大鼠門脈高壓癥脾次全切除術(shù)對部分免疫功能的影響

1、    作者：劉程偉 張雪松 王樹卿 羅維 張強【摘要】目的：通過門脈高壓癥（PHT）脾次全切除術(shù)后細胞免疫和體液免疫的變化，初步評價脾次全切除術(shù)在門脈高壓癥中的作用。方法：建立肝硬化PHT大鼠疾病模型。實驗分5組，每組10只。正常對照組（NCG），實驗對照組（ECG），全脾切除組（TSG），保留正常脾臟50的脾部分切除組（R50NSG），保留正常脾臟大小的脾部分切除組（RNSG）。術(shù)后4周對各組進行血常規(guī)、免疫球蛋白、T淋巴細胞亞群的測定及病理學檢查。結(jié)果：術(shù)后4周R50NSG組與RNSG組與NCG組和ECG組血常規(guī)、免疫球蛋白和T淋巴細胞亞群水平差異

2、無統(tǒng)計學意義。ECG光鏡下見假小葉，再生的肝細胞結(jié)節(jié)肝細胞索排列紊亂等肝硬化表現(xiàn)脾包膜增厚，脾實質(zhì)充血嚴重。脾內(nèi)纖維嚴重增生。R50NSG和RNSG光鏡下見肝纖維化程度減輕，脾包膜變薄，脾實質(zhì)輕度充血。結(jié)論：PHT殘余脾臟具有一定的生理功能；保留部分脾臟的脾部分切除術(shù)在一定程度上能夠維持機體的體液免疫和細胞免疫。    【關(guān)鍵詞】脾次全切除術(shù)門靜脈高壓癥，門靜脈免疫功能    The influence of subtotal splenectomy  on partial immunlogical function in rats

3、with poroal hypertension       【ABSTRACT】Objective:To detect the change of cell immunity and body fluid immunity after subtotal splenectomy in portal hypertension of rat ,and preliminarily evaluate the role of subtotal splenectomy in portal hypertension.Methods:We established the

4、 rat model of hepatic cirrhosis portal hypertension.Rats were divided to five groups:normal control group(NCG);experimental control group(ECG),total splenectomy group(TSG),retain fifty percent size of normal spleen group(R50%NSG),retain the same size of normal spleen group(RNSG).Measured the Blood r

5、outine,Immunoglobulin,T Iymphocyte subgroup and stained with hematoxylin and eosin (HE) at 4 weeks after surgery.Results:There were not significant different between RNSG and NCG in Blood routine,Immunoglobulin,T Iymphocyte subgroup at 4 weeks after operation.ECGcould be seen by light microscope tha

6、t the tissue of normal hepatic lobule was destructed,and appeared pseudolobule.Disarrangement of regenerated hepatic cell nodus and liver cell cord,fatty degeneration in hepatic cell,thickening of spleen capsule and serious congestion of spleen parenchyma,atrophy of white pulp and shrinking of folli

7、cle and germinal center R50%NSG and RNSG could be seen that hepatic fibrosis,spleen capsule thichening and congesition of splenic parenchyma to a less extent.Conclusion:Remaining spleen of portal hypertension caused by hepatic cirrhosis has physiology functions.In some degree,splenectomy of retainin

8、g the same size of normal spleen could maintain body fluid immunity and cell immunity of organism.    【KEY WORDS】Subtotal splenectomyPortal hypertensionImmunological function    門脈高壓癥（portal hypertension,PHT)表現(xiàn)有脾大和脾功能亢進，食管胃底靜脈曲張和嘔血、腹水等癥狀。脾臟切除是其治療方法之一，但對于脾臟的“切”和“?！鄙写嬖诜轴?。本文研究門脈高壓癥脾

