實(shí)驗(yàn)二顯微鏡的使用酵母菌的觀察細(xì)菌的單染色及簡(jiǎn)單染色

1、實(shí)驗(yàn)二（一）顯微鏡的構(gòu)造、性能和使用方法（一）顯微鏡的構(gòu)造、性能和使用方法一、目的要求一、目的要求了解普通光學(xué)顯微鏡了解普通光學(xué)顯微鏡( (復(fù)式顯微鏡復(fù)式顯微鏡) )的構(gòu)造、的構(gòu)造、基本原理、維護(hù)和保養(yǎng)的方法基本原理、維護(hù)和保養(yǎng)的方法學(xué)習(xí)并掌握普通光學(xué)顯微鏡的正確使用學(xué)習(xí)并掌握普通光學(xué)顯微鏡的正確使用方法方法二、光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)二、光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)機(jī)械和支架系統(tǒng)機(jī)械和支架系統(tǒng)照明系統(tǒng)照明系統(tǒng)光學(xué)放大系統(tǒng)光學(xué)放大系統(tǒng)三、油鏡的工作原理三、油鏡的工作原理增加照明亮度增加照明亮度增加顯微鏡的分辨率增加顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率：顯微鏡的分辨率：顯微鏡能辨顯微鏡能辨別兩點(diǎn)之間的最小距離的能力

2、。別兩點(diǎn)之間的最小距離的能力。 D=/2NA=/2nsin(/2 ) D：分辨率：分辨率NA：物鏡的數(shù)值孔徑值：物鏡的數(shù)值孔徑值 ：可見(jiàn)光的波長(zhǎng)（平均：可見(jiàn)光的波長(zhǎng)（平均0.550.55 m) m) n: n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率質(zhì)的折射率 ：鏡口角（即入射角）：鏡口角（即入射角）四、顯微鏡的使用方法四、顯微鏡的使用方法觀察前的準(zhǔn)備觀察前的準(zhǔn)備顯微鏡的安置顯微鏡的安置光源調(diào)節(jié)光源調(diào)節(jié)根據(jù)個(gè)人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡根據(jù)個(gè)人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡 右眼看清右眼看清調(diào)節(jié)左目鏡的視度調(diào)節(jié)圈調(diào)節(jié)左目鏡的視度調(diào)節(jié)圈扳動(dòng)鏡管，調(diào)節(jié)至瞳孔間距扳動(dòng)鏡管，調(diào)節(jié)至瞳孔間距顯微觀察

3、顯微觀察低倍鏡觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察（高倍鏡觀察（同焦現(xiàn)象同焦現(xiàn)象）油鏡觀察油鏡觀察在待觀察的樣品區(qū)域滴加香柏油，從側(cè)面注視，用在待觀察的樣品區(qū)域滴加香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將載物臺(tái)緩慢上升，使油鏡浸在鏡油中。粗調(diào)節(jié)器將載物臺(tái)緩慢上升，使油鏡浸在鏡油中。顯微鏡用畢后的處理顯微鏡用畢后的處理下降載物臺(tái)，取下載玻片；下降載物臺(tái)，取下載玻片；用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙沾取少量用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙沾取少量酒精乙醚洗液擦去鏡頭上殘留的油跡，最后用干凈的酒精乙醚洗液擦去鏡頭上殘留的油跡，最后用干凈的擦鏡紙擦去殘留的洗液；擦鏡紙擦去殘留的洗液；用擦鏡紙清潔物鏡及目鏡，用

4、綢布清潔顯微鏡的金屬用擦鏡紙清潔物鏡及目鏡，用綢布清潔顯微鏡的金屬部件；部件；將鏡體各部分復(fù)原。將鏡體各部分復(fù)原。五、思考題五、思考題用油鏡觀察時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題？在載玻片和鏡頭之間滴加用油鏡觀察時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題？在載玻片和鏡頭之間滴加香柏油有何作用？香柏油有何作用？什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？ 影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？ P47五、五、2.（）（）（3）（）（4）（二）酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別（二）酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別目的要求目的要求觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式。觀察

5、酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式。學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。基本原理基本原理 美藍(lán)是一種無(wú)毒性染料美藍(lán)是一種無(wú)毒性染料. .氧化型呈現(xiàn)藍(lán)色氧化型呈現(xiàn)藍(lán)色, ,還原型呈現(xiàn)無(wú)色還原型呈現(xiàn)無(wú)色. .用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色染色, ,代謝活力強(qiáng)的細(xì)胞具有較強(qiáng)的還原能力代謝活力強(qiáng)的細(xì)胞具有較強(qiáng)的還原能力, ,能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o(wú)色的還原型能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o(wú)色的還原型. .因此因此, ,具有還原能力的酵母活細(xì)胞為無(wú)色具有還原能力的酵母活細(xì)胞為無(wú)色, ,死死細(xì)胞或代謝能力弱的衰老細(xì)胞為藍(lán)色細(xì)胞或代謝能力弱的衰老細(xì)胞為藍(lán)色. .

