血管網(wǎng)狀細(xì)胞瘤 Von Hippel-Lindau病 遺傳性疾病

1、    血管網(wǎng)狀細(xì)胞瘤 Von Hippel-Lindau病 遺傳性疾病作者：羅冬冬 作者單位：溫州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，浙江 溫州 325027，1.內(nèi)分泌科;2.醫(yī)科所【摘要】 目的:探討川芎嗪對(duì)高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細(xì)胞(MCs)增殖及其細(xì)胞外基質(zhì)含量的影響。方法:體外培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞株，分對(duì)照組、高糖組、TMP組，分別培養(yǎng)12 h、24 h、48 h，CASY細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)細(xì)胞存活率;以CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖;以ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液細(xì)胞外基質(zhì)Col IV及FN的含量。結(jié)果:各TMP濃度組之間存活率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);

2、與對(duì)照組比較，高糖下培養(yǎng)24 h、48 h MCs增殖顯著增快(P<0.01)，分泌的Col IV及FN含量增多(P<0.05);與高糖組比較，TMP各組MCs增殖顯著減慢(P<0.01)，分泌Col IV及FN減少(P<0.01或P<0.05)。結(jié)論:川芎嗪可以有效抑制高糖的促增殖作用并能減少系膜細(xì)胞外基質(zhì)的增加。【關(guān)鍵詞】 糖尿病腎病 川芎嗪 細(xì)胞增殖 細(xì)胞外基質(zhì) 大鼠Effects of tetramethylpyrazine on proliferation of mesangial cells and the concentration of extra

3、cellular matrix in high glucose cultured rat mesangial cells LUO Dong-dong*,WANG Da-wang,NI Lian-song，SHEN Fei-xia, XIONG Shu-dao.*Department of Endocrinology, the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College, Wenzhou, 325027Abstract: Objective: To explore the effects of tetramethylpyrazine

4、on proliferation of mesangial cells and the concentration of extracellular matrix in high glucose cultured rat mesangial cells. Methods: Rat mesangial cells were divided into control group， high glucose group and TMP group, and were cultured for 12 h, 24 h and 48 h. At indicated time points, cellula

5、r survival rate and proliferation were identified with cell counting instrument and CCK-8, The supernatants were collected and the Collagen type IV and Fibronectin were detected with enzyme-linked immunosorbent assay. Results: The survival rates of different groups were not involved (P>0.05). Com

6、pared with control group, the cellular proliferation and the concentration of Collagen type IV and Fibronectin increased in high glucose group at 24 h and 48 h (P<0.05). Compared with that in high glucose group, the cellular proliferation and the concentration of Collagen type IV and Fibronectin

7、declined in different concentration TMP groups (P<0.01,P<0.05). Conclusion: Tetramethylpyrazine can significantly inhibit proliferation and secretion of Collagen type IV and Fibronectin in high glucose induced rat mesangial cells.Key words: diabetic nephropathy; tetramethylpyrazine; cellular p

8、roliferation; extracellular matrix; rat extracellular matrix糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)的主要病理改變是系膜細(xì)胞增殖及纖維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)、型膠原(Collagen type IV，Col IV)等細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)成分增多。川芎嗪又名四甲基吡嗪(tetramethylpyrazine，TMP)，是從傘形科藁本屬植物川芎根莖中提取分離的生物堿單體，具有改善微循環(huán)、血液流變學(xué)，降血糖、抗氧化、抗纖維化和拮抗鈣離子等藥理作用，已廣泛應(yīng)用于心

9、、腦、肺、腎及血管疾病的治療，大量臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明TMP對(duì)DN有很好的療效。本研究觀察了TMP對(duì)高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細(xì)胞(rat mesangial cells，MCs)增殖及FN、Col IV含量的影響，進(jìn)一步探討TMP對(duì)糖尿病腎病的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。1 材料和方法1.1 材料 大鼠腎小球系膜細(xì)胞株購自上海長征醫(yī)院;鹽酸川芎嗪粉劑購自山東長富潔晶藥業(yè)有限公司;正常葡萄糖(含5.5 mmol/L D-葡萄糖)及高糖(含25 mmol/L D-葡萄糖)DMEM培養(yǎng)液購自美國Gibco公司;胎牛血清(FCS)購自天津正江高科技有限公司;CCK-8試劑購自上海同仁化學(xué)研究所;FN及IV型膠

