大鼠原位肝移植模型制備方法的改進(jìn)

1、大鼠原位肝移植模型制備方法的改進(jìn)         【摘要】  目的 改進(jìn)二袖套法制備大鼠原位肝移植模型的方法。 方法 120只大鼠行原位肝移植,在原二袖套法基礎(chǔ)上改進(jìn)切取供肝方法,二針法縫合供、受體肝上下腔靜脈,出血點(diǎn)行熱止血。 結(jié)果 大鼠原位肝移植手術(shù)時(shí)間縮短,手術(shù)成功率96.7%,3周存活率94.2%。 結(jié)論 改進(jìn)的大鼠原位肝移植方法手術(shù)時(shí)間短,成功率高,穩(wěn)定可靠。 【關(guān)鍵詞】  肝移植; 疾病模型,動(dòng)物; 移植,同種   ABSTRACT:  Objectiv

2、e  To modify the two-cuff technique in rat orthotopic liver transplan tation.  Methods  On the basis of the previous two-cuff-technique, 120 cases of rat orthotopic liver transplantation were performed with modification of fast resecting the donor liver, two-stitch suturing suprahepat

3、ic inferior vena cavum and stoping bleeding with hot pin and so on.  Results  The time of operation was reduced, the 24 hours and 3 week survival rates were 96.7% and 94.2% respectively.  Conclusion  The modified methods shorten the operation time in rat orthotopic liver transpla

4、ntation.  It can enhance the stability and increase survival rate of rat orthotopic liver transplant models.   KEY WORDS:  liver transplantation; disease models,animal; transplantation,homologous   Kamada創(chuàng)建的二袖套法大鼠原位肝移植術(shù)是目前大鼠原位肝移植術(shù)中最常用的術(shù)式,該術(shù)式用套管重建肝下下腔靜脈和門靜脈,內(nèi)支架管重建膽管,肝上下腔

5、靜脈直接吻合1。筆者于2006年1月-2007年1月在二袖套法基礎(chǔ)上采用改進(jìn)切取供肝等方法進(jìn)行大鼠原位肝臟移植,建立穩(wěn)定的大鼠原位肝移植模型,報(bào)告如下。   1  材料和方法   1.1  材料及動(dòng)物  健康雄性SD大鼠240只福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證號(hào):SCXK(閩)2004-0002。體質(zhì)量(250±30)g,術(shù)前12 h禁食,不禁水。分別采用7號(hào)和5號(hào)動(dòng)脈鞘導(dǎo)管自制肝下下腔靜脈、門靜脈袖套,膽道支架采用一次性硬膜外導(dǎo)管。雙人雙目手術(shù)顯微鏡(XTS-6A型,成都科技醫(yī)療器械成套公司)。5-0、9-0醫(yī)用

6、無(wú)損傷縫合針線(寧波醫(yī)用縫線廠)。   1.2  方法   1.2.1  供體手術(shù)與供肝修整  持續(xù)半開放式乙醚吸入麻醉。*背靜脈注射肝素生理鹽水1 mL(50 U/mL)。劍突下3 cm橫切口入腹,離斷鐮狀韌帶,9-0絲線結(jié)扎左膈下靜脈。游離第一肝門,在膽總管分叉下方1 cm處剪開膽總管,置入內(nèi)支架導(dǎo)管并結(jié)扎固定,近門靜脈處9-0絲線結(jié)扎幽門靜脈,游離尾狀葉,5-0絲線結(jié)扎并切斷肝食管交通支。游離肝下下腔靜脈,直接從肝后用彎鉗套5-0絲線附帶脂肪結(jié)締組織結(jié)扎右腎上腺靜脈,結(jié)扎右腎靜脈。游離腹主動(dòng)脈腹腔干上方約12 mm,預(yù)

7、置1號(hào)絲線暫不結(jié)扎。游離髂動(dòng)脈分叉上方的腹主動(dòng)脈并留置針插管,助手結(jié)扎腹腔干上方腹主動(dòng)脈(圖1A),同時(shí)重力法(40 cm高度)持續(xù)滴注乳酸林格液(04 ,45滴/min),立即用04 生理鹽水沖灑肝臟表面,使供肝迅速進(jìn)入冷缺血狀態(tài)。于近胸骨處剪開膈肌,剪斷胸腔內(nèi)的下腔靜脈,先開放肝上下腔流出道,使深紅色的部分灌注液留滯胸腔(圖1B);在左腎靜脈上緣剪斷肝下下腔靜脈,開放肝下下腔靜脈流出道。近膈肌環(huán)處離斷并提起肝上下腔靜脈,離斷肝周韌帶(圖1C),盡量不翻動(dòng)、擠壓肝臟,待供肝成土黃色時(shí),于脾靜脈分叉處離斷門靜脈,剪斷肝總動(dòng)脈,于遠(yuǎn)端離斷右腎靜脈和右腎上腺靜脈,取下肝臟放入04 乳酸林格液中,參

8、照Kamada法1分別給肝下下腔靜脈和門靜脈安裝自制袖套管。   1.2.2  受體手術(shù)  麻醉同供體。正中縱切口入腹,離斷鐮狀韌帶及左三角韌帶,游離、結(jié)扎左膈下靜脈(待下肝時(shí),于結(jié)扎線遠(yuǎn)端切斷),游離肝尾狀葉,5-0絲線結(jié)扎切斷肝食管交通支。在右腎靜脈上方游離肝下下腔靜脈,直接從肝后用彎鉗套5-0絲線附帶脂肪結(jié)締組織結(jié)扎右腎上腺靜脈,只扎不斷,作為肝下下腔靜脈后壁的一個(gè)固定點(diǎn)以方便套管。游離膽總管并靠肝門切斷,游離、結(jié)扎、切斷肝固有動(dòng)脈遠(yuǎn)端。在幽門靜脈水平上方游離門靜脈。微血管夾依次阻斷肝下下腔靜脈及門靜脈。門靜脈穿刺注入生理鹽水2 mL驅(qū)血,顯微血管

