生物工程專業(yè)分析復(fù)習(xí)資料

1、第一章：分析概論1. 分析的分類（1）按生物工程分析的對象及檢測項目的性質(zhì)，可分為：A.感官、理化指標(biāo)的測定 B.結(jié)構(gòu)分析及序列分析C.活體、生物活性及功能成分的檢測。 D.實時分析及過程參數(shù)檢測. 按照分析方法的技術(shù)原理可將其內(nèi)容劃分為一下幾個主要方面感官檢驗法 物理檢驗法 化學(xué)檢驗法 物理化學(xué)檢驗法 生物檢驗法2. 分析中的常識常量分析樣品中組分 1 %微量分析樣品中組分= 0.1 %1 %痕量分析樣品中組分 0.1 %超微量分析樣品中組分 PPM parts per million（ mg / kg )或（ mg / L ) 10-6 PPB parts per billion 10-9

2、 PPT parts per trillion 10-123.分析中的一般規(guī)定水為蒸餾水、去離子水常用帶刻度的玻璃儀器是在20條件下標(biāo)注的。分樣篩用來篩分體積大小不同的固體顆粒的篩子。分子篩具有均一微孔結(jié)構(gòu)而能將不同大小分子分離的固體吸附劑。“稱取”稱至0.1g。“精密稱取”必須按所列數(shù)值稱取，精確至 0.0001g?！熬芊Q取約”必須精確至0.0001g，可接近所列數(shù)值，不超過所列數(shù)值的10% 。分析中所用的試劑，除特別標(biāo)明的外均為分析純?nèi)芤?；未指明用何種溶劑配制時均指水溶液。鹽酸、硫酸、硝酸、氨水等未指明具體濃度時，均指市售試劑規(guī)格的濃度液體的“滴”系指自滴定管留下的一滴的量，在20時20

3、滴相當(dāng)于1.0ml吸取是指用移液管或吸量管取液體物質(zhì)的操作；量取是指用量筒或量杯取液體的操作,其精度要求均用數(shù)值的有效位數(shù)表示空白試驗是化學(xué)分析中作比較常用的分析方法，當(dāng)進(jìn)行某一試樣分析時，同時做一空白試驗（即操作條件和所用試劑均相同，但無試樣存在），以校正有關(guān)因素對分析結(jié)果的影響恒重是指在規(guī)定的條件下，連續(xù)兩次干燥或灼燒后的質(zhì)量之差不超過規(guī)定的范圍（一般在0.20.5mg以下）4.不同分析方法結(jié)果差異性的檢驗（一）t 檢驗法檢驗樣本均值與總體均值是否有差異時，使用： S為標(biāo)準(zhǔn)差,x為樣本均值，為總體均值樣本計算值的統(tǒng)計量大于t分布表中相應(yīng)顯著性水平和相應(yīng)自由度f下的臨界值，則表明被檢驗的均值

4、有顯著性差異，反之差異不顯著。（二）F 檢驗法計算兩組數(shù)據(jù)的方差之比來檢驗兩組數(shù)據(jù)是否存在顯著性差異。當(dāng)計算所得F值大于F分布表中相應(yīng)顯著性水平和自由度f1、f2下的臨界值，則兩組方差之間有顯著性差異，反之無。5. 可疑值的取舍,介紹兩種方法：（1）ti 確定法 ti = Xi - X / R R 極差 X 算術(shù)平均值 Xi 可疑值 據(jù)平行測定總次數(shù)N、顯著性水平值查表，求出ti 表，若ti ti 表則舍去可疑值， 若ti ti 表則應(yīng)保留可疑值。 （2）Q 確定法 先要把平行測定的數(shù)據(jù)由小到大排列，求得極差R和d值可疑值與最臨近的 數(shù)據(jù)間的差值。 Q = d / R 據(jù)平行測定總次數(shù)N、概率

5、p查表，求出Q 表，若QQ表則舍去可疑值，若Q Q表則應(yīng)保留可疑值。6.提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，減少不確定度的方法選擇合適的分析方法減少測定誤差增加平行測定次數(shù)，減少隨機誤差消除測量過程中的系統(tǒng)誤差第二章:樣品的采集與預(yù)處理1.樣品采集的基本原則（1）采集的樣品要均勻、有代表性，能反映全部被檢樣品的組成、質(zhì)量和衛(wèi)生狀況。（2）采樣方法要與分析目的一致。（3）采樣過程要設(shè)法保持原有的理化指標(biāo)，防止成分逸散（如水分、氣味、揮發(fā)性酸等）。（4）防止帶入雜質(zhì)或污染。（5）采樣方法要盡量簡單，處理裝置尺寸適當(dāng)。2.采集步驟 檢驗 |檢樣原始樣平均樣品復(fù)檢 | 仲裁、備查3. 對生物活性樣品采集的注意事項(

