Insiitintot

3、hephysiologicalfunction(s)ofuteroglobinbygene-knockoutandantiscnse-traiugenicap-proflches(J.AnnNYAcadSci,2000,923：210-213.5 MatsunagaA,NumakuraC,KawakamiT,etal.AssocialionoftheuteroglobingenepolymorphismwithIgAnephropathyJ.AmJKidneyDis,2002,39(1):3641.6 NaritaI,SaitoN,GotoS,elal.RoleofuteroglobinG38

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5、A腎病患者UG基因G38A基因多態(tài)性與臨床和8(后的關(guān)系J.中華內(nèi)科雜志,2004,43(1):3740.10TatsumaN,TsuH,MurakamiM.HLA-DQregionandTCRgenepolymorphismaraociatedwithprimaryIgAnephropathyinJapanesechildrenJ.NipponJinzoGakkaiShi,1997,39(7)：734-739.11LiPK,PoonP,PhilM,etal.AssociationofIgAnephropathywithT-cellreceptorconstantalphachaingenep

6、olymorphiiunJ.AmJKidneyDis,1997,30(2)：260-264.12薛超,李幼姬，李彩，等.TCRCa-560G/T多態(tài)性與I«A腎病臨床病理的關(guān)聯(lián)分析J.第四軍醫(yī)大學學報，2005,26(10)：897-900.13 GotoS,NaritaI,SaitoN,etal.A(-20)CpolymorphismoftheangiotensinogcngeneandprogreasionofIgAnephropathyJ.KidneyInt,2002,62(3):980-985.14 Narita1,GotoS,SaitoN,ctal.Angiotensino

7、gengenevariationandrenoprotectiveefficacyofrenin-anolensinsystemblockadeinIgAnephropathyJ.KidneyInt,2003,64(3):1050-1058.15 HardenPN,GeddesC,RowePA,etal.Polj-nxxphismsinangio-tenain-converting-enzymegeneandprogressionofIgAnephropathyJ.Lancet,1995,345(8964):1540-1542.16 陳香美.劉述文.血管緊張素轉(zhuǎn)換酵基因多態(tài)性與IgA腎病的相關(guān)

8、性研究J.中華醫(yī)學雜志,1997,110(7)：526-528.17 SyijanenJ,HurmeM,LehtimakiT,etal.PolymorphismofthecytokinegenesandIgAnephropathyJ.KidneyInt,2002,61(3)：1079-1085.18 WatanabeM,IwanoM,AkaiY,etal.Associationofinterleukin-1receptorantagonistgenepolymorphismwithIgAnephropathyJ.Nephron,2002,91(4):744-746.19 LeeEY,YangD

9、H,HwangKY,etal.Istumornecro*isfactorgenotype(TNFA2/TNFA2)ageneticprognosticfactorofanunfavorableoutcomeinIgAnephropalhy?J.JKoreanMedSci,2001,16(6)；751-755.20 倪紅兵，張芹，鞠少卿，等.IgA腎病與腫瘤壞死因子B基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)性研究J.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志,2004,19(5):14-16.21MaixmeroviD,MertaM,Reitcrov。J,etal.Theinfluenceofthreeendothelin-lpolymorph

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12、0.3969/j.isan.1008-9810.2013.04.033人乳頭1病毒(HPV)疫苗的研究進展(文獻綜述)解放軍第二五三醫(yī)院(010051)海HPV是引起女性宮頸癌的DNA病毒，本文簡要回原了HPV的發(fā)現(xiàn)過程，并對HPV預防性疫苗與治療性疫苗的研究現(xiàn)狀綜述如下。1關(guān)于HPVHPV的發(fā)現(xiàn)及其危害1976年，德國著名病毒學家1.免疫中心；2.體檢中心峰'白梅2孟和寶力高'顫爾頓'HaraldzurHausen博士提出HPV與宮秘癌發(fā)病可能有關(guān)的假設(shè)后，拉開了宮頸癌病因研究的新篇章。此前，早在19世紀40年代，意大利醫(yī)師DomenicoRigoni-stem從死亡

