乳及乳制品中亞硝酸鹽含量的測(cè)定

1、 乳及乳制品中亞硝酸鹽的測(cè)定學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo)v知識(shí)目標(biāo)：知識(shí)目標(biāo)：v1. 1. 能解釋測(cè)定亞硝酸含量原理，寫出測(cè)定亞硝酸鹽含量的能解釋測(cè)定亞硝酸含量原理，寫出測(cè)定亞硝酸鹽含量的流程和注意事項(xiàng)。流程和注意事項(xiàng)。v技能目標(biāo)：技能目標(biāo)：v1.1.會(huì)正確使用分光光度計(jì)；會(huì)正確使用分光光度計(jì)；v2.2.能正確繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；能正確繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；v3.3.能準(zhǔn)確報(bào)告檢測(cè)結(jié)果，評(píng)價(jià)亞硝酸鹽含量是否符合標(biāo)準(zhǔn)。能準(zhǔn)確報(bào)告檢測(cè)結(jié)果，評(píng)價(jià)亞硝酸鹽含量是否符合標(biāo)準(zhǔn)。 v素質(zhì)目標(biāo)：素質(zhì)目標(biāo)： 1.1.培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)、務(wù)實(shí)的學(xué)習(xí)精神；培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)、務(wù)實(shí)的學(xué)習(xí)精神； 2.2.培養(yǎng)學(xué)生開拓創(chuàng)新、團(tuán)結(jié)協(xié)作的職業(yè)素質(zhì)。培養(yǎng)學(xué)生開拓創(chuàng)

2、新、團(tuán)結(jié)協(xié)作的職業(yè)素質(zhì)。 檢測(cè)依據(jù)檢測(cè)依據(jù)乳及乳制品中亞硝酸鹽與硝乳及乳制品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定酸鹽的測(cè)定離子色譜法離子色譜法分光光度法分光光度法123GB 5009.33-2010乳及乳制品中亞硝酸鹽的測(cè)定乳及乳制品中亞硝酸鹽的測(cè)定vGB 5009.33-2010-GB 5009.33-2010-第三法第三法測(cè)定原理測(cè)定原理v試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在濾液中，加入磺胺和試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在濾液中，加入磺胺和N-1-萘基萘基-乙二胺二鹽酸鹽，使其顯粉紅色，然后用分光光乙二胺二鹽酸鹽，使其顯粉紅色，然后用分光光度計(jì)在度計(jì)在538 nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度。波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度。v將

3、測(cè)得的吸光度與亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度進(jìn)行比將測(cè)得的吸光度與亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度進(jìn)行比較，就可計(jì)算出樣品中的亞硝酸鹽含量。較，就可計(jì)算出樣品中的亞硝酸鹽含量。具體工作任務(wù)分解具體工作任務(wù)分解任務(wù)任務(wù)3：樣品亞硝酸鹽含量測(cè)定：樣品亞硝酸鹽含量測(cè)定 任務(wù)任務(wù)2：樣品預(yù)處理：樣品預(yù)處理 任務(wù)任務(wù)4：結(jié)果記錄并分析處理：結(jié)果記錄并分析處理 任務(wù)任務(wù)1：儀器設(shè)備及試劑的準(zhǔn)備：儀器設(shè)備及試劑的準(zhǔn)備任務(wù)任務(wù)5：填寫檢驗(yàn)報(bào)告單：填寫檢驗(yàn)報(bào)告單 任務(wù)一：儀器設(shè)備及試劑的準(zhǔn)備任務(wù)一：儀器設(shè)備及試劑的準(zhǔn)備v儀器儀器v所有玻璃儀器都要用蒸餾水沖洗，以保證不帶有亞硝酸鹽。所有玻璃儀器都要用蒸餾水沖洗，以保證

4、不帶有亞硝酸鹽。v天平：感量為天平：感量為0.1 mg和和1 mg。v燒杯：燒杯：100 mL。v錐形瓶：錐形瓶：250 mL，500 mL。v比色管：比色管：50 mL。v移液管：移液管：1 mL、2 mL、5 mL和和10 mL。v量筒：根據(jù)需要選取。量筒：根據(jù)需要選取。v玻璃漏斗：直徑約玻璃漏斗：直徑約9 cm，短頸。，短頸。v定性濾紙：直徑約定性濾紙：直徑約18 cm。v分光光度計(jì)：測(cè)定波長(zhǎng)分光光度計(jì)：測(cè)定波長(zhǎng)538 nm，使用，使用1 cm2 cm光程的比色光程的比色皿。皿。任務(wù)一：儀器設(shè)備及試劑的準(zhǔn)備任務(wù)一：儀器設(shè)備及試劑的準(zhǔn)備v試劑：試劑：測(cè)定用水應(yīng)是不含亞硝酸鹽的蒸餾水或去離子

