論文封面及要求1

1、明狂中除蒸上摩專科（自考）畢業(yè)論文論文題目 丹參銅IIa磺酸鈉微量雜志的分離與結構鑒定作者姓名施添浩專 業(yè)藥學準考證號碼提交日期丹參酮IIa磺酸鈉微量雜質的分離及結構鑒定目 錄摘要 3前言 5第一章文獻綜述 61.1 丹參形態(tài) 61.2 丹參的化學成份及其藥理作用 71.3 丹參酮IIa磺酸鈉的藥理作用及研究現狀 8第二章原料藥中微量成分的分離及結構鑒定132.1 實驗方法 132.1.1 實驗儀器 132.1.2 實驗試劑 132.1.3 原料藥中微量成分的分離 132.2 目標化合物的結構鑒定 152.3 獻 172.4 18丹參酮IIa磺酸鈉微量雜質的分離及結構鑒定施添浩摘要：丹參酮II

2、a磺酸鈉，是從藥材丹參中提取的主要脂溶性有效成分丹參酮 IIa經磺化反應后形成的一種水溶性鈉鹽，由于磺酸基的引入，提高了丹參酮IIa 的水溶性，在治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞等疾病方面顯示出與丹參酮IIa所無法比擬的優(yōu)越性，成為主要的心血管類中藥。目前從丹參中提取丹參酮IIa的方法和藥理活性研究較多，但對于丹參酮IIa 磺酸鈉雜質的研究很少，原料中的微量雜質成分的研究還是空白。在對丹參酮IIa磺酸鈉的藥理作用，在藥物代謝動力學和相關文獻報導的制備工藝等進行綜合考 察的基礎上本課題采用色譜及波譜方法對丹參酮IIa磺酸鈉進行微量雜質的分離及結構鑒定。同時，本文建立了高效液相色譜法測定原料藥丹參酮H

3、A磺酸鈉微量成份含量的方法，可用來對原料藥和制劑進行質量控制。關鍵詞：羥基丹參酮IIa磺酸鈉；丹參酮IIa磺酸鈉；丹參酮IIa；分離；結構鑒定Separation of Microimpurity and Identification ofSodium Tanshinone IIa SulfonateAbstract: Salvia miltiorrhiza is one of the most important tradition Chinese medicinal materials that possess the function of both promoting blood fl

4、ow and removing blood stasis with anti-coronary artery disease. The consumed quantity only in the aspect of injection has been exceeded 2 billion dosages every year. However, because the undetermined active ingredients and relaxed index of quality control induced the instable effects of clinic trate

5、rment, and, moreover, usually adverse functions, which lead salvia miltiorrhiza unable to accommodate requirement of contemporary Chinese medicinal materials melting world.Sulfotanshinone sodium is asodium chloride of water-solubility after sulfonating tanshinone IIa of liposolubility active ingredi

6、en tabstraeted in salvia miltiorrhiza.It is an effective medicine of angiocardiopathy to treat coronary artery disease, anginacordis, and myocardial infarction.The amount of clincal utilization continuous. increasing with the high proportion of patients of angiocardiopathy induces raw material resou

7、rce of salvia miltiorrhiza insufficient in China. So it becomes an extensive focus point in fharmaceutical factory that sufficient utilize and cut down uymost dissipation resource of salvia miltiorrhiza.Keywords:1-Hydroxy-Tanshinone IIa sulfonate ;sodium tanshinoneH A sulphonate(STS) tanshinoneIIa;s

8、eparation;identification前言丹參是活血化淤的傳統(tǒng)中藥，具有良好的抗冠心病等作用。具制劑及復方制劑品 種繁多，僅注射劑的年使用量就達20億支以上，但多數產品有效成分不明確，質量控 制指標不嚴格，由此導致臨床療效不穩(wěn)定，不良反應時常出現，因此不能適應中藥生 產現代化和向國際市場挺進的要求。丹參酮IIa磺酸鈉，是從藥材丹參中提取的主要脂溶性有效成分丹參酮 IIa經磺化 反應后形成的一種水溶性鈉鹽，由于磺酸基的引入，提高了丹參酮IIa的水溶性，在治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞等疾病方面顯示出與丹參酮IIa所無法比擬的優(yōu)越性， 成為主要的心血管類中藥11。由于我國心血管疾病患者在人