13、登記資料分析中發(fā)現(xiàn)，患宮頸癌的婦女大多數(shù)為已婚者，未婚者很少，修女幾乎不患宮頸癌，因此，他根據(jù)疾病分布原理建立病因假說,認為結(jié)婚與否與宮頸癌發(fā)生有關(guān)。1968年，Dunn等進一步證明，人生殖器疣組織內(nèi)有病毒顆粒存在。1970年,Oriel等在此基礎(chǔ)上又進一步證明，所有引起疣的病毒都屬于含DNA的HPV病毒-20世紀（6070）年代，人們將主要目光投向在體外被證實具有一定致癌性的單純皰疹病毒（HSV）,且在宮頸癌標本中有定的檢出率，但臨床活體標本能檢出HSV的始終只占其中一小部分,流行病學調(diào)查不支持與宮頸癌相關(guān)，而巨細胞病毒（CMV）.EB病毒、衣原體等至今未發(fā)現(xiàn)有力的證據(jù)。1983年,Hara

14、ldzurHausen終于從宮頸癌患者活檢組織中首次分離出HPV16型病毒，并發(fā)現(xiàn)了新的可引起人類腫府的HPV亞型，1984年，他成功地克隆了HPV16型和18型病毒基因組，以及檢測到與人的腫痛細胞整合后的特定HPVDNA基因的表達，首先證實HPV是引起宮頸癌病因的學說3。目前,多數(shù)宮頸癌標本中可檢測到HPV基因組或基因片段,90%以上的宮頸癌合并HPV感染，1995年國際癌癥協(xié)會（IARC）專題討論會的學者們認為,HPV感染是宮頸癌的主要病因。宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計，世界范閣內(nèi)每年約有50萬左右的宮頸癌新發(fā)病例，其中約有20多萬女性死于該疾病。新發(fā)病例的80%來自發(fā)展中國家，

15、其中我國每年新發(fā)病例約13.15萬，占世界宮頸癌新發(fā)病例總數(shù)的28.8%,且近年來呈現(xiàn)地區(qū)增長及發(fā)病年齡提前的現(xiàn)象，特別是近年來年輕宮頸癌患者有明顯上升趨勢，發(fā)病率以每年約2%3%的速度增長6刁。1.1 HPV流行病學特點HPV呈球形，無包膜，呈多面體立體對稱的核衣殼結(jié)構(gòu)，直徑約為（4560）nm,表面有72個充微粒，內(nèi)含8000個堿基對（bp）,分子最為5x106D,其中88%是病毒蛋白。在發(fā)現(xiàn)的HPV型約有一百多種亞型，根據(jù)其致病性差異,可分為低危型HPV（如6、11亞型等）和高危型HPV（如16、18、58亞型等）。低危型HPV主要引起生殖道肛周皮膚和陰道下部的外生性濕疣類病變、扁平濕疣

16、類病變和輕度子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN1）,而高危型HPV主要導致中度子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN2）、重度子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN3）和宮頸癌的發(fā)生。目前主要檢測的方法為導流雜交法。2關(guān)于HPV疫苗HPV基因結(jié)構(gòu)及功能HPV基因組是雙鏈環(huán)狀DNA,以共價閉合的超螺旋結(jié)構(gòu)、開放的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、線性分子3種形式存在。HPV基因組編碼為9個開放讀碼框架，分為3個功能區(qū)即早期轉(zhuǎn)錄區(qū)、晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)和非轉(zhuǎn)錄區(qū)（控制區(qū)）。早期轉(zhuǎn)錄區(qū)又稱為E區(qū)，由4500個堿基對組成，分別編碼為E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7、E8等8個早期蛋白，具有參與翹毒DNA的復制、轉(zhuǎn)錄、翻譯調(diào)控和細胞轉(zhuǎn)化等功能。晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)又稱為L區(qū)，

17、由2500個堿基對組成，編碼2個衣殼蛋白即主要衣殼蛋白L1和次要衣殼蛋白",組成病毒的衣殼，且與病毒的增殖有關(guān)。非轉(zhuǎn)錄區(qū)又稱為上游調(diào)節(jié)區(qū)、非編碼區(qū)或長調(diào)控區(qū)，由1000個堿基對組成，位于E8和L1之間。該區(qū)含有HPV基因組DNA的復制起點和HPV基因表達所必需的調(diào)控元件,以調(diào)控病毒的轉(zhuǎn)錄與復制。HPV基因組主要功能見表1。1.1 HPV疫苗日前,HPV疫苗主要分三類:一是阻止感染的預防性疫苗;二是使原有感染及相關(guān)疾病消退的治療性疫苗;三是預防多種疾病的HPV嵌合疫苗。預防性疫苗是將HPV的晚期結(jié)構(gòu)蛋白L1、E2作為基礎(chǔ)誘導，產(chǎn)生特異性的抗HPV抗體，從而使機體免受HPV感染2】