9、次全切除術(shù)后實際免疫功能的變化，以期為臨床治療提供參數(shù)。    1  材料與方法    1.1  動物模型制備與分組  健康雄性Wistar大鼠100只，體重200250g。建立PHT大鼠模型：大鼠腹部皮下注射60CCl4（0.3ml100g）油溶液，首次劑量加倍（0.5ml100g），每4日1次，共15次，同時10乙醇溶液代替飲水，60d后隨機抽樣10只，測量門靜脈壓12mmHg（腹腔注射麻醉后，打開腹腔暴露門脈主干，于腸系膜前靜脈右側(cè)靠近門脈處分離出一回腸腸系膜靜脈分支，結(jié)扎其遠端，然后用血

10、管剪剪開一適宜缺口，將PE100導管自缺口插入后，沿腸系膜前靜脈上行，通過脾靜脈至門脈主干，固定導管并接通壓力換能器測量門靜脈壓力）及病理證實大鼠肝硬化PHT模型成功（建模過程中死亡35只）。實驗共分5組（10只組）：正常對照組（NCG）：自由飲食的正常大鼠，10水合氯醛水溶液300mg/kg腹腔注射麻醉后，剖腹切除部分大網(wǎng)膜；實驗對照組（ECG）：PHT大鼠，麻醉后剖腹切除部分大網(wǎng)膜；全脾切除組（TSG）：PHT大鼠，麻醉后剖腹，1號絲線雙重結(jié)扎脾門血管，行全脾切除，如有副脾一并切除；R50NSG組PHT大鼠，麻醉后剖腹，切除脾上極大部分，保留脾下極組織體積約為正常脾臟的50%；RNSG組：

11、PHT大鼠，麻醉后剖腹，切除脾上極大部分，保留脾下極組織體積約為正常脾臟大小。    1.2  指標與測定方法    1.2.1  血常規(guī)的測定  各組術(shù)后2、3、4周經(jīng)大鼠內(nèi)眥靜脈用細玻璃管采血，每次1ml置于含肝素的抗凝管中，利用Sysmex kx21儀器，電阻法（測血球計數(shù)）和比色法（測血紅蛋白）測定。    1.2.2  免疫球蛋白的測定  術(shù)后4周，取待測血清0.1ml，加生理鹽水0.3ml混勻，測IgG、 IgA各取10l，

12、測IgM取20l，分別注入G、A、M板孔中，放入37培養(yǎng)箱內(nèi)，48h后觀察結(jié)果，測沉淀直徑與對應標準曲線中查出免疫球蛋白的含量。    1.2.3  T淋巴細胞亞群測定  待測血樣加入含枸櫞酸鈉（3.13%）的抗凝管中，搖勻，按試劑盒(Becton Dickinson.USA)說明書操作。    1.2.4  組織形態(tài)學染色  術(shù)后4周，對肝臟、脾臟進行光鏡取材，置于10中性福爾馬林溶液固定24h，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋制成蠟塊，切片、蘇木素伊紅染色400倍光鏡下觀察。&

13、#160;   1.3  統(tǒng)計學處理  計量資料采用x±s表示，用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件包處理數(shù)據(jù)。    2  結(jié)  果    2.1  術(shù)后大鼠血常規(guī)的變化  見表1。  表1  各組大鼠術(shù)后血常規(guī)的比較    2.2  術(shù)后4周IgM,IgA,IgG水平  見表2。 ECG組較NCG組顯著降低，TSG組較EC

14、G組IgM水平顯著降低，IgA和IgG變化不明顯。R50NSG組與ECG組比較、RNSG組與NCG組比較，差異均無顯著性。見表2。 表2  各組大鼠術(shù)后4周IgM,IgA,IgG水平比較    2.3  術(shù)后4周外周血T淋巴細胞亞群水平  見表3。 表3  各組大鼠術(shù)后4周外周血T淋巴細胞亞群比較    2.4  大鼠肝臟、脾臟病理學變化  ECG組肝臟光鏡下見：假小葉內(nèi)肝細胞索排列紊亂，小葉中央靜脈缺如、偏位或出現(xiàn)兩個以上的中央靜脈，