5、水。測(cè)定用水應(yīng)是不含亞硝酸鹽的蒸餾水或去離子水。v鹽酸鹽酸-氨水緩沖溶液：氨水緩沖溶液：pH 9.609.70。v硫酸鋅溶液硫酸鋅溶液v亞鐵氰化鉀溶液亞鐵氰化鉀溶液v顯色液顯色液1：體積比為：體積比為450:550的鹽酸。的鹽酸。v顯色液顯色液2：5 g/L的磺胺溶液。的磺胺溶液。v顯色液顯色液3：1g/L鹽酸萘乙二胺溶液鹽酸萘乙二胺溶液v亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：相當(dāng)于亞硝酸根的濃度為亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：相當(dāng)于亞硝酸根的濃度為1.00g /mL。v將亞硝酸鈉在將亞硝酸鈉在110120的范圍內(nèi)干燥至恒重。冷卻后稱的范圍內(nèi)干燥至恒重。冷卻后稱取取0.150 g，溶于，溶于1000 mL容量瓶中，用水定容。

6、在使用的當(dāng)容量瓶中，用水定容。在使用的當(dāng)天配制該溶液。取天配制該溶液。取10 mL上述溶液和上述溶液和20 mL緩沖溶液于緩沖溶液于1000 mL容量瓶中，用水定容。每容量瓶中，用水定容。每1 mL該標(biāo)準(zhǔn)溶液中含該標(biāo)準(zhǔn)溶液中含1.00g的的NO2。分光光度計(jì)的使用分光光度計(jì)的使用v（1）預(yù)熱儀器）預(yù)熱儀器 將選擇開關(guān)置于將選擇開關(guān)置于“T”，打開電源開關(guān)，使儀，打開電源開關(guān)，使儀器預(yù)熱器預(yù)熱20分鐘。分鐘。v為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照，預(yù)熱儀器時(shí)和不測(cè)定為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照，預(yù)熱儀器時(shí)和不測(cè)定時(shí)應(yīng)將試樣室蓋打開，使光路切斷。時(shí)應(yīng)將試樣室蓋打開，使光路切斷。 v（2）選定波長(zhǎng)）

7、選定波長(zhǎng) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)手輪，調(diào)至所需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)手輪，調(diào)至所需要的單色波長(zhǎng)。的單色波長(zhǎng)。 v（3）調(diào)節(jié)）調(diào)節(jié)T=0% 輕輕旋動(dòng)輕輕旋動(dòng)“0%”旋鈕，使數(shù)字顯示為旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”（此時(shí)試樣室是打開的）。（此時(shí)試樣室是打開的）。 v（4）調(diào)節(jié)）調(diào)節(jié)T=100% 將盛蒸餾水（或空白溶液，或純?nèi)軇⑹⒄麴s水（或空白溶液，或純?nèi)軇┑谋壬蠓湃氡壬笞苤械牡谝桓駜?nèi)，并對(duì)準(zhǔn)光路，把試的比色皿放入比色皿座架中的第一格內(nèi)，并對(duì)準(zhǔn)光路，把試樣室蓋子輕輕蓋上，調(diào)節(jié)透過率樣室蓋子輕輕蓋上，調(diào)節(jié)透過率“100%”旋鈕，使數(shù)字顯示旋鈕，使數(shù)字顯示正好為正好為“100.0”。 v（

8、5）吸光度的測(cè)定）吸光度的測(cè)定 將選擇開關(guān)置于將選擇開關(guān)置于“A”，蓋上試樣室，蓋上試樣室蓋子，將空白液置于光路中，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)節(jié)旋鈕，使蓋子，將空白液置于光路中，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)節(jié)旋鈕，使數(shù)字顯示為數(shù)字顯示為“.000”。將盛有待測(cè)溶液的比色皿放入比色。將盛有待測(cè)溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格內(nèi)，蓋上試樣室蓋，輕輕拉動(dòng)試樣架皿座架中的其它格內(nèi)，蓋上試樣室蓋，輕輕拉動(dòng)試樣架拉手，使待測(cè)溶液進(jìn)入光路，此時(shí)數(shù)字顯示值即為該待拉手，使待測(cè)溶液進(jìn)入光路，此時(shí)數(shù)字顯示值即為該待測(cè)溶液的吸光度值。讀數(shù)后，打開試樣室蓋，切斷光路。測(cè)溶液的吸光度值。讀數(shù)后，打開試樣室蓋，切斷光路。重復(fù)上述測(cè)定操作重復(fù)上述測(cè)

9、定操作12次，讀取相應(yīng)的吸光度值，取平次，讀取相應(yīng)的吸光度值，取平均值。均值。 v （6）關(guān)機(jī)）關(guān)機(jī) 實(shí)驗(yàn)完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，實(shí)驗(yàn)完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架用軟紙擦凈。并將比色皿座架用軟紙擦凈。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) v（1）為了防止光電管疲勞，）為了防止光電管疲勞，不測(cè)定時(shí)必須將試樣室蓋打開不測(cè)定時(shí)必須將試樣室蓋打開，使光路切斷，以延長(zhǎng)光電管的使用壽命。使光路切斷，以延長(zhǎng)光電管的使用壽命。 v（2）取拿比色皿時(shí)，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而）取拿比色皿時(shí)，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光學(xué)表面。不能碰比色皿的光學(xué)表面。 v（3）比色皿不能用堿