9、群中比例居高不下，該藥品市場需求量呈逐年增加趨勢，但是因為其雜質不明確，安全問題一直是制藥企業(yè)關 心的問題。目前從丹參中提取丹參酮IIa的方法和藥理活性研究較多，但對于丹參酮IIa磺酸鈉雜質的研究很少，原料中的微量雜質成分的研究還是空白，且對雜質分離也沒有一個統(tǒng)一較好的方法。由于丹參酮IIa磺酸鈉是丹參提取物經過化進一步磺化制得， 因此其可能的雜質主要有兩個來源，一是作為磺化原料的參酮IIa中沒有純化干凈的其他丹參酮類化合物，一是磺化過程中丹參酮IIa其他殘留丹參酮磺化產物及其副產物，在對丹參酮IIa磺酸鈉的藥理作用，藥物代謝動力學和相關文獻報導的制備工藝 等進行綜合考察的基礎上本課題采用色譜

10、及波譜方法對丹參酮IIa磺酸鈉進行微量雜質的分離及結構鑒定1,2。第一章文獻綜述1.1 丹參形態(tài)丹參是唇形科鼠尾草屬植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根莖。該屬植物約900-1100種，主要分布于熱帶或溫帶。我國有約84種，分布于全國 各地，尤以西南為多。除了丹參外，三葉鼠尾草，云南鼠尾草的根也可以作為丹參入藥。其植物學性狀和產地如下6,7 (見圖1):圖1多年生直立草本；根肥厚，肉質，外面朱紅色，內面白色，長 5-15厘米， 直徑4-14毫米，疏生支根。莖直立，高 40-80厘米，四棱形，具槽，密被長柔 毛，多分枝。葉常為奇數羽狀復葉，葉柄長 1.3-7.

11、5厘米，密被向下長柔毛，小 葉3-5,長1.5-8厘米，寬1-4厘米，卵圓形成橢圓狀卵圓形或寬披針形，先端 銳尖或漸尖，基部圓形成偏斜，邊緣具圓齒，草質，兩面被疏柔毛，下面較密， 小葉柄長2-14毫米，與葉軸密被長柔毛。輪傘花序 6花或多花，下部者疏離， 上部者密集，組成長4.5-17厘米縣長梗的頂生或腋生總狀花序；苞片技針形， 先端漸尖，基部楔形，全緣，上面無毛，下面略被疏柔毛，比花梗長或短；花梗 長3-4毫米，花序軸密被長柔毛或具腺長柔毛?；ㄝ噻娦?，帶紫色，長約 1.1 厘米，花后稍增大。外面被疏長柔毛及具腺長柔毛，具緣毛，內面中部密被白色 長硬毛，具11脈，二唇形，上唇全緣，三角形，長約

12、 4毫米.寬約8毫米，先 端具3個小尖頭，側脈外緣具狹翅，下辱與上唇近等長，深裂成2齒，齒三角形， 先端漸尖?；ü谧纤{色，長2-2.7厘米，外被具腺短柔毛，尤以上唇為密，內面 離冠筒基部約2-3毫米有斜生不完全小疏柔毛毛環(huán)， 冠筒外伸，比冠檐短，基部 寬2毫米，向上漸寬，至喉部寬達8毫米，冠檐二唇形，上唇長12-15毫米，鐮 刀伏，向上豎立，先端微缺，下唇短于上唇，3裂，中裂片長5毫米，寬達10 毫米，先端二裂，裂片頂端具不整齊的尖齒，側裂片短，頂端圓形，寬約3毫米。 能育雄蕊2,伸至上唇片，花絲長3.5-4毫米，藥隔長17- 20毫米，中部關節(jié) 處略被小疏柔毛，上臂十分伸長，長14-17毫米

13、，下臂短而增粗，藥室不育，頂 端聯合。退化雄蕊線形，長約 4毫米。花柱遠外伸，長達40毫米，先端不相等 2裂，后裂片極短，前裂片線形。花盤前方稍膨大。小堅果黑色，橢圓形，長約 3.2厘米，直徑1.5毫米?；ㄆ?-8月，花后見果。產河北，山西，陜西，山東， 河南，江蘇，浙江，安徽,江西及湖南；生于山坡、林下草叢或溪谷旁，海拔 120-1300米。日本也有6，7。1.2 丹參的化學成分及其藥理作用丹參為唇形科植物丹參(Salviae miltiorrhizaeBge.)的干燥根及根莖。性微寒，味苦，是臨床最常用中藥之一。具有祛瘀止疼、活血調經、清心除煩的 功效、是活血化瘀的常用中藥。丹參的主要有效