9、鉗迅速阻斷肝上下腔靜脈后近肝離斷,在左右門靜脈分支處剪斷門靜脈,再近肝剪斷肝下下腔靜脈,移去原肝。翻轉(zhuǎn)顯微血管鉗使受體肝上下腔靜脈斷端朝向偏上,將供肝原位放入受體肝床,右側(cè)縫一針固定，左側(cè)一針法連續(xù)外翻吻合肝上下腔靜脈,縫合最后2針前生理鹽水沖洗血管腔排氣。放出受體門靜脈部分高凝血,含肝素生理鹽水沖洗供、受體門靜脈以減少血栓形成。套管法吻合門靜脈,移去門靜脈血管夾,同時(shí)迅速移去鉗夾肝上下腔靜脈的顯微血管鉗,結(jié)束無(wú)肝期。同法吻合肝下下腔靜脈后開放恢復(fù)血流(圖1D)。將膽總管支架管插入受體膽總管管腔內(nèi)9-0絲線結(jié)扎固定。創(chuàng)面滲血處予以大頭針針帽酒精燈燒熱后熱止血,檢查無(wú)活動(dòng)性出血后關(guān)腹。燈烤復(fù)溫,

10、禁飲4 h后自由進(jìn)水,術(shù)后12 h自由進(jìn)食。術(shù)后未用抗生素。   A:腹主動(dòng)脈阻斷和灌注同時(shí)進(jìn)行; B:大部分灌注液滯留胸腔; C:提起肝上下            2  結(jié)  果   熱缺血時(shí)間1 min,各主要操作步驟時(shí)間（中位數(shù)）:供體手術(shù)20 min,供肝修整3 min,肝上下腔靜脈吻合9 min,門靜脈重建3 min,無(wú)肝期15 min,肝下下腔靜脈重建3 min。術(shù)后24 h內(nèi)死亡(手術(shù)死亡)4只:麻醉意外、氣栓各

11、1只,因門靜脈袖套滑脫出血死于失血性休克1只,因肝上下腔后壁出血而死于失血性休克1只。手術(shù)成功率96.7%(116/120)。術(shù)后死亡3只，1只第3天死于呼吸道感染,1只第7天死亡原因不明,1只第9天死于膽道梗阻。死亡原因均由尸解證實(shí)。3周生存率94.2%(113/120)。   3  討  論   對(duì)于大鼠肝移植模型的研究主要是在熟練的顯微手術(shù)操作基礎(chǔ)上簡(jiǎn)化手術(shù)操作、縮短無(wú)肝期和總體手術(shù)時(shí)間、提高生存率等方面3-4。大鼠無(wú)肝期最長(zhǎng)不能超過(guò)26 min5。筆者采取快速切取供肝方法,其特點(diǎn):(1)非傳統(tǒng)開胸阻斷,精簡(jiǎn)取肝步驟;(2)阻斷

12、與灌注同時(shí)進(jìn)行,減少熱缺血時(shí)間;(3)大部分供肝內(nèi)血液及部分灌注留滯胸腔,利于腹腔內(nèi)視野清晰,便于手術(shù)操作;(4)最大限度減少翻動(dòng)、擠壓供肝;(5)灌注時(shí)離斷肝周韌帶,提高取肝效率;(6)無(wú)膈肌環(huán)的供體肝上下腔靜脈,明顯縮短修肝時(shí)間,且避免供、受體肝上下腔靜脈吻合時(shí)進(jìn)針困難,進(jìn)一步縮短無(wú)肝期。   在供肝植入前,筆者采用大頭針針帽酒精燈燒熱后點(diǎn)燙肝后及膈面的滲血點(diǎn)止血,甚至細(xì)小的右膈靜脈亦可點(diǎn)燙止血,而免于縫扎;由于供肝植入后凝血功能未能立即恢復(fù),這些滲血可能是術(shù)后出血原因6;如果顯微鑷戳傷肝臟或輕度撕裂肝臟表面,亦可采用此法,既減少術(shù)后出血機(jī)會(huì),又縮短手術(shù)時(shí)間;在無(wú)顯微凝

13、血鑷時(shí)是一種有效方法。植肝時(shí)肝上下腔靜脈的吻合是決定無(wú)肝期長(zhǎng)短的關(guān)鍵,筆者采用二針法縫合,可避免血管扭曲,縮短無(wú)肝期。吻合過(guò)程應(yīng)注意:(1)邊角的間距不宜過(guò)大,以防復(fù)流時(shí)出血;(2)受體肝上下腔靜脈后壁的右膈下靜脈及可能出現(xiàn)的小靜脈開口,不可外翻至吻合口外,以免術(shù)后出血;(3)避免鑷子用力鉗夾血管壁而造成血管內(nèi)膜的損傷;(4)勿將縫線收得過(guò)緊,以防血管狹窄;(5)縫合末沖排氣泡防止氣栓。【參考文獻(xiàn)】  1 Kamada N,Calne RY. Orthotopic liver transplantation in the rat.Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainageJ. Transplantation, 1979,28(1):47-50.2 彭方興,鄭本波,劉立新,等.大鼠原位肝移植動(dòng)物模型制作要點(diǎn)J. 中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志, 2005,12(2):117-119.3 程 飛,縱 滔.大鼠原位肝移植動(dòng)物模型研究進(jìn)展J. 中國(guó)交通醫(yī)學(xué)雜志, 2005,19(2):160-162.4 董家鴻,韓本立,葉 晟.大鼠原位肝移植的顯微外科技巧J. 中