生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范ppt課件

1、:個人防護裝備容器中的病原體走漏預(yù)防接種感染途徑/感染劑量傳播易感宿主規(guī)程/設(shè)備潛伏期醫(yī)學監(jiān)測規(guī)程/設(shè)備生物安全防護實驗室生物安全防護實驗室硬件：硬件：實驗室的設(shè)計建造實驗室的設(shè)計建造設(shè)備的配置設(shè)備的配置個人防護裝備個人防護裝備軟件：軟件：嚴格的管理規(guī)程嚴格的管理規(guī)程良好的操作規(guī)程良好的操作規(guī)程:分散相內(nèi)含有微生物的氣溶膠稱之為生物氣溶膠分散相內(nèi)含有微生物的氣溶膠稱之為生物氣溶膠:病原微生物實驗室相關(guān)感染的途徑病原微生物實驗室相關(guān)感染的途徑1 1）表表9-1 9-1 （p.78p.78）:病原微生物實驗室相關(guān)感染的途徑病原微生物實驗室相關(guān)感染的途徑3 3）:菌液瓶):一些在自然環(huán)境中可以繁殖的

2、微生物，一旦進入實驗室一些在自然環(huán)境中可以繁殖的微生物，一旦進入實驗室的空調(diào)或通風系統(tǒng)，污染空調(diào)冷卻水，可形成更廣泛的的空調(diào)或通風系統(tǒng)，污染空調(diào)冷卻水，可形成更廣泛的微生物氣溶膠污染。微生物氣溶膠污染。患有呼吸道傳染病或皮毛上染有病原微生物的實驗動物患有呼吸道傳染病或皮毛上染有病原微生物的實驗動物也可以產(chǎn)生微生物氣溶膠。也可以產(chǎn)生微生物氣溶膠。微生物氣溶膠在一個實驗室內(nèi)產(chǎn)生后，還可以通過氣流微生物氣溶膠在一個實驗室內(nèi)產(chǎn)生后，還可以通過氣流轉(zhuǎn)移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整個建筑物的轉(zhuǎn)移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整個建筑物的空氣。空氣。 : Laboratory Biosafety M

3、anual 3rd edition - lab commissioning and certification - lab biosecurity conceptsBiosafety:To promote the use of safe practices in the handling of pathogenic microorganisms in the laboratory during transportation in field investigations in manufacturing facilities in health-care facilitiesLaborator

4、y Biosafety Manual1st editionWHO Laboratory Biosafety Manual- translated into F, S, P, Ch, Ru- available on web, CD-Rom, hard copies 1983199320192019需結(jié)合國家法規(guī)、要求和我國具體情況需結(jié)合國家法規(guī)、要求和我國具體情況:辦公室辦公室:1. 嚴禁用口吸移液管、將實驗材料置于口內(nèi)、或舔標簽；2. 所有的實驗操作盡量減少氣溶膠和微小液滴的形成；3. 應(yīng)限制使用注射針頭和注射器。除了進行腸道外注射或抽取實驗動物體液外，注射針頭和注射器不能用于移液或用作其他

5、用途；4.實驗室應(yīng)制訂并執(zhí)行處理溢出物的標準操作程序。- 出現(xiàn)溢出、事故以及明顯或可能暴露于感染性物質(zhì)時，處理后，必須向?qū)嶒炇邑撠熑藞蟾妫? 實驗室應(yīng)如實記錄有關(guān)暴露和處理情況，保存相關(guān)記錄；:5. 污染的液體在排放到生活污水管道以前必須清除污染采用化學或物理學方法）。根據(jù)所處理的微生物因子的危險度評估結(jié)果準備專門的污水處理系統(tǒng)。6. 只有保證在實驗室內(nèi)沒有受到污染的文件紙張才能帶出實驗室:1. 實驗室應(yīng)保持清潔整齊，嚴禁擺放和實驗無關(guān)的物品。2. 每天工作結(jié)束后應(yīng)清除工作臺面的污染。若發(fā)生具有潛在危害性的材料溢出應(yīng)立即清除污染。3.所有受到污染的材料、標本和培養(yǎng)物在廢棄或清潔再利用之前，必須

6、先清除污染。4. 感染性材料的包裝和運輸應(yīng)遵循國家和或國際相關(guān)規(guī)定。5. 如果窗戶可以打開，則應(yīng)安裝防止節(jié)肢動物進入的紗窗。:（五生物安全管理的指導原則（五生物安全管理的指導原則:1. BSL-3的使用應(yīng)符合的有關(guān)規(guī)定。2. 張貼在實驗室入口門上的國際生物危害警告標志,應(yīng)注明生物安全級別以及管理實驗室出入的負責人姓名，并說明進入該區(qū)域的所有特殊條件，如免疫接種狀況等。3. 實驗室防護服應(yīng)為長袖、背面開口的隔離衣或連體衣，應(yīng)穿著鞋套或?qū)Ｓ眯?。實驗室防護服不能在實驗室外穿著，且必須在清除污染后再清洗。最好使用一次性連體防護服。4. 開啟各種潛在感染性物質(zhì)的操作均必須在生物安全柜或其他類似的防護設(shè)施