6、1) .動物組織的采集 A生物活性物質(zhì)易失活與降解，必須保持材料的新鮮，防止腐敗、變質(zhì)與微生物污染。 B快速、速凍、低溫保存（2）動物細(xì)胞的培養(yǎng) 動物細(xì)胞的生長培養(yǎng)液有平衡鹽溶液、天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基 平衡鹽溶液具有保持滲透壓、控制酸堿平衡的作用，也能提供給細(xì)胞生存所需要的能量和離子。（3）動物的血液、唾液、尿液等 藥物分析中最常用的血樣為全血、血漿和血清。血漿的取得是在加肝素、枸櫞酸、草酸鹽等抗凝劑的全血經(jīng)離心后分取。加入后立即輕輕旋搖。但勿太猛烈，以免血細(xì)胞破裂（4）微生物菌種的選育 A菌種分離（含菌樣品收集、富集培養(yǎng)、菌種純化） B菌種篩選（篩選對象選擇、培養(yǎng)方式確定） C菌株的選育（

7、隨機選擇突變體、根據(jù)代謝的調(diào)節(jié)機制選擇高產(chǎn)突變體）4. 生物活性樣品的保存（1）動物組織保存：速凍、凍干、有機溶劑脫水、制成丙酮粉或浸存于丙酮與甘油中（2）動物細(xì)胞的保存：組織塊保存法、細(xì)胞懸液保存法、單層細(xì)胞保存法及低溫冷凍保存（液氮）（3）血液、尿液、唾液保存：一般要立即分析。冷凍、冷藏，臨用時融化（4）菌種的保藏（菌種不死亡、保持菌種原有特性）：斜面、礦物油、索氏法、干硅膠法、沙土管法、冷凍干燥法、甘油冷凍保存法5. 預(yù)處理的目的.原則目的：測定前排除干擾組分；（2）對樣品進(jìn)行濃縮。原則： 消除干擾因素； 完整保留被測組分； 使被測組分濃縮； 以便獲得可靠的分析結(jié)果。 6. 預(yù)處理的方法

8、（1）有機物破壞法（2）蒸餾法（3)溶劑提取法（萃取法）（4）鹽析法（5）.磺化法和皂化法（6）沉淀分離法（7) 掩蔽法（8）色譜分離法（9）濃縮7. 有機物破壞法（1）干法灰化：原理：將樣品至于電爐上加熱，使其中的有機物脫水、炭化、分解、氧化，在置高溫爐中灼燒灰化，直至殘灰為白色或灰色為止，所得殘渣即為無機成分。（2）濕法消化：原理：樣品中加入強氧化劑，并加熱消煮，使樣品中的有機物質(zhì)完全分解、氧化，呈氣態(tài)逸出，待測組分轉(zhuǎn)化為無機物狀態(tài)存在于消化液中。（3）紫外光分解法：高壓汞燈提供紫外光。85±5 ，加雙氧水。（4）微波高壓消煮器。樣品最多只要10分鐘（2.5 MPa);（5）其它

9、方法：高壓密封消化法，自動回流消化儀消化法。第三章：物理分析方法1. 物理檢測方法 相對密度法 折光法 旋光法2.色散現(xiàn)象的產(chǎn)生及黑白分明現(xiàn)象的產(chǎn)生原理色散現(xiàn)象：測定時光源通常為白光，當(dāng)白光經(jīng)過棱晶和樣液發(fā)生折射時，因各色光的波長不同，折射程度不同，折射后分解成多種色光 黑白分明現(xiàn)象的產(chǎn)生原理：光的全反射現(xiàn)象3.影響折射率的因素及消除的法。光波長的影響：色散現(xiàn)象：測定時光源通常為白光，當(dāng)白光經(jīng)過棱晶和樣液發(fā)生折射時，因各色光的波長不同，折射程度不同，折射后分解成多種色光。光的色散會使視野明暗分界不清，產(chǎn)生測定誤差，為消除色散，安裝了色散補償器，可消除色散。溫度的影響：溶液的折射率隨溫度而改變，

10、溫度升高折射率減??；溫度降低折射率增大，折光儀上的刻度是在標(biāo)準(zhǔn)溫度下（20）刻制的，所以若測定溫度超過20，加上校正數(shù)，低于20，減去校正數(shù)。4.旋光法（1）旋光度當(dāng)偏振光通過光學(xué)活性物質(zhì)溶液時，偏振面旋轉(zhuǎn)的角度 叫作該物質(zhì)的旋光度。旋光度的大小與光源的波長、液層厚度、光學(xué)活性物質(zhì)的種類、濃度、溶劑及其溫度有關(guān)。(2)比旋光度在一定溫度和一定光源情況下，當(dāng)溶液濃度為 1 g/ml ，液層厚度為 1分米 時偏振光所旋轉(zhuǎn)的角度。記為：= / L C 查手冊得到不同物質(zhì)的比旋光度。 測定樣液的旋光度。 L 旋光管長度（液層厚度）分米。C 樣液濃度（所求值） t測定溫度為20 光源波長通常為D鈉線58