18、76;這類疫苗主要用于接種尚未發(fā)生感染的人群;而治療性疫苗，目的則是清除HPV感染的細胞。這種疫苗以E6、E7蛋白為基礎(chǔ)，誘導產(chǎn)生特異的細胞免疫,來阻止HPV感染損害的延續(xù)，清除病灶嵌合疫苗則是新的研究熱點，不同型別、不同時期蛋白的嵌合，將大幅提高預防效能。表1HPV基因組主要功能基因名稱主要功能E1復制、復制抑制E2激活轉(zhuǎn)錄（HPV6、11、16）抑制轉(zhuǎn)泉，結(jié)合長控區(qū)E3未知其產(chǎn)物成功能E4HPV11引起之疣的細胞蛋白E5轉(zhuǎn)化作用（HPV6）E6協(xié)同E7轉(zhuǎn)化作用（HPV16和HPV18）E7協(xié)同E6轉(zhuǎn)化作用（HPV16和HPV18）轉(zhuǎn)錄激活（HPV16）E8未知其產(chǎn)物或功能,可能參與復制L1

19、主要衣殼蛋白12次次衣殼蛋白2.2.1預防性疫苗HPV疫苗的研究實踐經(jīng)歷了一個漫長而艱苦的過程，因為HPV僅在人體內(nèi)復制，很難進行人工培養(yǎng),其基因組包含3種強力致癌基因，故即使是滅活HPV疫苗也不能在人體內(nèi)使用。1984年HaraldzurHausen證實，宮頸癌致病原因后，曾經(jīng)游說一些組織致力于HPV疫苗的研究，但未得到重視。隨著乙型肝炎病毒疫苗的研發(fā)成功和廣泛應用，啟示科學家們將研究目標放在主要和次要病毒衣殼抗原的基礎(chǔ)上開發(fā)HPV疫苗。1991年，澳大利亞和美國科學家分別在實驗室中合成出HPV16型病毒樣顆粒，此后又陸續(xù)得到了其他型別病毒樣顆粒，在此基礎(chǔ)上，針對晚期表達產(chǎn)物L1的HPV預防

20、性疫苗才研制成功。2006年6月8日，美國食品與藥品管理局（FDA）批準默克公司的HPV6、】1、16、18四價疫苗（Gardasil）用于預防該4型HPV感染引起的宮頸癌、生殖道癌前病變和生殖器疣。同年，美國得克薩斯州州長簽署命令，強制要求該州所有6年級女學生接種HPV疫苗。2007年9月24日，歐盟委員會批準葛蘭素史克公司的HPV6J1型二價疫苗（Cervarix）上市”幻。這兩種疫苗對于HPV16型和18型的保護作用達到了99%,保護時間可能長達20年。疫苗上市后安全性監(jiān)測數(shù)據(jù)也顯示，兩種疫苗接種后安全性也較好。目前已在100多個國家上市，有的還納入到國家免疫規(guī)劃實行免費接種，主要用于青

21、春期女孩和年輕女性（9-26歲）。WHO、美國疾病控制中心、歐洲醫(yī)學機構(gòu)等6個國家多個部門均認為HPV疫苗是安全有效的，應積極促進其在全球發(fā)達或發(fā)展中國家進行接種'E。HPV主要通過內(nèi)吞作用進入宿主細胞，衣殼蛋白L1和12在此過程中發(fā)揮了重要作用另外,HPV的衣殼蛋白與其他病毒的衣殼蛋白相比，具有顯著的不同特點是HPV的衣殼蛋白具有較強的保守性。這種保守性表現(xiàn)在兩個方面:病毒的衣殼在選擇壓力等外界環(huán)境的作用下變異很小，而其他病毒變異較大;不同型的HPV的L1蛋白的氨基酸序列的同源性在60%以上。以上兩種疫苗是針對引起官頸癌的HPV16J8和引起尖銳濕疣和外陰炎的HPV6J1的通用疫苗，