14、成分為脂溶性的二帖類化合物和水溶性酚酸類化合物。具 中的丹參酮I、II ,異丹參酮I、II ,異丹參酮、丹參酸甲醋、丹參新酮、丹參 酚、原兒茶醛、原兒茶酸等都具有藥學活性。由于丹參的上述各種療效均與丹參 酮IIa直接相關，且丹參酮IIa標準品較易得到，其色譜行為與其它成分差距較 大，以及丹參酮IIa具有廣泛藥理作用，因此作為脂溶性成分的代表，并被中華 人民共和國藥典用作為丹參藥材的質量控制指標1。丹參廣泛用于治療心血管疾 病的中藥復中，以丹參為主要的中藥制劑開發(fā)也相當活躍14【丹參酮】(tanshinone )具有多種生物活性，如抗月中瘤、抗血栓形成和抗炎 等，常在中醫(yī)中被用來治療炎性疾病。丹

15、參酮 IIa (tanshinone IIa )在丹參中 含量最多，丹參酮 IIa 磺酸鈉(sodium tanshinone IIa sulphonate, STS )是 丹參酮IIa的衍生物?！镜⑼狪Ia ( TanshinoneIIa) 是從傳統(tǒng)的活血化淤類中藥丹參(Salvia miltiorrhizaBge)中提取的脂溶性有效成分，易溶于乙醇、丙酮、乙醴等有機溶劑，微溶于水，分子式為C?H?O?,分子量294.33，室溫下外觀性狀為紅褐色 粉末或紅色結晶。丹參酮幾乎不溶于水，口服吸收差，生物利用度低，一般應通過 注射給藥。在空氣中丹參酮R A迅速降解，而pH和復方成分則對該成分降解

16、影響 不大。丹參有效成分可分為脂溶性的丹參酮類(主要成分為1)及水溶性的丹參酸 類(包括丹參素、原兒茶醛等)網5。有效成分具有抗心肌缺血、抗菌、抗雄性激素作用，水溶性成分具有抗心肌缺血和增 加冠狀動脈血流量等生物活性4。故中國藥典2000年版中將丹參的提取工藝定 為醇提和水提結合的工藝路線。不少生產廠家雖按藥典工藝生產，但產品檢測結 果往往仍不合格。為此，本文從原料、提取工藝以等方面對丹參酮IIa磺酸鈉質量問題進行研究9。上世紀60年代Kakisswa確定了丹參酮IIa的結構式；隨后，Baidlie 等人 合成了丹參酮IIa。由于丹參酮IIa腸道吸收差，臨床起效慢，故植物化學家錢明坤等人半合成

17、了丹參酮IIa磺酸鈉，并由上海制藥一廠、中藥三廠等制備成 注射液制劑，用于心腦血管疾病的治療和預防。注射液推向市場具確切的療效得 到廣大醫(yī)患的歡迎?！镜⑼?IIa 磺酸鈉】(Sodium tanshinone IIa sulfonate , STS) 是從丹參 中分離出二菇酶類化合物丹參酮后經磺化得到的水溶性物質?；瘜W成份主要有隱 丹參酮，丹參酮n a( tanshinone IIa),羥基丹參酮IIa,丹參酮甲脂，異隱丹參酮 以及丹參新酮等。適用于冠心病、腦中風等心腦血管疾病。8 ,91.3 丹參酮IIa磺酸鈉藥理作用的研究現狀：1.3.1 丹參酮IIa磺酸鈉對心血管系統(tǒng)的影響對心肌的影響