11、9.3nm (3)變旋光作用：具有光學(xué)活性的還原糖類，在溶解之后，其旋光度起初迅速變化，然后慚漸變得較緩慢，最后達(dá)到恒定值，這種現(xiàn)象稱為變旋光作用。5.如何對應(yīng)變旋光在用旋光法測定蜂蜜，商品葡萄糖等含有還原糖的樣品時，樣品配成溶液后，宜放置過夜再測定。若需立即測定，可將中性溶液(pH7)加熱至沸，或加幾滴氨水后再稀釋定容；若溶液已經(jīng)稀釋定容，則可加入碳酸鈉干粉至石蕊試紙剛顯堿性。在堿性溶液中，變旋光作用迅速，很快達(dá)到平衡。但微堿性溶液不宜放置過久，溫度也不可太高，以免破壞果糖。6. 啤酒色度的測定1原理：將除氣后的啤酒注入 EBC 比色計的比色皿中，與標(biāo)準(zhǔn) EBC 色盤比較，目視讀數(shù)或自動 數(shù)

12、字顯示出啤酒的色度，以 EBC 色度單位表示。 2儀器：EBC 比色計(或使用同等分析效果的儀器)：具有 2.O27.0 EBC 單位的目視色度盤或自 動數(shù)據(jù)處理與顯示裝置。一般淡色啤酒的色度在 5.014.0 EBC 范圍內(nèi)；濃色啤酒的色度在 15.040.0 EBC 范圍內(nèi)。 7. 測定水的色度有:(1)鉑鈷比色法測定水的色度的標(biāo)準(zhǔn)方法.鉑鈷標(biāo)準(zhǔn)比色法（GB11903-89）是將一定量的氯鉑酸鉀（K2PtCl6）和氯化鈷（CoCl2 ×6H2O）溶于水中配成標(biāo)準(zhǔn)色列。定義：1升水中含1mg鉑和0.5mg鈷所具有的顏色定為1度。將待測水樣與標(biāo)準(zhǔn)色列進(jìn)行目視比色，以確定其色度。 此法

13、操作簡便，色度穩(wěn)定，標(biāo)準(zhǔn)比色系列保存適宜，可長時間使用，但其中所用的氯鉑酸鉀太貴，大量使用時不經(jīng)濟。(2)鉻鈷比色法以重鉻酸鉀代替氯鉑酸鉀，便宜而且易保存，只是標(biāo)準(zhǔn)比色系列保存時問較短。 兩種方法的精密度和準(zhǔn)確度相同。第四章：光譜分析紫外-可見光吸收法紫外-可見光吸收光譜：*、n*、n* 、*1生色團(tuán):：有機物中含有n * 或* 躍遷的基團(tuán)； 2助色團(tuán):：助色團(tuán)是指帶有非鍵電子對的基團(tuán)；可使生色團(tuán)吸收峰向長波方向移動并提高吸收強度的一些官能團(tuán)3紅移與藍(lán)移（紫移） 某些有機化合物經(jīng)取代反應(yīng)引入含有未共享電子對的基團(tuán)之后，吸收峰的波長將向長波方向移動，這種效應(yīng)稱為紅移效應(yīng)。在某些生色團(tuán)如羰基的碳原

14、子一端引入一些取代基之后，吸收峰的波長會向短波方向移動，這種效應(yīng)稱為藍(lán)移（紫移）效應(yīng)。4溶劑效應(yīng)：溶劑極性的波動也會引起某些化合物吸收光譜的紅移或藍(lán)移，這種作用稱為溶劑效應(yīng)5.比爾吸收定律：入射光被溶液吸收的程度與溶液厚度（L）和溶液的濃度（C）關(guān)系為： A=kcL式中：A為吸光度；k為消光系數(shù)6吸光度與濃度之間常常偏離線性關(guān)系，產(chǎn)生偏離的因素有：樣品溶液因素：比爾定律通常只有在稀溶液時才成立，隨著溶液濃度增大，吸光質(zhì)點之間距離縮小，彼此間相互影響和相互作用加強，破壞了吸光度與濃度之間的線性關(guān)系 儀器因素：比爾定律只適用于單色光，但是經(jīng)儀器狹縫投射到被測溶液的光，并不能保證理論要求的單色光，這