22、預防機制在于通過誘導機體產(chǎn)生中和性抗體預防HPV感染，是經(jīng)過幾期臨床試驗后批準上市的,均由衣殼抗原L1重組表達系統(tǒng)產(chǎn)生的既不包含病毒DNA也無傳染性的病毒樣顆粒（VLP）組成，重組LIVLP在結(jié)構(gòu)和免疫原性上都與天然乳頭痛病毒極其相似。VLP能與細胞受體結(jié)合并進入細胞，這樣有利于抗原的加工呈遞以及誘發(fā)較強的細胞免疫。以上兩種疫苗在效價方面:對679名墨西哥婦女進行隨機雙盲m期臨床試驗證實四價體疫苗高度有效，能夠100%預防HPV6、11、16、18相關(guān)的CIN2和3、原位癌、濕疣和外陰陰道上皮（VIN）,且疫苗接種耐受性好mi。對歐洲地區(qū)9265名（1624）歲女性進行臨床試驗發(fā)現(xiàn)，四價體疫苗

23、能夠100%預防HPV6、ll、16、l8相關(guān)的CIN2和3和原位癌，99.0%預防VIN、濕疣和外陰陰道癌除此之外，針對HPV其他亞型的研究報道較少。近些年，人們研究較多的是利用昆蟲細胞、重組痘苗病毒以及沙門氏菌和大腸桿菌等的表達系統(tǒng),來表達L1蛋白和12蛋白。根據(jù)人種的易感性和地區(qū)差別，如HPV45在非洲相對較多,HPV33在歐洲較多，而HPV58和52在亞洲較多頃，其學者根據(jù)本地區(qū)感染情況，研究其他HPV亞型方面有部分報道。2.2.2治療性疫苗關(guān)于HPV治療性疫苗,到目前沒有臨床應用疫苗，大多在實驗室研究階段。治療性疫苗通常是以經(jīng)修飾后去除其轉(zhuǎn)化活性,但仍保留其抗原性的HPV早期蛋白作為

24、靶抗原，它可誘導特異性的細胞免疫反應，被用于控制或消除感染HPV的良性和惡性病灶,并可作為這類疾病的手術(shù)后的輔助治療。研究顯示,預防性VLP疫苗對已經(jīng)感染的HPV幾乎沒有什么療效，其主要致癌蛋白E6和E7在基底細胞中表達，E6.E7主要與抑癌基因p53、pRb結(jié)合,從而介導被感染的細胞增殖，永生化和惡性轉(zhuǎn)化，因此治療性疫苗和基因療法主要針對的是E6和E7,91O正常組織中不存在這兩種蛋白，因此,E6和E7蛋白就成為HPV相關(guān)宮頸癌及癌前病變治療性疫苗的理想靶抗原。對中晚期宮頸癌病人手術(shù)后殘留的腫瘤細胞，通過激發(fā)病人的細胞免疫來殺傷、清除這些腫瘤細胞和已感染的上皮細胞，從而防止或限制腫瘤的復發(fā)和

25、擴散。1996年，英國用表達HPV16型和HPV18型的E6和E7蛋白以及重組痘苗病毒疫苗進行了宮頸癌治療的一期臨床試驗，沒有發(fā)現(xiàn)明顯的副作用，在部分受試病人體內(nèi)可檢測到特異性抗體和CTL反應以及細胞因子wo治療性疫苗目前主要研究狀況為： 肽疫苗以多肽代表T細胞表位已在治療HPV在小鼠體內(nèi)的腫瘤臨床前期方面有些報道。肽類疫苗在離體及在體的條件下均能促發(fā)特異性的CD8.細胞毒性T淋巴細胞（CTL）反應,從而對腫痛細胞起殺傷作用，無癌蛋白的致病性，借助基因工程技術(shù)大量生產(chǎn),肽段疫苗最典型的代表為E7肽段疫苗,主要是K7蛋白第11-20和86*3氨基酸2段分子肽段。目前，已經(jīng)確認有9個HPV16E6