15、再生的肝細胞結(jié)節(jié)肝細胞索排列紊亂，胞體大，核大，著色深，肝細胞還出現(xiàn)氣泡樣變，脂肪變性等（圖1），TSG組R50NSG組和RNSG組可見肝纖維化程度減輕（圖2）。    ECG組和TSG組脾臟光鏡下見：脾包膜增厚，脾實質(zhì)充血嚴重，脾內(nèi)纖維嚴重增生；白髓有不同程度萎縮，濾泡和生發(fā)中心變小，數(shù)量減少（圖3）。R50NSG組和RNSG組可見脾包膜變薄，脾實質(zhì)輕度充血，以包膜下明顯，輕度纖維化且有少量散在的小出血灶（圖4）    3  討  論    脾臟直接參于細胞介導免疫調(diào)節(jié)，對脾內(nèi)及外周血內(nèi)的免疫

16、活性細胞的量和比例有重要的調(diào)節(jié)作用，脾臟內(nèi)的T細胞占全身循環(huán)量的25，B細胞占10151。脾臟通過T細胞和可溶性脾因子對其它淋巴組織細胞群的變化進行調(diào)控。大鼠切脾后出現(xiàn)Th細胞減少和Ts細胞增多，這種變化達2月之久2。這種脾切除后免疫活性細胞調(diào)控紊亂比例失調(diào)，可能導致T細胞亞群功能和免疫調(diào)節(jié)功能發(fā)生紊亂。Th細胞的輔助功能下降，Ts細胞的抑制作用降低。T淋巴細胞亞群的紊亂，常引起免疫應答的改變：（1）T細胞對有絲分裂素刺激的反應增殖能力低下；（2）Ts活性增強，Th和放大T細胞活性下降；（3）T細胞數(shù)量和亞群比例失調(diào)。本實驗中。肝硬化PHT大鼠術(shù)前外周血的CD3、CD4+、CD8+較NCG降低

17、，全脾切除后外周血CD3+、CD4、CD8較脾大部切除后顯著降低，且以CD4降低尤為顯著，說明了全脾切除后細胞免疫功能更趨惡化。但是，RMSG的CD3、CD4、CD8術(shù)后和NCG比較無顯著性差異，說明保留約正常脾臟大小的脾部分切除術(shù)在一定程度上能夠維持機體的細胞免疫。    脾臟在機體免疫系統(tǒng)中占重要地位，是血源性抗原發(fā)生免疫應答的主要場所，又是產(chǎn)生抗體尤其是初級反應中IgM的主要基地34，IgM水平的下降，預示著體液免疫功能的低下。本實驗中術(shù)后4周RNSG與NCG比較IgA、IgG、IgM無明顯變化，而在TSG和R50NSG，IgM有下降趨勢，這說明脾臟切除者，可通過其它

18、淋巴器官部分代償，但IgM水平卻無法恢復。這可能是因為產(chǎn)生IgM的B淋巴細胞亞群CD20+，CD21+主要存在于脾臟，脾臟是產(chǎn)生IgM的主要場所之緣故。    對于肝硬化PHT患者，多數(shù)學者認為保留部分脾臟能夠消除脾亢，保留脾臟免疫功能，降低門靜脈壓力，余脾成為疏導處于高動力循環(huán)狀態(tài)的門靜脈血流的通道5，6。保留過多，脾亢得不到糾正，過少則不能很好地保留脾功能，通過側(cè)支循環(huán)所起到的分流降壓作用亦較少7。大量的實驗和臨床研究表明，PHT病人的整個免疫功能均低下，但作為機體最大的外周淋巴器官的脾臟，仍對病人的體液免疫和和細胞免疫具有重要的調(diào)控作用，且具有強大的抗感染等免疫功能。從本實驗結(jié)果看出，殘余脾臟具有一定的生理功能，保留部分脾臟大小的脾部分切除術(shù)在一定程度上能夠維持機體的體液免疫和細胞免疫功能。    參  考  文  獻    1Petroianu A.Subtotal splenectomy for treatment of retarted growth and sexual development associated with splenomegalyJ.Minerva Chir,2003,（3）：4134