15、也是造成偏離比爾定律的一個重要因素。7.紫外-可見分光光度計主要部件：光源、分光器、吸收池、檢測器、記錄器。8.顯色與操作條件的選擇（1）反應(yīng)條件的選擇：顯色反應(yīng)與顯色劑濃度 溶液酸度 顯色時間 濕度 溶劑（2）測定條件：波長 狹縫的選擇 吸光度范圍(0.1-1.0) 儀器誤差（3）干擾離子的消除：控制測定條件：可選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL，將待測組分的吸收峰波長與相距較大的干擾組分影響消除掉；利用氧化劑或還原劑改變干擾離子的價態(tài)，使其不影響組分的測定；控制酸度達(dá)到選擇配位化合物的形成。 加入掩蔽劑：掩蔽劑的作用是與體系干擾組分進(jìn)行配位化合反應(yīng)，降低干擾物質(zhì)的濃度，減少對待測組分的影響。（4）參比溶液的選

16、擇：溶液參比：當(dāng)樣品比較簡單，共存的組分對測定波長的光吸收很小時，可用溶液作為參比溶液，這樣可以消除溶劑、吸收池等因素的影響。 試劑參比：試劑參比又叫空白參比。多數(shù)情況都采用試劑溶液做參比。按顯色反應(yīng)的相同條件，以不加試樣的溶液作參比溶液。這種參比溶液可以消除試劑中的組分產(chǎn)生吸收的影響。9.分子吸收光譜的產(chǎn)生在分子中存在著電子的運動，以及組成分子的各原子間的振動和分子作為整體的轉(zhuǎn)動。分子的總能量可以認(rèn)為等于這三種運動能量之和。即： E分子= E電子+ E振動+ E轉(zhuǎn)動10.吸收定律能夠用于彼此不相互作用的多組分溶液。它們的吸光度具有加合性，且對每一組分分別適用，即：A總= A1+ A2+ A3

17、+ An=1bc1+2bc2+3bc3+nbcn吸收定律對紫外光、可見光、紅外光都適用11.干擾離子的影響和消除方法：1 與試劑生成有色配合物及大量干擾離子與試劑生成穩(wěn)定的配合物；2干擾離子本身有色；3與被測離子形成難離解化合物。消除干擾的方法主要有以下幾種：1控制酸度：2加入掩蔽劑；3分離干擾離子；4進(jìn)行同時測定；5利用氧化還原反應(yīng)改變價態(tài)；6、用參比溶液消除顯色劑和某些共存有色離子的干擾；7、選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL；8、分離：以上方法均不奏效時，采用預(yù)先分離的方法。原子吸收分光光度法1.原子吸收是一個受激吸收躍遷的過程。當(dāng)有輻射通過自由原子蒸氣，且入射輻射的頻率等于原子中外層電子由基態(tài)躍遷到較高能

18、態(tài)所需要能量的頻率時，原子就產(chǎn)生共振吸收。銳線光源：光源發(fā)射線的中心頻率與吸收線的中心頻率一致，而且發(fā)射線的半寬度比吸收線的半寬度小得多時，則發(fā)射線光源叫做銳線光源。2.原子吸收分光光度計：（1）光源：能輻射出半寬度比吸收線半寬度還窄的譜線，并且發(fā)射線的中心頻率應(yīng)與吸收線的中心頻率相同。輻射的強度應(yīng)足夠大。輻射光的強度要穩(wěn)定，且背景小1. （2）原子化裝置：1.火焰原子化器(火焰原子化法是利用氣體燃燒形成的火焰來進(jìn)行原子化的?；鹧嫘偷脑踊到y(tǒng)我們把它叫做火焰原子化器。):由霧化室（將試液物化）、混合室（試液與燃?xì)饣旌希┖腿紵鳎óa(chǎn)生火焰，使進(jìn)入火焰的氣溶膠蒸發(fā)和原子化）組成。 2.非火焰原子

19、化器(常用的非火焰原子化法主要有電熱高溫石墨管原子化法和化學(xué)原子化法)：用電加熱法使試樣干燥、灰化、原子化。（3）分光器：把待測元素的共振譜線和其他譜線分開，以便進(jìn)行測定。（4）檢測系統(tǒng)：包括檢測器、信號處理和顯示記錄部件。作用是將光信號轉(zhuǎn)變成電信號，經(jīng)放大器放大，再將由放大器輸出的信號進(jìn)行轉(zhuǎn)換，使指示儀表上顯示出與試樣濃度成線性關(guān)系的數(shù)值。3化學(xué)干擾的消除：化學(xué)干擾：化學(xué)干擾是指在溶液中或氣相中由于待測元素與其它組分之間的化學(xué)反應(yīng)而引起的干擾。方法：使用高溫火焰 加入稀釋劑：在測定時加入一種能與干擾組分生成更穩(wěn)定或更難揮發(fā)化合物的試劑，而使待測元素釋放出來，從而消除干擾。 加入保護(hù)劑：加入一