18、藥理實驗表明，對麻醉狗一次靜脈推注 STS20 mg/kg后，血壓升高，心輸出 量和左心室做功量稍有增加，心率和外周血管阻力的變化不顯著。 王志敏等進一 步報道STS曾加在位大鼠心臟的收縮幅度與上面的結果一致，并對STS寸心肌和溶血的作用進行了觀察，發(fā)現離體豚鼠心臟灌流中，STS 0.5 - 20 / mL灌流20min,隨濃度而加重抑制心臟收縮幅度。麻醉大白鼠靜脈注射40 mg/kg能輕度增加在位心臟收縮幅度，0.1 mg/ mLL寸離體兔左心室乳頭肌在缺氧條件下，電刺激 收縮幅度下降一半所需要的時間延長。0.02或0.1 mg/ mL使兔紅細胞在低滲條 件下的破裂減小，又減少牛血清白蛋白凝

19、固。25 - 75 Ng/ mLL寸離體豚鼠左心室乳頭肌膜電位和動作電位的振幅和時程無明顯影響。并進一步推測藥物對離體心臟和在體心臟的影響不同，可能由于：在離體心臟灌流中，STS卬制心肌收縮是藥物直接長時間作用于心肌，而體 內給藥中，藥物在給藥瞬間血濃度很高，但很快趨向下降；藥物在體內受到代謝 轉化；神經系統(tǒng)的影響；豚鼠與大白鼠的種鼠差異。STSig輕度增加大鼠在位心臟收縮力。增加收縮力的藥物可能會增加心肌耗氧量。 但這類藥物也可能通過降 低左心室舒張末期壓和心容積，即降低室壁張力和心臟體積而降低心肌耗氧量。 又從STS寸乳頭肌在缺氧條件下收縮力下降50%所需要的時間延長，表明藥物似 乎可以減

20、少心肌對氧的需求，有助于心絞痛緩解。接著，我國學者從分子水平進 一步對STS寸心肌的作用機制進行了探討。通過豚鼠離體心臟 Langendorff灌流 法，造成心肌鈣反常模型，給予不同濃度的STS乍為心肌保護劑，觀察STS寸心肌 鈣反常的保護作用，并與已知的鈣拮劑異搏定比較，探討STS勺鈣拮抗作用。實驗結果表明，STS寸心肌鈣反常損傷具有明顯的保護作用，抑制鈣內流， 減輕鈣反常過程中心肌組織鈣沉積和心肌損傷所致的蛋白酶釋放(P < 0.01 ),且該作用在一定范圍內具有劑量依賴關系， 且作用效果優(yōu)于異搏定。同時作者用 電鏡進行了超微結構觀察，比較了正常對照組，鈣反常組，鈣反常加異搏定組，

21、鈣反常加STSH。結果表明與正常對照組相比，鈣反常組出現典型損傷，肌原纖 維極度收縮，I、A帶融合，Z線扭曲、排列紊亂，形成許多同心收縮帶，線粒體 明顯月中脹、基質疏松。部分線粒體內外膜及峙斷裂；肌膜破裂，間盤嚴重分離。鈣反常組加STS10mg/L、20mg/L的兩組心肌形態(tài)學改善不佳，力口30 mg/L、40 mg/L 的兩組心肌形態(tài)學明顯改善，尤以30mg/Lffl為佳，除線粒體輕度月中脹、糖原略減 少外，心肌細胞結構基本正常。2 mg/L異搏定組心肌形態(tài)學亦有改善，但不如STS 30mg/L、40 mg/L兩組。進一步證實STSR通過其鈣拮抗作用保護心肌免受鈣反 常損傷。新制備的家兔心肌

22、細胞線粒體，在體外條件研究了STS寸家兔正常的和異丙基腎上腺素(ISP)興奮的心肌線粒體攝取鈣活力的響。結果表明 STS寸線粒 體的主動攝取鈣的影響也是具有鈣通道阻滯劑樣的作用。并能減少或抑制ISP所引起的心肌線粒體鈣超載，從而起到保護心肌線粒體和心肌細胞免遭上述病理原因引起的高鈣沖擊和細胞壞死的后果。這可能即是 T治療冠心病心絞痛和胸悶及 改善缺血性心電圖；抗心肌缺血和縮小梗塞范圍；降低缺血后的乳酸增加等藥理 作用的共同生化基礎。通過分離的成年豚鼠心室肌單細胞在高鉀（25 mmol/L）溶液中部分除極化使鈉通道失活，用細胞內刺激誘發(fā)慢反應動作電位。20仙mol/L 的STS寸這種慢反應動作電