26、和E7編碼結(jié)合肽，其中3個由E7編碼的多肽具有免疫源性多肽疫苗具有易于生產(chǎn)、價廉等優(yōu)點，但多肽疫苗抗原性弱,一般要結(jié)合佐劑使用，目前唯一批準的佐劑是A1（OH）3,該佐劑能促進體液免疫，但對治療起重要作用的細胞免疫無促進作用。肽疫苗另一個問題是需要符合特定的HLA型，目前，人們巳經(jīng)發(fā)現(xiàn)了HPV16型E6、E7抗原中的幾個能與人HLA-AD相配的CTL表位。用HPV型E7多肽疫苗免疫HPV相關(guān)腫瘤這一方法，也已進入I/U期臨床試驗，試驗中未見其有明顯副作用。由于多肽疫苗具有易于生產(chǎn)、價廉等優(yōu)點，因此，多肽疫苗有一定的應用前景。但多肽疫苗由受MHC-I類分子的限制性影響，對于不同遺傳背景的個體需要

27、使用與接種對象的HLA相匹配的多肽疫苗。但目前除與人HLA-AD相配的CTL表位外，人們對HPV16型E6、E7抗原中與其它類型MHC-I類分子相結(jié)合的CTL表位尚未明瞭，因此使得多肽疫苗的應用受到較大限制。此外，合成肽疫苗的不足之處還在于其免疫源性不強，大多需要輔以強佐劑才能獲得有效免疫反應，這也影響了該疫苗的實際應用刃。HPV16E7多肽僅能對有限的患者起作用，為擴大該疫苗在患者中的應用范圍，可采用一些與其它HLA組織型有親和性的較長的多肽片段。 蛋白疫苗因為肽缺乏完整的蛋白序列，有可能限制相關(guān)表位庫，因此許多研究小組都關(guān)注治療性重組蛋白疫苗。重組蛋白與熱休克蛋白（Hsp）的融合皆白可比單

28、獨表達的蛋白產(chǎn)生更強的免疫反應。例如，在沒有佐劑的條件下,E6、E7重組蛋白與結(jié)核分枝桿菌的Hsp70融合可阻止小鼠的HPV16E6/E7誘導腫瘤細胞的生成）。包含Hsp65和HPV16E7融合蛋白的治療性疫苗（HspE7）在CIN3女性患者中評估顯示，雖然該疫苗在一些患者中表現(xiàn)出一定的臨床效應，但是否為自然衰退或臨床治療的作用尚未明確睛。還有一種免疫策略包括抗原呈遞到自身抗原呈遞細胞（APC），如樹突細胞，再從體外回輸給患者以剌激產(chǎn)生免疫反應。如果宮頸癌患者對重組HPV16或HPV18E7蛋白剌激的樹突細胞產(chǎn)生免疫應答，其腫瘤進展速度將變緩（13個月存活期），而不產(chǎn)生反應的患者則在開始治療后

29、的5個月內(nèi)死亡。評估HPV16E7肽剌激產(chǎn)生的自體樹突細胞的安全性和有效性的I期臨床實驗正在宮頸癌患者中進行爭；。重組蛋白疫苗的第三種策略是多抗原的融合蛋白疫苗。在臨床前試驗中，一種嵌合HPV16LIVLP與全長HPV16I2、E7、E2順序融合蛋白（VLPE7E2）的疫苗可對小鼠產(chǎn)生治療作用，其抗LIVLP的抗體應答未出現(xiàn)衰減。一個結(jié)構(gòu)相似的L1-E7融合蛋白疫苗的I期臨床試驗正在39位單純感染HPV16的CIN2和3患者中進行。該疫苗可誘導產(chǎn)生高效價的抗HPV16L1抗體、低效價的抗E7的抗體以及抗這兩種蛋白的細胞免疫反應。沒有觀察到明顯的組織學和HPV-DNA改善的趨勢曲。 病毒載體疫苗

