食品中去甲基他達拉非和硫代西地那非的測定

1、附件食品中去甲基他達拉非和硫代西地那非的測定高效液相色譜一串聯(lián)質譜法BJS2017041 .范圍本標準規(guī)定了食品（含保健食品）基質中去甲基他達拉非和硫代西地那非的高效液相色譜一串聯(lián) 質譜測定方法。本標準適用于酒、牡蠣粉等食品（含保健食品）中去甲基他達拉非和硫代西地那非的測定。其他低糖、低脂、低蛋白類基質可參照本方法定性檢測。2 .原理試樣經甲醇超聲提取，過濾后，濾液供高效液相色譜一串聯(lián)質譜測定，外標法定量。3 .試劑和材料注：水為GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1 試劑2HN）:色譜純。3.1.3甲醇（CHOH：分析純。3.2 試劑配制3.2.10.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀釋至10

2、00mL 、: I I3.2.20.1%甲酸乙月青溶液：取甲酸1mL用乙月青稀釋至1000mL3.3 標準品去甲基他達拉非、硫代西地那非對照品或標準物質的中文名稱、英文名稱、CAS錄號、分子式、相對分子量見附錄 A表A.1,純度學98% 3.4標準溶液配制（500仙g/mL）:分別精密稱取去甲基他達拉非、硫代西地那非（3.3）各10.0mg,用甲醇溶解并稀 釋至20mL搖勻，制成濃度為 500仙g/mL標準儲備液，-20 C保存，保存期1個月。1卜g/mL）:分別準確吸取去甲基他達拉非、硫代西地那非標準儲備液（500卜g/mL） （3.4.1 ）各0.1mL, 用甲醇稀釋至50mL搖勻，制成1

3、仙g/mL的混合標準中間工作液，-20 C保存，保存期1個月。mL 0.4mL、1.0mL、2.0mL于10m溶量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，作為系列混合標準工作溶液 S1S5,濃度依次為各化合物10pg/L、20仙g/L、40仙g/L、100 g/L、200 g/L ,臨用新制或依 儀器響應情況配制適當濃度的混合標準工作溶液。4 .儀器和設備4.1 高效液相色譜一串聯(lián)質譜儀，配有電噴霧（ESI）離子源。4.2 天平：感量分別為 0.1mg和1mg4.3 超聲波發(fā)生器。5 .分析步驟5.1 試樣制備取適量混勻，研細，稱取1g試樣（精確至0.01g）于具塞試管中，加入甲醇10mL密塞，稱 重，

4、超聲提取10min,放冷，再次稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用濾膜（ 0.22 pm有機 相型）過濾，取續(xù)濾液，根據(jù)實際濃度適當稀釋至標準曲線線性范圍內，備用。5.1.2 液態(tài)試樣取適量搖勻，吸取1.0mL于具塞試管中，加入甲醇9mL密塞，稱重，超聲提取10min,放冷， 再次稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用濾膜（0.22 pm有機相型）過濾，取續(xù)濾液，根據(jù) 實際濃度適當稀釋至標準曲線線性范圍內，備用。5.1.3 空白試驗不加試樣按試樣同法處理，制得空白溶液。稱取與試樣等量的空白基質試樣，按試樣同法處理， 制得空白基質試樣溶液，備用。5.2 儀器參考條件5.2.2 色譜條件,j &qu

5、ot;a）色譜柱：WatersCORTECST32.1 X100mm,2.7p m ,或性能相當者。b）流c）流速：30O（i L/min。d）柱溫：30Coe）進樣量：1 n L。表1梯度洗脫程序表梯度時間/min流動相A/%流動相B/%090101901046040僅供個人學習參考71090910909.19010129010注：在有共流出成分影響目標化合物檢測時，可以適當調節(jié)流動相比例，使盡可能與干擾成分分離，減少干擾。5.2.3 質譜條件a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）。b）檢測方式：多反應離子監(jiān)測（MRMLc）干燥氣、霧化氣、鞘氣、碰撞氣等均為高純氮氣或其他合適氣體，使用前應調節(jié)

6、相應參數(shù)使質譜靈敏度達到檢測要求，毛細管電壓、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量、噴嘴電壓、碰撞能量、碎 裂電壓等參數(shù)應優(yōu)化至最佳靈敏度，監(jiān)測離子對和定量離子對等信息詳見附錄Bo5.3 定性測定按照高效液相色譜一串聯(lián)質譜條件測定試樣和標準工作溶液，記錄試樣和標準溶液中各化合物 的色譜保留時間，當試樣中檢出與某標準品質量色譜峰保留時間一致的色譜峰（變化范圍在± 2.5%之內），并且試樣色譜圖中所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當濃度標準溶液的離子相對豐度 比的偏差不超過表2規(guī)定的范圍，可以確定試樣中檢出相應化合物。表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（k）k>50%5

7、0哈 k>20%20哈 k>10%k<10%允許的最大偏差+20%±25%塊i50%5.4 定量測定用基質混合標準工作溶液繪制標準曲線。將試樣溶液（5.1 ）按儀器參考條件（5.2）進行測定，得到相應的樣品溶液的色譜峰面積。根 據(jù)標準曲線得到待測液中組分的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次。對照品色譜圖參見附錄C。6分析結果的表述將液相色譜一質譜測得濃度代入下式計算含量:mg/kg)；1)c Vm 1000式中:X一試樣中各待測物的含量，單位為毫克每千克（ 僅供個人學習參考g/L)c一從標準曲線中讀出的供試品溶液中各待測物的濃度，單位為微克每升（N尸樣液最終定容體積,單位

8、為毫升（mD;試樣溶液所代表的質量，單位為克（g）;K一稀釋倍數(shù)。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數(shù)字7精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%I8其他當稱樣量為1g或1mL定容體積為10mL時，本方法中去甲基他達拉非和硫代西地那非的檢出限均為50仙g/kg或50仙g/L ,定量限均為100仙g/kg或100仙g/L?？瞻自囼瀾獰o干擾。僅供個人學習參考附錄A化合物相關信息表A.1化合物中文名稱、英文名稱、CA9、分子式、相對分子質量、結構式序 號中文名稱英義名稱CAS號分子式分子 量結構式1去甲基他達 拉非No

9、rtadalafil171596-36-4C21H17N3O4375.382硫代西地那 非Thiosildenafil479073-79-5C22H 30N6O3S2490.64附錄B質譜參考條件質譜參考條件a）離子源：電噴霧離子源（ESI）;b）檢測方式：多反應監(jiān)測（MRM）c）掃描方式：正離子模式；d）毛細管電壓：正離子模式：4000V;e）離子源溫度：200 C ；f） 干燥氣流量：12L/min ;g）霧化氣壓力：25Psi ;h）鞘氣溫度：250 C ；鞘氣（N2）流量：10L/min;i） 噴嘴電壓：正離子模式：500V;j）其他質譜參數(shù)見表B.1。表B.1化合物定性、定量離子和質譜分析參數(shù)序號化合物名稱電窗方 式子(m/z)于離子（m/z）碰撞能量（V）保留時間（min）1去甲基他達拉非ESI+376.1254.0*261.913335.422硫代西地那非ESI+491.2299.0*41