23、位有明顯的抑制作用。 在1-20仙mol/L濃度范圍內，STS 對0.28仙mol/L的異內腎上腺素強化的慢反應動作電位有濃度依賴性抑制作用。 而且，隨異內腎上腺素濃度的增加（69-0.55 mol/L）抑制作用更加明顯，進一步 說明STST能是一種鈣拮抗劑。通過甲狀腺粉在誘導大鼠甲亢過程中心肌微粒體 Na+, K+-ATPas0 Ca2+-ATPaseMg2+-ATPaSe性變化，曾林等探討高甲狀腺激素水平作用下 STS寸 大鼠心肌微粒體ATPase舌性的保護作用及機制。實驗證實ST杯干擾甲狀腺粉誘 脈流量，供給了心肌充足的氧，保護ATPase舌性，以糾正心肌細胞內異常的鈣代 謝，減少細胞內

24、Ca2璐載，對心肌起到保護作用。應用膜片鉗技術，研究STS寸豬冠脈平滑肌KAT的KCa勺作用，從分子水平闡明其擴冠機制。實驗結果表明， 在內面向外式膜片方式下，5 20仙mol/ L的ST羽明顯激活KATP表現為通道 開放概率、膜片通道開放數目增加，而且STS4可明顯增加KCeffi道開放概率，表 現出明顯激活作用，因此，STS寸原代培養(yǎng)豬冠脈平滑肌上KAT附KC4勻有直接激 活作用，STS寸這兩種通道是否有間接作用尚需進一步證實。實驗結果進一步從 分子水平證實STS對原代培養(yǎng)豬冠脈平滑肌上KAT和KCa勻有直接激活作用，這 可能也是它們舒張冠脈的重要機制之一，而且由此可推測，STS!過對KA

25、TP KCa的鉀通道開放和鈣通道阻滯的協(xié)同或聯合作用，可明顯減少血管平滑肌上的自發(fā)電活動，引起血管舒張，在心血管疾病的治療中具有重要的應用價值。利用在體家兔缺血預適應（ischemia preconditioning , IPC）模型，隨機將家兔24只分 為心肌缺血組（IR）、缺血預適應組（IPC）和STSR合缺血預適應組（DS-201+IP。， 應用心外膜單相動作電位（MAP探針記錄技術檢測缺血-再灌注過程中心肌復極 50%時（MAPD50及心律失常發(fā)生率和持續(xù)時間；TTO色測定梗死面積；HEEfe 色病理組織學觀察，研究STS寸家兔缺血預適應心肌電生理參數的影響及保護作用。結果表明，與IR

26、組相比，IPC組缺血5 min時的MAPD50迅速縮短（P < 0.05）, 缺血20 min時的MAPD50短明顯減?。≒ < 0.05）,復灌30 min后MAPD50過度 延長程度明顯減?。≒ < 0.05）。同時，缺血再灌注中室性心律失常發(fā)生率明顯 降低（P < 0.05）。在DS - 201+IPC組，缺血5 min時未見MAPD50速縮短（P < 0.05）,缺血20 min及復灌30 min后MAPD50缺血再灌注中室性心律失常發(fā)生率 與IPC組無差異（P < 0.05）。病理學檢測顯示，IPC組心肌梗死面積及組織損傷 程度均明顯小于IR組3,

27、4。DS-201+IPC&心肌梗死面積及組織損傷程度均小于IPC 組。實驗結果顯示，DS-201聯合IPC取消了缺血早期IPC顯著縮短MAPD50效應。 但對IPC抗缺血再灌注心律失常作用無顯著影響；STS增強IPC縮小心肌梗死面積和減輕組織損傷的作用。其機制可能是IPC能抑制心肌細胞線粒體ATFW,減少 ATP勺水解，有效保存心肌細胞的能量儲備。STS降低IR后線粒體脂質過氧化物 的含量，改善線粒體膜的流動性。用培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞STS寸血管緊張素R誘導的心肌細胞肥大及p-JNK,絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶I表達的影響，發(fā) 現STS顯著降低血管緊張素R誘導的心肌細胞蛋白含量、蛋白合