30、痘苗病毒載體疫苗曾用于消滅人類天花的痘苗病毒是最為常用的病毒載體，其具有長期、大短模的人類接種史。同時，痘苗病毒感染率高，外源基因表達水平高，又為裂解性病毒，其基因組與宿主細胞基因組整合的幾率非常小，因而無致癌性擔憂。這些特性使痘苗病毒成為腫擂疫苗的合適載體。但痘苗病毒載體疫苗也存在著不足，其產(chǎn)生的并發(fā)癥一直阻礙著它的廣泛使用。此外，接種該疫苗后產(chǎn)生的抗痘苗病毒抗體可能抑制再次免疫,從而影響了它的免疫治療效果。重組痘苗病毒疫苗多為活性頁組疫苗，具有用量少、抗原不需純化等優(yōu)點。用其免疫接種后,重組病毒在體內(nèi)產(chǎn)生大最抗原.刺激機體產(chǎn)生體液免疫和細胞免疫。同時,病毒栽體本身還可發(fā)揮佐劑效果。近年來研

31、制成功的非復制型痘苗病毒載體，除具有痘苗病毒載體的一般優(yōu)點外，還具有在人體中不能繁殖后代，卻能有效表達外源基因的優(yōu)點，從而大大減少了免疫缺損病人在“種痘”后出現(xiàn)并發(fā)癥的可能性，使該疫苗用于人體更為安全。由于其免疫效果不像活痘苗那樣依賴于病毒能否繁殖，因此有可能在一定程度上克服痘苗病毒載體疫苗存在的再次免疫效果不好的問題。我國在“九五”期間用非復制型痘苗病毒載體成功研制了HPV16非復制型痘苗病毒疫苗。該疫苗在動物實驗中被證實具有特異性CTL反應和抗腫瘤移植反應。最近，我國有研究者將HPV16治療性重組痘苗病毒疫苗與蛋白疫苗聯(lián)合使用，獲得了理想的免疫效果。 DNA疫苗DNA疫苗是將插入目的基因的

32、表達質(zhì)粒導入人體內(nèi)，通過在人體內(nèi)表達抗原而引起人體的特異性免疫反應。與其它疫苗相比,DNA疫苗有許多優(yōu)點，（1）DNA疫苗免疫應答持久、免疫效率可靠；（2）DNA疫苗可同時誘導體液免疫和細胞免疫;（3）DNA疫苗安全可靠,DNA疫苗的載體部分無免疫原性，可重復接種，不會像重組疫苗一樣產(chǎn)生針對載體的自身免疫反應;（4）DNA疫苗制備簡單，容易大量生產(chǎn)，有利于控制和保證質(zhì)景，成本低;（5）DNA疫苗性質(zhì)穩(wěn)定，便于保存并運輸。為了獲得更好的免疫效果，可將E6和田基因進行一些修飾，從而增強MHC-H類抗原的呈遞，提高細胞介導的免疫應答。動物實驗證明，用Sig/E7/LAMP1融合基因制備的DNA疫苗，

33、比采用野生型E7基因制備的DNA疫苗有更好的抗腫瘤效果。這一經(jīng)肌肉注射途徑免疫的疫苗，其I/U期臨床試驗目前正在約翰霍普金斯醫(yī)院進行。值得指出的是，DNA疫苗在人體中免疫效果弱的問題及安全性問題尚待進一步解決算。2.3存在的問題與展魚2.3.1存在的問題近幾十年來，人們在宮頸癌發(fā)病機制以及宮頸癌預防和治療方面取得了很大的進展,HPV疫苗的發(fā)明，為通過接種預防宮頸癌提供了可能。但仍存在諸多問題：疫苗安全問題預防性HPV疫苗Ganlasil和Cervarix在一些國家和地區(qū)得到了較為廣泛的應用，但在某些國家和地區(qū)針對是否將其納入常規(guī)接種計劃尚有爭議。預防性疫苗在預防HPV感染和CIN

34、方面有高效性，且其安全性也得到了一定程度的證實，但有部分報道其接種后的不良反應。雖然大部分人出現(xiàn)副反應的癥狀較為輕微，主要表現(xiàn)為局部皮膚紅疹、腫脹、疼痛、淋巴結(jié)腫大或者發(fā)生過敏反應等:叫，但對HPV疫苗安全性的研究還少，尚待進一步的研究證實。疫苗成本過高HPV四價疫苗剛上市時售價約在（300500）美元，目前中國大陸還未正式引進，在香港和臺灣售價約2000元以上，疫苗費用較貴,會給國家和家庭帶來負擔，特別是在一些發(fā)展中國家，開發(fā)經(jīng)濟高效的疫苗對開展大規(guī)模接種有重要的現(xiàn)實意義。認知度問題一項國內(nèi)調(diào)查結(jié)果表明，僅32.85%篩查女性聽說過HPV,而絕大多數(shù)女性從來都沒有