7、中進行。:5. 有些實驗室操作，或在進行感染了某些病原微生物的動物操作時，必須配備呼吸防護裝備。6. 實行雙人工作制，嚴禁任何人單獨在實驗室內(nèi)工作。7. 實驗記錄未經(jīng)可靠消毒不得帶出實驗室。通常使用傳真進行原始記錄的傳輸。8. 工作人員應(yīng)開展健康監(jiān)測。應(yīng)收集并妥善保存工作人員的基線血清分裝、保管）、并定期體檢和采集血清。9. 每天早、晚測體溫，有相應(yīng)的體征或身體不適者不宜進入實驗室工作BSL-2以上實驗室的實驗人員：身體狀況良好以上實驗室的實驗人員：身體狀況良好不應(yīng)進入者：發(fā)熱、妊娠、其他因素造成的抵抗力低下不應(yīng)進入者：發(fā)熱、妊娠、其他因素造成的抵抗力低下 已在實驗室控制區(qū)連續(xù)工作已在實驗室控

8、制區(qū)連續(xù)工作4h以上以上 其他原因造成的疲勞狀態(tài)其他原因造成的疲勞狀態(tài):1. 每次使用前檢查2. 不打開觀察窗3. 列出工作所需物品的清單，以減少雙臂進入破壞氣流4. 打開風機5-10min5. 窗式報警器、氣流報警器6. 任何造成安全柜內(nèi)氣流紊亂的不良操作都會危及操作者的安全一一. 操作準備操作準備:二二. 物品擺放與污染措施物品擺放與污染措施盡量少放儀器和物品盡量少放儀器和物品不要阻塞氣口的空氣流通不要阻塞氣口的空氣流通廢物容器廢物容器/袋置安全柜內(nèi)袋置安全柜內(nèi) 密封密封 消毒消毒安全柜內(nèi)潔凈物品安全柜內(nèi)潔凈物品/污染物品分開放置消毒巾的墊置）污染物品分開放置消毒巾的墊置）操作盡量工作臺中

9、央，注意動作對定向氣流的影響操作盡量工作臺中央，注意動作對定向氣流的影響工作用紙不允許放在生物安全柜內(nèi)工作用紙不允許放在生物安全柜內(nèi)盡量減少操作者背后人員的走動、快速開關(guān)實驗室的門盡量減少操作者背后人員的走動、快速開關(guān)實驗室的門（進入時，敲門提醒正在操作的人員）（進入時，敲門提醒正在操作的人員）8. 禁止使用本生燈禁止使用本生燈/酒精燈，紫外燈不是必需的酒精燈，紫外燈不是必需的:潔凈物與污染物分開放置: 在實驗結(jié)束時，包括儀器在內(nèi)的生物安全柜里的所有物品應(yīng)清除表面污染后，才能移出安全柜； 在每次使用前后清除生物安全柜內(nèi)表面的污染，工作臺面和內(nèi)壁要用消毒劑進行擦拭殺滅任何微生物），但不包括送風濾

10、器的擴散板； 在每天實驗結(jié)束時，應(yīng)擦拭生物安全柜的工作臺面、四周以及玻璃的內(nèi)外側(cè)等部位以清除表面的污染。 在對目標生物體有效時，可以采用漂白劑溶液或70%酒精來消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無菌水再次進行擦拭。:研究試劑溢漏或潑灑后，立即清除污染物及污染的表面在更換HEPA過濾器或內(nèi)部維修之前，必須對已用于感染性材料工作的生物安全柜進行消毒在生物安全柜維護、更換過濾器、以及性能測試或重新安置之前，必需消毒最普通的氣體消毒方法：甲醛熏蒸推薦將安全柜一直維持運行狀態(tài)。如果要關(guān)閉的話，則應(yīng)在關(guān)機前運行5min以凈化內(nèi)部的氣體。:禁用非必需工作臺面和內(nèi)壁要用消毒工作臺面和內(nèi)壁要用消毒劑

11、進行擦拭劑進行擦拭不要擦拭送風濾器的擴散不要擦拭送風濾器的擴散板！板！:干燥器干燥器爆裂、瓶子碎片和感染性物質(zhì)飛出爆裂、瓶子碎片和感染性物質(zhì)飛出培養(yǎng)物攪拌器，混合器，攪拌器培養(yǎng)物攪拌器，混合器，攪拌器產(chǎn)生氣溶膠、噴濺和溢出產(chǎn)生氣溶膠、噴濺和溢出皮下注射針頭皮下注射針頭意外接種意外接種產(chǎn)生氣溶膠或感染性物質(zhì)溢出產(chǎn)生氣溶膠或感染性物質(zhì)溢出離心機離心機產(chǎn)生氣溶膠、濺出和管子破裂產(chǎn)生氣溶膠、濺出和管子破裂超速離心機超速離心機管子破裂管子破裂高速攪拌器，組織勻漿器高速攪拌器，組織勻漿器飛沫、滲漏和容器破裂飛沫、滲漏和容器破裂超聲波破碎機、超聲波清潔器超聲波破碎機、超聲波清潔器產(chǎn)生氣溶膠、聽力受損、皮炎產(chǎn)