6、實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)器材菌種菌種啤酒酵母啤酒酵母溶液或試劑溶液或試劑 0.1%0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液呂氏堿性美藍(lán)染色液儀器或其他用具儀器或其他用具顯微鏡，蓋玻片，載玻片，濾紙，擦鏡紙。顯微鏡，蓋玻片，載玻片，濾紙，擦鏡紙。實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟制片制片在載玻片中央加一滴在載玻片中央加一滴0.1%0.1%美藍(lán)美藍(lán)取菌少許取菌少許混混勻勻蓋上蓋玻片蓋上蓋玻片靜置靜置3min3min、0.5h0.5h觀察觀察用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽生殖用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽生殖根據(jù)顏色鑒別死活細(xì)胞根據(jù)顏色鑒別死活細(xì)胞活細(xì)胞：無(wú)色；死細(xì)胞：藍(lán)色活細(xì)胞：無(wú)色；死細(xì)胞：藍(lán)色實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪圖說(shuō)明你所觀察到的酵母菌的形態(tài)

7、特征及繪圖說(shuō)明你所觀察到的酵母菌的形態(tài)特征及出芽生殖方式。出芽生殖方式。記錄染色時(shí)間對(duì)酵母菌死活細(xì)胞數(shù)量的影響記錄染色時(shí)間對(duì)酵母菌死活細(xì)胞數(shù)量的影響P75表表-1。思考題思考題呂氏堿性美藍(lán)染色液作用時(shí)間的不同，對(duì)酵呂氏堿性美藍(lán)染色液作用時(shí)間的不同，對(duì)酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響？試分析其原因。母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響？試分析其原因。調(diào)節(jié)手動(dòng)光輪調(diào)節(jié)孔徑光闌手柄聚光器的升降鏡頭復(fù)原、手動(dòng)光輪調(diào)到最低檔細(xì)菌的單染色及革蘭氏染色細(xì)菌的單染色及革蘭氏染色（一）簡(jiǎn)單染色法（一）簡(jiǎn)單染色法目的要求目的要求學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法；簡(jiǎn)單染色法；

8、鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無(wú)菌操作技術(shù)鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無(wú)菌操作技術(shù)。基本原理基本原理借助物理因素（如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛借助物理因素（如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等）和化學(xué)因素（如：細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等）和化學(xué)因素（如：正負(fù)離子之間的相互吸引等）的作用而進(jìn)行的。正負(fù)離子之間的相互吸引等）的作用而進(jìn)行的。實(shí)實(shí)驗(yàn)器材驗(yàn)器材菌種菌種土壤樣品分離純化后得到的細(xì)菌土壤樣品分離純化后得到的細(xì)菌染色劑染色劑草酸銨結(jié)晶紫染液草酸銨結(jié)晶紫染液番紅染液番紅染液儀器或其他用具儀器或其他用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無(wú)菌水等。顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無(wú)菌

9、水等。操操作作步步驟驟涂涂 片片干干 燥燥固固 定定 染染 色色 鏡鏡 檢檢 水水 洗洗 干干 燥燥實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果根據(jù)觀察結(jié)果，繪出細(xì)菌形態(tài)圖。根據(jù)觀察結(jié)果，繪出細(xì)菌形態(tài)圖。思考題思考題（P76P76五、五、2. 2. （）（）（2 2）（）（3 3）在進(jìn)行細(xì)菌涂片時(shí)應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？在進(jìn)行細(xì)菌涂片時(shí)應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？細(xì)菌制片時(shí)為什么要進(jìn)行加熱固定？在加熱固細(xì)菌制片時(shí)為什么要進(jìn)行加熱固定？在加熱固定時(shí)應(yīng)注意什么？定時(shí)應(yīng)注意什么？為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察？為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察？（二）革蘭氏染色法（二）革蘭氏染色法目的要求目的要求學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法；學(xué)習(xí)并初步

10、掌握革蘭氏染色法；了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類(lèi)鑒定中了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類(lèi)鑒定中的重要性。的重要性。實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)器材菌種菌種枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌12-18h12-18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物大腸桿菌約大腸桿菌約24h24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物土壤樣品分離純化后得到的細(xì)菌土壤樣品分離純化后得到的細(xì)菌染色劑染色劑草酸銨結(jié)晶紫染液草酸銨結(jié)晶紫染液盧戈氏碘液盧戈氏碘液95%95%乙醇乙醇番紅染色液番紅染色液儀器或其他用具儀器或其他用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無(wú)菌水等顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無(wú)菌水等。操操作作步步驟驟采用三區(qū)涂片法制片采用三區(qū)涂片法制片大腸桿菌大腸桿菌枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌大腸桿菌與枯草芽孢桿菌大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合涂片混合涂片操操作作步步驟驟大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合涂片油鏡下形態(tài)（革蘭氏染色）大腸桿菌萌發(fā)芽孢的枯草芽孢桿菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果列表說(shuō)明你所觀察到的細(xì)菌形狀、顏色和革列表說(shuō)明你所觀察到的細(xì)菌形狀、顏色和革蘭氏染色反應(yīng)。蘭氏染色反應(yīng)。 菌菌 種種 形形 態(tài)態(tài) 顏顏 色色 結(jié)果（結(jié)果（、）思考題思考題你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)