35、聽說，說明城市女性對HPV的知識相當缺乏。另外，香港報道38%女性曾經(jīng)聽說過HPV,但對HPVF專業(yè)知識了解甚少3）。人們認知水平的問題，應當加強宮頸癌相關(guān)科普知識的宣傳和普及，讓更多的人知道和了解HPV疫苗。缺少通用疫苗與治療性疫苗目前上市的兩種疫苗主要是預防性疫苗，HPV6、11、16和18,雖然不同型的HPV的L1蛋白的氨基酸序列的同源性在60%以上,但對其他亞型預防效果并不怎么樣，多價疫苗或通用疫苗的研究勢在必得。根據(jù)地區(qū)實際情況，國內(nèi)有學者致力于HPV16J8和58復合疫苗的研究叫，但處于起步研究階段，實際應用還需較長時間周期。另外，治療性疫苗多在動物模型試驗階段，正式

36、臨床應用,需進一步探索和實踐檢驗。但通用或復合疫苗是今后疫苗研究的重要方向。2.3.2展望復合疫苗或嵌合疫苗DNA疫苗將病毒DNA直接編碼成抗原，可以根據(jù)宿主的HLA型別經(jīng)抗原提呈細胞（ApC）與T細胞結(jié)合，產(chǎn)生細胞和體液免疫反應，無MHC限制性，但免疫原性較弱，樹突狀細胞（DC）是APC的免疫反應中最重要的免疫細胞，因此，目前的研究是以DC為載體來增強DNA疫苗的免疫反應,可產(chǎn)生特異性T細胞反應及CTL反應;RNA疫苗沒有DNA疫苗穩(wěn)定，轉(zhuǎn)染能力也較低，免疫原性較弱，但自我復制能力較強,可以產(chǎn)生較高濃度的抗體,因此.DNA-RNA聯(lián)合疫苗可以產(chǎn)生明顯的E7特異性CTL反應及抗腫

37、瘤效應。HPV-16VLP-E7是既有預防作用又有治療作用的疫苗，VLP可以激活DC,而HPVE7既可產(chǎn)生針對E7的特異性T細胞反應,也可產(chǎn)生中和性抗體，這是研究兼預防與治療疫苗的新思路。另外，最近有部分重組嵌合DNA疫苗的報道I心）。HPV患者存在著細胞因子失衡所引起的一系列細胞免疫抑制或逃避現(xiàn)象，因此改善和提高HPV感染者的細胞免疫功能成為HPV疫苗尤其是HPVDNA疫苗研究目標之一。細胞因子基因與目的基因共表達或共接種可以提高目的基因編碼抗原誘導的免疫反應。在宮頸炎的臨床藥物治療中通常采用干擾素（IFN）治療法，部分學者目前正著手研究HPV基因與IFN結(jié)合的重組病毒DNA疫苗的研究。2.

38、3.2.2 E2蛋白的研究到目前，尚無任何一種治療方法可消滅HPV感染，而且HPV還可在細胞內(nèi)潛伏數(shù)年,一旦機體免疫力下降，病毒就可恢復活動，最終導致癌癥發(fā)生。先前的大多數(shù)治療性疫苗致力于致癌性的HPVE6、E7基因的研究上，關(guān)于E2基因的研究報道較少）。E2能夠抑制E6、E7的過度表達,宮頸癌組織中E2結(jié)構(gòu)遭到破壞，其抑制作用解除，E6、E7處于高表達狀態(tài)?，F(xiàn)認為E2蛋白是一種特異性的DNA束縛蛋白，可以調(diào)節(jié)病毒mRNA的轉(zhuǎn)錄和DNA的復制，并有減星調(diào)節(jié)E6、E7表達的作用。E2蛋白還可以通過結(jié)合病毒啟動子附近的基因序列而抑制轉(zhuǎn)錄起始。有關(guān)E2蛋白的研究仍需加強。參考文獻1DuralM,Gi

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