10、溶液或氧化性強(qiáng)的洗滌液洗滌，也不）比色皿不能用堿溶液或氧化性強(qiáng)的洗滌液洗滌，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附著的水或溶液應(yīng)用擦鏡紙或細(xì)能用毛刷清洗。比色皿外壁附著的水或溶液應(yīng)用擦鏡紙或細(xì)而軟的吸水紙吸干，不要擦拭，以免損傷它的光學(xué)表面。而軟的吸水紙吸干，不要擦拭，以免損傷它的光學(xué)表面。 任務(wù)二：樣品預(yù)處理任務(wù)二：樣品預(yù)處理v一、樣品的稱取和溶解：一、樣品的稱取和溶解：v在在100 mL燒杯中稱取燒杯中稱取10 g樣品，準(zhǔn)確至樣品，準(zhǔn)確至0.001 g。用。用112 mL 5055的水將樣品洗入的水將樣品洗入500 mL錐形瓶中，混勻。錐形瓶中，混勻。v二、脂肪和蛋白的去除：二、脂肪和蛋白的去除：

11、v按順序加入按順序加入24 mL硫酸鋅溶液、硫酸鋅溶液、24 mL亞鐵氰化鉀溶液和亞鐵氰化鉀溶液和40 mL緩沖溶液，加入時(shí)要邊加邊搖，每加完一種溶液都要充緩沖溶液，加入時(shí)要邊加邊搖，每加完一種溶液都要充分搖勻。靜置分搖勻。靜置15 min1 h。然后用濾紙過濾，濾液用。然后用濾紙過濾，濾液用250 mL錐形瓶收集。錐形瓶收集。任務(wù)三：乳粉亞硝酸鹽含量測(cè)定任務(wù)三：乳粉亞硝酸鹽含量測(cè)定v移取移取:20 mL濾液于濾液于50 mL比色管中，加水至約比色管中，加水至約30 mL。v在每個(gè)比色管中先加入在每個(gè)比色管中先加入3 mL顯色液顯色液1，邊加邊混；再加入，邊加邊混；再加入2.5 mL顯色液顯色

12、液2。小心混合溶液，使其在室溫下靜置。小心混合溶液，使其在室溫下靜置5 min，避免直射陽光。加入，避免直射陽光。加入1mL顯色液顯色液3，小心混合，使，小心混合，使其在室溫下靜置其在室溫下靜置5 min，避免直射陽光。用水定容至刻度，避免直射陽光。用水定容至刻度，混勻?；靹?。v在在15 min內(nèi)用內(nèi)用538 nm波長(zhǎng)，以空白試驗(yàn)液體為對(duì)照測(cè)定波長(zhǎng)，以空白試驗(yàn)液體為對(duì)照測(cè)定上述樣品溶液的吸光度。上述樣品溶液的吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作v分別移取分別移取0 mL、1mL、2mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、8 mL和和10 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于9個(gè)個(gè)50

13、 mL比色管中。在每比色管中。在每個(gè)比色管中加水，使其體積約為個(gè)比色管中加水，使其體積約為30 mL。v在每個(gè)比色管中先加入在每個(gè)比色管中先加入3 mL顯色液顯色液1，邊加邊混；再加入，邊加邊混；再加入2.5 mL顯色液顯色液2。小心混合溶液，使其在室溫下靜置。小心混合溶液，使其在室溫下靜置5 min，避免，避免直射陽光。加入直射陽光。加入1mL顯色液顯色液3，小心混合，使其在室溫下靜置，小心混合，使其在室溫下靜置5 min，避免直射陽光。用水定容至刻度，混勻。在，避免直射陽光。用水定容至刻度，混勻。在15 min內(nèi)，用內(nèi)，用538 nm波長(zhǎng)，以第一個(gè)溶液（不含亞硝酸鈉）為對(duì)照波長(zhǎng)，以第一個(gè)溶

14、液（不含亞硝酸鈉）為對(duì)照測(cè)定另外八個(gè)溶液的吸光度。測(cè)定另外八個(gè)溶液的吸光度。v將測(cè)得的吸光度對(duì)亞硝酸鹽質(zhì)量濃度作圖。亞硝酸根的質(zhì)量將測(cè)得的吸光度對(duì)亞硝酸鹽質(zhì)量濃度作圖。亞硝酸根的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)。亞硝酸根的質(zhì)量濃度以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)。亞硝酸根的質(zhì)量濃度以g/100 mL表示。表示。亞硝酸鹽含量計(jì)算亞硝酸鹽含量計(jì)算v式中：式中：vX樣品中亞硝酸根含量，樣品中亞硝酸根含量，mg/kg；vc根據(jù)濾液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的根據(jù)濾液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的NO2的濃度，的濃度，g/100mL；vm樣品的質(zhì)量，樣品的質(zhì)量，g；vV所取濾液的體積，所取濾液的體積，mL。v樣品中以亞硝酸鈉表示的亞硝酸鹽含量，按式計(jì)算：樣品