20、種能與待測元素生成穩(wěn)定增長化合物的試劑，使得待測元素不與干擾組分反應(yīng)。而生成的化合物又很容易揮發(fā)和原子化，對測定不干擾。 預(yù)分離：將待測組分和干擾組分分離在石墨爐原子吸收法中，加入基體改進(jìn)劑可以提高被測物質(zhì)的灰化溫度或降低其他原子化溫度以消除干擾。4.測定條件的選擇：吸收線 光譜通帶的選擇：吸收線附近無干擾譜線存在并能分開最靠近的非共振線為原則空心陰極燈的工作電流：使用較低的工作電流燃燒器高度的選擇：選擇燃燒器高度使光束從原子濃度最大的區(qū)域通過，這個區(qū)域的火焰穩(wěn)定，干擾小。 原子化條件選擇 進(jìn)樣量的選擇：36ml/min 為適宜紅外光譜法1產(chǎn)生的原理：分子中的原子有相對振動，因振動的能量不同，

21、又分為若干能級，當(dāng)照射紅外光能量的大小與分子中原子的振動能級在數(shù)量上相當(dāng)，即能引起分子中振動能級的躍遷，從而產(chǎn)生紅外吸收光譜。2產(chǎn)生的必要條件：光輻射的能量恰好滿足振動能級躍遷所需的能量。在振動過程中，分子必須有偶極矩周期性的變化。另外，若振動方式不同而頻率相同時，會產(chǎn)生簡并作用。3基頻峰：分子吸收一定頻率的紅外光后，振動能級由基態(tài)躍遷至第一激發(fā)態(tài)時所產(chǎn)生的吸收峰稱為基頻峰。 峰數(shù)小于理論振動數(shù)：沒有偶極矩變化的振動不產(chǎn)生紅外吸收 相同頻率的振動吸收重疊，即簡并 儀器不能區(qū)別那些頻率十分接近的振動，或因吸收帶很弱，儀器不能檢出 有些吸收帶落在儀器的檢測范圍之外。4特征峰與相關(guān)峰：特征峰：有些官

22、能團(tuán)在某一區(qū)域出現(xiàn)吸收譜帶，它的位置相對恒定，不受或少受分子中其他部分的影響，這種譜帶稱為相應(yīng)官能團(tuán)的特征峰，簡稱特征峰。相關(guān)峰：在化合物的紅外圖譜中由于某個官能團(tuán)的存在而出現(xiàn)的一組相互依存的特征峰，可互為相關(guān)峰，用以說明這些特征峰具有依存關(guān)系，并區(qū)別于非依存關(guān)系的其他特征峰。5傅里葉變換紅外光譜儀：掃描速度快 光通量大 分辨率高 測定光譜范圍寬等特點.其核心部位是邁克爾遜干涉儀；干涉儀的作用是將復(fù)色光變?yōu)楦缮婀?。第五章：色譜分析紙色譜1.定性與定量的方法： （1）定性分析：樣品經(jīng)展開顯色后，與柱色譜相似，物質(zhì)在圖譜上的位置可用Rf值表示： Rf=物質(zhì)斑點移動的距離 / 溶劑前沿移動的距離=a

23、 / b如同連續(xù)下降展開法，則沒有溶劑前沿，此時可用某一種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)所移動的距離作為參照。例如糖類的紙色譜時，一葡萄糖所移動的距離為標(biāo)準(zhǔn)，用RG表示。RG=糖的斑點（濃度中性）移動的距離/葡萄糖斑點（濃度中性）移動的距離=a/b定性分析采用與標(biāo)準(zhǔn)樣比R定性。（2）定量分析：紙色譜的定量方法很多，但一般屬于半定量法。 斑點面積法 直接比色法 剪洗法氣相色譜1.色譜儀：氣路系統(tǒng) 溫度控制系統(tǒng) 檢測器的配置部分 記錄儀2.最常用的通用性檢測器：熱導(dǎo)池檢測器（TCD）、氫火焰離子化檢測器（FID）；最常用的選擇性檢測器：火焰光度檢測器（FPD）、電子捕獲檢測器（ECD）3.固定液 固定液一般為高沸點的有

24、機物。對固定液的要求：最高使用溫度高：在操作溫度下蒸汽壓低，熱穩(wěn)定性好，決定了最高使用溫度。最低使用溫度低：在操作溫度呈液態(tài)，而且黏度越低越好。物質(zhì)在高粘度的固定液中傳導(dǎo)速率慢，柱效率因而降低?；瘜W(xué)穩(wěn)定性好：固定液與被分析物質(zhì)及擔(dān)體不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，能牢固地附在載體上，并形成均勻和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的薄膜。組分具有一定溶解度：為了使樣品各組分分離，固定液對組分必須有一定的溶解度，不然組分就會很快被載氣帶走而不能在兩相之間進(jìn)行分配。選擇性強：對沸點相近的類型不同的物質(zhì)有分離能力，既保留一種類型化合物的能力大于另一種類型。 固定液的選擇：一般是從被分析物質(zhì)與固定液分子間的作用力以及固定液的分類來作為選擇固定液