28、成速率的增加，對p-JNKS達具有劑量依賴性的抑制作用；同時上調絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶 I表達。據此推測，ST凱心肌肥厚機制與上調絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶I , 抑制p-JNKg達相關。下一步研究應著重于 STStER©及p35信號通路的上下游 分子的影響，進一步闡明ST凱心肌肥厚的機制，為其在臨床用于心肌肥厚的防 治提供實驗依據11,13對心血管系統(tǒng)的影響、對腦血管和細胞的影響、對月中瘤細胞的作用、對神 經系統(tǒng)的影響、抗菌作用目前對丹參酮IIa及其鈉鹽的藥理作用研究取得了一定成果，但很少有人報道其在心血管受體的藥理學方面和在體內與其他藥物的相 互作用方面的研究5 o但是其雜質一直

29、很少有研究，丹參酮IIa磺酸鈉原料及 丹參酮IIA磺酸鈉注射液上市后，發(fā)現無論是原料還是水針劑在生產和銷售過程 中都會由于儲存而出現酸性增強，含量降低的現象因為原有質量標準沒有對丹參 酮IIa磺酸鈉原料及丹參酮IIa磺酸鈉制劑有關物質進行有效監(jiān)控。經 HPLC僉 查，丹參酮IIa磺酸鈉原料及制劑中均存在一未知雜質成分高達7%-15%目前，丹參酮IIa磺酸鈉研究主要還是集中在其藥理活性的探討上，原料中的微量雜質成分的研究還是空白。由于丹參酮IIa磺酸鈉是丹參提取物經過化進 一步磺化制得，因此其可能的雜質主要有兩個來源，一是作為磺化原料的參酮 IIa中沒有純化干凈的其他丹參酮類化合物， 一是磺化過

30、程中丹參酮IIa其他殘 留丹參酮磺化產物及其副產物，基于此方面的考慮，本課題采用色譜及波譜方法 對丹參酮IIa磺酸鈉的微量雜質的分離及結構鑒定。 采用硅膠、大孔樹脂等柱層 析方法對丹參酮IIa磺酸鈉的微量雜質進行制備分離，運用1H,13C, NM電波譜技術鑒定化合物的結構。我們準備在這方面進行初步的研究。 進一步制備大量高 純度樣品作為雜質含量測定和結構鑒別及質量控制的方法，并比較了不同條件下 的分離效果，建立了一個簡單的含量測定方法可以用來作為原料藥的和注射劑的 質量控制。第二章原料藥中微量成分的分離及結構鑒定2.1 實驗方法2.1.1 實驗儀器Agilent 1100 系列高效液相色譜儀S

31、him-pack CLC-ODS-C18（150mn*6.0mn 5 叱 m）色譜柱VW勰紫外檢測器HP Chemstation色譜工作站（美國惠普公司）JZH柱溫箱（天津金洲科學儀器有限公司）旋蒸蒸發(fā)儀2.1.2 實驗試劑甲醇（色譜純，江蘇漢邦科技有限公司）乙酸（分析純，南京化學試劑有限公司）氯仿（分析純，上海凌峰化學試劑有限公司）丙酮（分析純，南京化學試劑有限公司）95叱醇 硅膠H （200-300目）大孔樹脂2.1.3 原料藥中微量成分的分離準確稱取原料藥粗品2g,置于100ml圓底燒瓶中加水約25ml,超聲使其充232.520min分溶解。然后置于回流裝置上溫度 90c回流四個小時，將

32、樣品轉移到 500ml楔 形瓶內置旋蒸儀上蒸干，樣品用40%乙醇溶解，抽濾。冷卻后上樣。（原料藥高 效液相色譜見圖1）圖1原料藥粗品高效液相色譜圖原料藥上大孔樹脂吸附兩個小時后用40%乙醇洗脫。用試管接儲分，流速不能過快。大孔樹脂收集所得儲分反相板檢識（展開劑 50刈醇），對照品用95猿醇溶 解。點板后合并相同微分，置于100ml楔形瓶內于旋蒸儀上蒸干，然后用 95%： 醇少量溶解，旋蒸蒸干（如果殘留物成大片狀且色澤不均勻可用 95%：醇再次溶 解，然后蒸干）。取出殘留物轉入試劑瓶內，得 DST-1粗品.待上硅膠柱。取DST-1粗品100mg取硅膠20g,硅膠柱采用濕法裝柱，干法上樣。以氯仿：