10、原ELISA試劑盒購自美國ADL公司;酶標(biāo)儀(BIO-TEK FL-800美國產(chǎn)品);細(xì)胞分析儀/CASY細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(德國CASY公司產(chǎn)品)。1.2 方法1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析，方差齊者組間比較用LSD-t檢驗(yàn)，方差不齊者用Tamhane's T2檢驗(yàn)。2 結(jié)果2.1 TMP對(duì)MC存活率的影響 各組存活率均大于90%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，見表1。2.2 TMP對(duì)MC增殖活力的影響 與對(duì)照組比較，高糖可以促進(jìn)MCs增殖，24 h、48 h高糖組OD值明顯升高(P<0.01)，且隨著時(shí)間的延長高糖促增殖作用更加明

11、顯。TMP干預(yù)組明顯抑制系膜細(xì)胞增殖，與高糖組比較OD值差異具有顯著性(P<0.01)，并且恢復(fù)至接近于甚至低于對(duì)照組水平(24 h TMP各劑量組及48 h TMP高劑量組P<0.01)，見表2。2.3 TMP對(duì)MCs分泌的FN及Col 的影響 與對(duì)照組比較，高糖組的12 h、24 h、48 h FN及Col 含量明顯增加(P<0.05);與高糖組相比，12 h、24 h TMP的高劑量組與中劑量組及48 h TMP各劑量組FN及Col 含量均有降低(P<0.01或P<0.05)，但不能恢復(fù)至低糖對(duì)照組水平;與對(duì)照組相比，TMP不同劑量組FN及Col 含量差異無

12、顯著性(P>0.05)，見表3、表4。3 討論以往的研究認(rèn)為,高糖環(huán)境對(duì)MCs的生長具有雙向調(diào)節(jié)作用，在培養(yǎng)早期(2448 h)高糖能促進(jìn)MCs增殖，此后高糖對(duì)MCs增殖起抑制作用1。在本實(shí)驗(yàn)中，用高糖刺激24 h、48 h后MCs增殖活性明顯增強(qiáng),與文獻(xiàn)報(bào)道一致。有研究發(fā)現(xiàn)TMP對(duì)體外培養(yǎng)的正常葡萄糖濃度的人胎腎小球系膜細(xì)胞增殖有抑制作用，并認(rèn)為其抑制增殖的機(jī)制與其干擾IL-6的產(chǎn)生有關(guān)4;TMP對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的MCs增殖亦有抑制作用5。本實(shí)驗(yàn)中，TMP和高糖共同培養(yǎng)MCs 12 h、24 h、48 h后，發(fā)現(xiàn)TMP對(duì)高糖誘導(dǎo)的MCs增殖具有明顯的抑制作用，在一定的范圍內(nèi)濃度越

13、高，抑制作用越強(qiáng);而且TMP不同劑量組與對(duì)照組及高糖組之間細(xì)胞存活率無明顯差異，提示應(yīng)用TMP干預(yù)治療DN時(shí)不會(huì)對(duì)腎臟系膜細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，對(duì)其臨床應(yīng)用的安全性提供了理論依據(jù)。DN的基本病理改變包括腎小球肥大、ECM增多和腎小球硬化。異常的ECM積聚主要表現(xiàn)為FN、型膠原以及層黏蛋白等過度增生。實(shí)驗(yàn)證明，無論是糖尿病動(dòng)物模型還是體外高糖環(huán)境培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞，高糖時(shí)ECM的合成是增加的，包括型、型、型膠原以及層黏蛋白、FN 等，被認(rèn)為與PKC系統(tǒng)和(或)TGF-1激活有關(guān)2。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在高糖環(huán)境下的各組MCs上清液中分泌的FN、Col 含量均明顯高于對(duì)照組，與van Det等3的報(bào)道一致。

14、有實(shí)驗(yàn)證明，TMP具有拮抗鈣和抗纖維化的作用,在延緩腎小球硬化的進(jìn)程中起著重要的作用，并初步表明TMP能在體外有效發(fā)揮抗腎間質(zhì)纖維化的作用6，7。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦表明，川芎嗪能明顯減少高糖刺激下的腎小球MCs外Col IV及FN的含量，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究證實(shí)。【參考文獻(xiàn)】1 Wolf G. Molecular mechanisms of diabetic mesangial cell hypertrophy: a proliferation of novel factorsJ. J Am Soc Nephrol,2002,13(10):2611-2613.2 Caenazzo C,Garb

15、isa S , Onisto M ,et al. Effect of glucose and heparin on mesangial alpha 1(IV)COLL and MMP-2/TIMP-2 mRNA expressionJ. Nephrol Dial Transplant, 1997,12 (3):443-448.3 Van Det N, Verhagen NA, Tamsma JT, et al. Regulation of glomerular epithelial cell production of fibronectin and trans-forming growth factor-beta by high glucose, not by angio-tensin IIJ. Diabetes,1997,46(5):834-840.4 孫林,易著文,虞佩蘭.川芎嗪對(duì)人胚腎小球系膜細(xì)胞增殖的影響及