25、的依據(jù)。固定液的選擇一般根據(jù)“相似相溶“規(guī)律，即固定液的性質(zhì)與被分離物質(zhì)之間有某些相似性，如官能團(tuán)、化學(xué)鍵、極性、某些化學(xué)性質(zhì)。對擔(dān)體的要求：化學(xué)惰性、比表面積較大，孔徑分布均勻、熱穩(wěn)定性好、有一定機械強度4.幾種常用的定量方法歸一化法：當(dāng)樣品各組分都能流出色譜柱，并在色譜圖上顯示出色譜柱是，可用此方法進(jìn)行定量計算。內(nèi)標(biāo)法：當(dāng)只要求測定樣品試樣中某幾個組分，而試樣中所有組分不能全部出峰時，可用此法。外標(biāo)法：取純物質(zhì)配置成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣，分別取一定體積注入色譜儀，得到色譜圖，測出峰面積，作峰面積和濃度關(guān)系曲線，及標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后再同樣條件下，注入同樣的未知試樣，從色譜圖上測出峰面積，由上述

26、標(biāo)準(zhǔn)曲線查出被測組分的濃度。毛細(xì)管色譜分析1.特點：容量小 滲透率高 柱效率和分離效率高2.進(jìn)樣系統(tǒng)為什么采用分流裝置？ 由于毛細(xì)管柱容量很小，每次只允許進(jìn)樣0.01uL，所以要把這極微量樣品，瞬間引入毛細(xì)管柱，一般必須使用分流法進(jìn)樣。 3.高效液相色譜與經(jīng)典液相色譜法相比 顆粒極細(xì)（一般為10mm以下）、規(guī)則均勻的固定相，傳質(zhì)阻抗小，柱效高，分離效率高；高壓輸液泵輸送流動相，流速快，分析速度快；流速最高可達(dá) 10cm3·min-1.高靈敏度檢測器，靈敏度大大提高。紫外檢測器最小檢測限可達(dá)10-9g，而熒光檢測器最小檢測限可達(dá)10-12g。 4.正、反相液相色譜親水性固定液常采用疏水

27、性流動相，即流動相的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正相柱。若流動相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。 5.色譜圖是色譜柱流出物通過檢測器所產(chǎn)生的響應(yīng)信號對時間或液體流出體積的曲線。提高柱效能：A為渦流擴散項，A=2*dp，反映了色譜柱填充物的不規(guī)則因素和不均勻程度。dp為填充顆粒直徑，仔細(xì)填充柱子并采用均一的載體，可以減少A項而提高柱效；B為自由分子擴散項，與流速成反比，在低流速下影響較大;C為傳質(zhì)阻力，在低流速下可以減小傳質(zhì)阻力，使用小顆粒載體也可以減小傳質(zhì)阻力而提高柱效。第七章：免疫分析1.抗原與抗

28、體的概念：抗原是指能在機體中引起特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)的物質(zhì)；抗體是指由機體對應(yīng)于抗原的刺激產(chǎn)生的一類物質(zhì)。2.抗原抗體反應(yīng)的特點：特異性、可逆性、最適比例性、反應(yīng)的階段性。酶聯(lián)免疫分析1.酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）關(guān)鍵步驟：包被技術(shù)：包被是ELISA技術(shù)的第一步，也是關(guān)鍵一步。它是將抗原或抗體與酶標(biāo)板結(jié)合的過程。封閉酶標(biāo)反應(yīng)孔：抗原或抗體包被后，酶標(biāo)板上會剩余一些未結(jié)合位點。封閉的目的是將所有的這些位點全部和不影響定量的蛋白質(zhì)結(jié)合，使其失去和后續(xù)步驟中其他反應(yīng)試劑結(jié)合的能力。洗滌：實驗每一步之間都要洗滌，目的是除去未結(jié)合的物質(zhì)，一般采用磷酸緩沖液加吐溫20，洗滌要徹底，一般采用滿孔洗滌3遍，每

29、遍3min。現(xiàn)在有自動化的洗板機，可簡化人工操作。加入酶結(jié)合物：酶結(jié)合物一般為酶標(biāo)第2抗體，可用酶標(biāo)SPA作為通用酶結(jié)合物使用。常用酶與底物的反應(yīng)結(jié)果判斷 減少ELISA中的非特異吸附2.常用酶與底物的反應(yīng) 酶 辣根過氧化酶 底物 鄰苯二胺(OPD)+過氧化氫 說明 用硫酸終止反應(yīng)光度測定 堿性磷酸酶 四甲基聯(lián)苯胺（TMB）+過氧化氫4-硝基苯酚 光度測定 葡萄糖氧化酶 過氧化氫/色原體 光度測定 -半乳糖苷酶 2-硝基苯酚 光度測定放射免疫分析的表示：Ag+ + AbAg0 - Ab +Ag Ag - Ab實驗：實驗1：白酒中總酸含量測定1、實驗原理：白酒中的總酸以中和法直接測定，根據(jù)所消耗