33、 丙酮=1: 1洗脫，氣泵加壓。用10ml試管收集微分，TLC檢識 展開劑為氯仿： 甲醇=8: 2。合并儲分后，高效液相檢測，流動相：甲醇：2%昔酸水=60% 40%柱溫35C；流速：1ml/min ；檢測波長：272nm檢測含量達到97%A上（見圖 2-1 , 2-2） 0mAU-660-680-700-720-740mAU-715-720-725VWD1 A, Wavelength=272(I:NEWFOL-108111900.D)1012min2-1 DST-1.VWD1 A, Vgth=272 nm (I:NEWFOL 108111902.D)I'I.-730 -735 -10

34、mi圖2-2 DST-1粗品圖效液相色譜圖2. 2目標化合物的結構鑒定及結果討論：羥基丹參酮IIa磺酸鈉的結構鑒定：對DST-1粗品上硅膠柱分離得到的樣品 DST-1進行氫譜共振檢測，測定結果見圖。DST-l HIM CD3QD 葡M WE圖3-1DST-1樣品氫譜掃描圖3S， End 3S SK-T fiw& T 墀官； EHM 二 KWS- fis-T _sfts4 Bs WEq 埼導聲8V。第bem toqE E 自高M 8.- hs-T OES- «s- SB 18* w SA n 國«“FK2 32« m Bs圖3-2樣品氫譜掃描圖)2.2.1丹

35、參酮IIa磺酸鈉的結構鑒定1HNMRR 據( 500MHz, TMS , DMSO-d6 , 6 (ppm) 7.85(1H,d,J=8.4 Hz), 7.56(1H,d,J=8.1 Hz)說明為芳環(huán)上的氫，2.33(3H , s)為甲基峰，且與雙鍵相連， 1.29(6H, s)為兩個甲基峰,3.08(2H,t,J=6.1Hz), 1.72(2H,m), 1.62(2H,m)為三個 -CH2-,結構片斷與丹參酮IIa骨架結構相似，與文獻報道的丹參酮IIa磺酸鈉 數據相比，化學位移向低場移動，且峰的裂分要清晰；與丹參酮IIa相比，6 H7.16(1H,d,J=1.1解消失，且2.33(3H, s

36、)沒有被裂分，但其他的峰位與裂分基本 相似，說明STS的母核結構為丹參酮IIa ,且在16位磺化。(見表2.1) 2.2.2羥基丹參酮IIa磺酸鈉的結構鑒定1H NMR 數據 6 H(ppm): 7.87(d,J=8Hz,1H)、7.85(d,J=8Hz,1H)為兩相互偶合 的芳環(huán)氫，2.48(s,3H)為甲基，與雙鍵相連，1.40(s,3H)為甲基，1.28(s,3H)為甲基，1.98(m,2H)為兩個次甲基上的氫，2.15(m,1H), 1.53 (m,1H)為次甲基上的兩個 氫，和化合物丹參酮IIa磺酸鈉相比，少了一個次甲基，但多出兩個相互偶合， 化學位移在5.38(d,J=2Hz,1H

37、), 4.59(d,J=2.5Hz,1H)的氫，考慮到二者的化學位移， 以及偶極溶劑DMSO-d6與羥基形成氫鍵，可以初步推斷其可能為羥基與叔甲基 相連的結構片斷。再加上在 2.15(m,J=13.35Hz,1H) ,1.53(m,J=13.35Hz,1H)可知這 兩個氫是諧偶，由此可知，該羥基應該連在1位。表工1 0TS的HNMR數據Tail shin one | A(500MHz* TMS，CDCb，3(ppm) 口可67.8" 1H, d, J= &4Hz)77.56(1H, d. J = 8.1Hz)167.28QH, d, J=8Hz)7.10(2H, d,J=8H

38、z)7.66(2H, d, J = 8.2)7.45(2H, & J = 8.2)7.16(1HS d. J = 1.1)I 3,08 J= 6,1Hz)17-CH331& 19-CH32.33(3H, s)L72(2H, m)1.62(2H. m)1.29(6H» s)2.86(2H, t, THz)2.04(3H. s)1.10-1.62(411, m)0.93(6H, s)3.18(2H, m)2.20( 3H. d,Ll) m)L62(2H, m)1.26(6H, s)STS (500MHz, TMS, STS (100MHz. TMS, DMS。-&，8(ppm) C