12、生氣溶膠、聽力受損、皮炎凍干機冷凍干燥機）凍干機冷凍干燥機）產(chǎn)生氣溶膠、直接接觸污染產(chǎn)生氣溶膠、直接接觸污染水浴水浴微生物生長，疊氮化鈉和一些金屬形成爆微生物生長，疊氮化鈉和一些金屬形成爆炸復(fù)合物炸復(fù)合物:1. 為防止感染，嚴禁用嘴吸液。應(yīng)使用機械移液裝置。2. 所有的吸管都應(yīng)該有棉塞以減少對移液器或吸球的污染。建議使用帶有濾芯的吸頭。在BSL-2及以上級別實驗室中，最好避免使用玻璃吸管。3. 對于感染性材料不能用吸管吹打來達到混勻的目的，操作時吸管應(yīng)放入操作液面下的三分之二處，以防止產(chǎn)生氣泡和氣溶膠。從吸管吹出液體時也不要太用力，吸管內(nèi)的液體應(yīng)自動流出，不要強制性排出預(yù)留液。4. 污染的吸管

13、應(yīng)立即浸沒在含有適宜的消毒劑的防破碎的容器里。在處理之前，應(yīng)浸泡足夠長的時間。盛裝廢棄吸管的容器不銹鋼盒子應(yīng)放在生物安全柜里5. 嚴禁用帶有注射針頭的注射器吸液6. 為防止從吸管滴落的感染性物質(zhì)發(fā)生擴散，工作臺表面應(yīng)放一塊具有吸收性能的材料，使用后應(yīng)按感染性廢棄物予以處理。:離心分類離心分類 轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（rpm） 微速離心微速離心 15 ,00 0 低低/高速離心高速離心 2,00020,000 超速離心超速離心 120 ,000 :- 離心機機械故障離心機機械故障- 實驗器材故障，如離心管等實驗器材故障，如離心管等- 產(chǎn)生氣溶膠；產(chǎn)生氣溶膠；- 操作者失誤。操作者失誤。:1. 所有離

14、心機應(yīng)處于正常工作狀態(tài)/合格機械性能，根據(jù)廠家說明書進行操作。2. 離心機位于適宜位置和高度，工作人員能看見離心桶，便于進行各項操作。3. 離心管和標本容器根據(jù)廠家要求選用，最好使用塑料制品，使用前應(yīng)檢查有無破損。必須在安全柜內(nèi)打開蓋子。4. 使用轉(zhuǎn)頭時應(yīng)注意轉(zhuǎn)頭蓋與轉(zhuǎn)頭型號是否匹配。離心桶的裝載、平衡、密封和打開必須在生物安全柜內(nèi)進行。空離心桶配平時應(yīng)該用蒸餾水或70乙醇、異丙醇，不應(yīng)使用鹽水和次氯酸鹽溶液。離心管內(nèi)液面水平距管口應(yīng)留出一定空隙，以確保離心過程中液體不會溢出，尤其是使用角轉(zhuǎn)頭時更要注意。（密封的離心桶/安全杯）5. 應(yīng)該每天檢查在特定的轉(zhuǎn)速下，離心杯的內(nèi)表面有無污物。離心轉(zhuǎn)頭

15、和離心桶應(yīng)每天檢查有無腐蝕點以及極細的裂縫，以確保安全。離心桶、轉(zhuǎn)頭和離心機腔每次用后都應(yīng)該消毒。每次用后，應(yīng)該把離心桶倒放，以排凈離心配平的液體。:對于高致病性病原微生物，必須要高度警惕離心過程中產(chǎn)生的氣溶膠風險。大型離心機上應(yīng)加裝負壓罩，以及時吸出離心機排出的氣體，并排至實驗室的過濾通風系統(tǒng)，在BSL-3及以上級別實驗室尤其要注意。所有的離心管必須帶蓋密封，其開啟應(yīng)在安全柜內(nèi)進行。微型離心機則可放在安全柜內(nèi)離心，但要注意其對安全柜氣流的影響。如果不能在安全柜內(nèi)離心也無負壓罩，則必須將密封的轉(zhuǎn)頭在安全柜內(nèi)打開。:表表9-3 9-3 可能產(chǎn)生危害的微生物操作相關(guān)儀器設(shè)備可能產(chǎn)生危害的微生物操作相關(guān)儀器設(shè)備和消除和消除/ /降低危險的辦法降低危險的辦法:影響使用。影響使用。:不要用注射器代替移液管不要重新給針頭蓋帽或夾針頭。使用針頭鎖定型注射器，以防針頭和注射器分離，或者使用一體的一次性注射器。運用正確的實驗室技術(shù)，如： 吸液時要小心，盡量減少