30、的堿液量計算出白酒中總酸的含量（白酒中總酸以乙酸計）2、實驗步驟：準(zhǔn)確吸取50ml白酒樣品，置入250ml三角瓶中，加50ml水和2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液滴定至微紅色。記錄滴定體積。同時做空白試驗。實驗2： 白酒中總酯含量測定1、實驗原理：先用堿中和白酒中的游離酸，再加一定量的堿使酯皂化，過量的堿用酸滴定。2、實驗步驟：準(zhǔn)確吸取50ml白酒樣品，置入250ml三角瓶中，加50ml水和2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液滴定至微紅色（不可過量）。再準(zhǔn)確加入25.0ml 0.1mol/L氫氧化鈉溶液，放置過夜皂化（或接上回流冷凝器，于沸水浴中回流皂化半小時），用0.

31、1mol/L 鹽酸溶液滴定至紅色剛剛消失。記錄鹽酸溶液用量體積。實驗3：雙縮脲比色法1.原理：蛋白質(zhì)含有兩個以上的肽鍵，因此有雙縮脲反應(yīng)。在堿性溶液中蛋白質(zhì)與Cu2+形成紫紅色絡(luò)合物，在540nm處有最大吸收。其顏色深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量及氨基酸成分無關(guān)。該法測定范圍110mg蛋白質(zhì)，適用于測定精度要求不高的樣品。實驗4：紫外吸收法1.原理：蛋白質(zhì)分子中的絡(luò)氨酸、色氨酸等殘基在波長280nm處具有最大吸收峰。由于各種蛋白質(zhì)都含有絡(luò)氨酸，因此280nm處的光吸收是蛋白質(zhì)的一種普遍性質(zhì)。在一定程度上，蛋白質(zhì)溶液在280nm處的吸光度與其濃度成正比，故可用作蛋白質(zhì)定量測定

32、。核酸在紫外線區(qū)也有強吸收，可通過校正加以消除。實驗5：氨基酸自動分析儀法1.原理：氨基酸自動分析儀是根據(jù)離子交換柱層析原理分離分析氨基酸的自動化分析儀器。離子交換柱層析使混合液中各種氨基酸的分離是靠兩種因素綜合作用的結(jié)果：氨基酸離子與離子交換樹脂電離基團(tuán)之間的靜電吸引作用。這種作用隨環(huán)境PH變化而變化。氨基酸的R基團(tuán)與樹脂的非極性苯環(huán)之間的疏水相互作用。R基團(tuán)疏水性強者親和力大，弱者親和力小。實驗6：脂肪含量的測定1.原理：脂肪經(jīng)有機溶劑（乙醚，石油醚，氯仿等）抽提，蒸發(fā)有機溶劑，殘渣即為脂肪。由于抽提中除脂肪外，游離脂肪酸，有機酸，樹脂，色素等也同時被抽提，故測得結(jié)果稱為粗脂肪。2. 實驗

33、步驟1：樣品預(yù)處理：稱取樣品的重量根據(jù)材料中脂肪的含量而定,通常脂肪含量在10以下的，稱取樣品10-12克；脂肪含量為50-60的，則稱取樣品2-4克，(可以用測定水分后的樣品)。將樣品在80-100烘箱去水分。一般烘4小時，烘干時要避免過熱。冷卻后，準(zhǔn)確地稱取一定量樣品，必要時，拌以精制海砂，無損地移入濾紙筒內(nèi)，用脫脂棉塞嚴(yán)，將濾紙筒放人索氏提取器的提取管內(nèi)，注意勿使濾紙筒高于提取管的虹吸部分。2：抽?。?將洗凈的提取瓶在105烘箱內(nèi)烘干至恒重,加乙醚約達(dá)到提取瓶容積的1/22/3，然后將提取器各部分連接，注意不能漏氣。加熱提取時，應(yīng)在電熱恒溫水浴中進(jìn)行(水浴溫度約為40-50)，嚴(yán)禁用火焰

34、直接加熱索氏提取器。在加熱時乙醚蒸發(fā)，乙醚蒸汽由連接管上升至冷凝器，凝結(jié)成液體滴入提取管中，此時樣品內(nèi)的脂肪為乙醚液面超過虹吸管高度后溶有脂肪的乙醚虹吸管流入提取瓶，循環(huán)抽提，調(diào)解水浴溫度，使乙醚每小時循環(huán)35次，抽提時間視樣品的性質(zhì)而定，一般需612小時，樣品含有脂肪是否提取完全，可以用濾紙來粗略判斷，從提取管內(nèi)吸取少量的乙醚并滴在凈的濾紙上，待乙醚干后，濾紙上不留有油脂的半點則表示已經(jīng)提取完全。提取完全后，再將乙醚蒸到提取管內(nèi)，待乙醚液面達(dá)到虹吸管的最高處以前，取下提取管。3：稱重和計算：將提取瓶中的乙醚全部蒸干，洗凈外壁，置于105烘箱干燥至恒重，按下式計算樣品的粗脂肪百分含量。粗脂肪含

35、量(%)=(m2-m1)×100/m式中：m稱取試樣質(zhì)量(g) m1抽提瓶質(zhì)量(g) m2抽提瓶與粗脂肪質(zhì)量(g)實驗7：還原糖的測定1. 原理：堿性酒石酸鉀鈉甲、乙液等量混合，立即生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀，這種沉淀很快與酒石酸鉀鈉反應(yīng)，生成深藍(lán)色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物，在加熱條件下，以次甲基藍(lán)作指示劑，用還原糖液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，生成紅色的氧化亞銅沉淀，進(jìn)而與亞鐵氰化鉀反應(yīng)生成可溶性的淺黃色亞鐵氰化鉀鈉銅絡(luò)合物。待二價銅全部被還原后，稍過量的還原糖將次甲基藍(lán)還原，溶液藍(lán)色消失，即為滴定終點。根據(jù)樣液消耗量可計算出還原糖含量。2.實驗步驟1樣品處理(1)乳類

36、、乳制品及含蛋白質(zhì)的飲料 稱取2.55.0g固體樣品或吸取2550mL液體樣品，置于250mL容量瓶中，加50mL水，搖勻后慢慢加入5mL乙酸鋅及5mL亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，混勻，靜置0.5h。用干燥濾紙過濾，收集濾液供測使用。(2)酒精性飲料 吸取100mL樣品于蒸發(fā)皿中，用1mol/L NaOH中和至中性，在沸水浴上蒸發(fā)至原體積的1/4后，移入250mL容量瓶中，加50mL水混勻，以后按(1)操作。(3)含多量淀粉的食品 稱取1020g樣品，置于250mL容量瓶中，加200mL水，在45水浴中加熱1h.振搖。取出冷卻后加水至刻度，混勻，靜置。吸取20mL上清液于另一250mL容量瓶中

37、，以后按(1)操作。(4)汽水等含CO2飲料 吸取100mL樣品于蒸發(fā)皿中，在沸水浴中除去CO2，移入250mL容量瓶，并用水洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶，加水至刻度，混合后備用。2堿性酒石酸銅溶液標(biāo)定 吸取堿性酒石酸銅甲、乙液各5.00mL，置于250mL錐形瓶中。加水10mL，從滴定管加約9mL標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化糖，使其在2min內(nèi)加熱沸騰。準(zhǔn)確沸騰30s，微沸下以每2秒1滴的速度繼續(xù)滴加轉(zhuǎn)化糖標(biāo)液，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為滴定終點，后滴定操作需在1min內(nèi)完成，消耗糖液在1mL以內(nèi)。記錄消耗轉(zhuǎn)化糖標(biāo)液的總體積。計算：10mL(甲、乙液各5mL)堿性酒石酸銅溶液，相當(dāng)于轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量(mg)： F=V&#

38、215;式中 F10mL堿性酒石酸銅溶液，相當(dāng)于轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量(mg) 轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mg/mL) V標(biāo)定時消耗轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積3(1)樣品溶液預(yù)測定：吸取堿性酒石酸銅甲乙溶液各5.0mL，置于250mL錐形瓶中，加水10ml，使其在2min內(nèi)加熱沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s，微沸下以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣品溶液，待溶液藍(lán)色變淺時，以每2秒1滴的速度繼續(xù)滴定，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為滴定終點，記錄樣品溶液消耗體積。(2)樣品溶液精測定：吸取堿性酒石酸銅甲乙溶液各5.0mL，置于250mL錐形瓶中，加水10ml，從滴定管加入比預(yù)測時樣品溶液消耗總體積少1ml的樣品溶液，加熱使其在2mi

39、n內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s，微沸下以每2秒1滴的速度繼續(xù)滴定，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為滴定終點，記錄樣品溶液消耗總體積。實驗8：水分活度的測定（擴散法）1原理：將試樣置于康維bing中，分別和標(biāo)準(zhǔn)水分活度的飽和溶液擴散平衡后，根據(jù)試樣質(zhì)量變化值求得水分活度（Aw）實驗9：鋅含量測定（雙硫腙比色法）1 原理：鋅在酸性條件下（PH45）,與雙硫腙生成紅色絡(luò)合物，經(jīng)四氯化碳萃取后以比色法測定。實驗10：鐵含量的測定（鄰菲繞啉比色法）1.原理：在弱酸性條件下，二價鐵離子與鄰菲繞啉生成紅色絡(luò)合物，比色法測定。2.鐵的其他比色方法：硫氰酸比色法 氨基水楊酸比色法 實驗11：一般酶活力的測定1.四個操作步驟：對樣品酶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋 進(jìn)行酶促反應(yīng) 測定反應(yīng)量計算酶活力實驗12：糖化酶活力測定2