單克隆抗體(用)

1、編輯編輯ppt編輯編輯ppt專題專題2 細胞工程細胞工程動物細胞融合與單克隆抗體動物細胞融合與單克隆抗體編輯編輯ppt學(xué)習目標學(xué)習目標 1.1.通過閱讀課文、圖片，能說出動物細通過閱讀課文、圖片，能說出動物細胞融合的原理、方法、過程、意義胞融合的原理、方法、過程、意義 2.2.通過回憶抗體的產(chǎn)生過程，能理解單通過回憶抗體的產(chǎn)生過程，能理解單克隆抗體的概念克隆抗體的概念 3.3.通過小組合作學(xué)習，教師提供的資料通過小組合作學(xué)習，教師提供的資料分析自主構(gòu)建單克隆抗體的制備過程分析自主構(gòu)建單克隆抗體的制備過程 4.4.通過閱讀課本和資料，能說出單克隆通過閱讀課本和資料，能說出單克隆抗體的優(yōu)點與應(yīng)用抗

2、體的優(yōu)點與應(yīng)用編輯編輯ppt一、動物細胞融合一、動物細胞融合編輯編輯ppt活動一：閱讀課本活動一：閱讀課本P52P52思考與討論：思考與討論： 1.1.誘導(dǎo)動物細胞融合的方法？誘導(dǎo)動物細胞融合的方法？ 2.2.動物細胞融合體現(xiàn)了細胞膜的什么特性？動物細胞融合體現(xiàn)了細胞膜的什么特性？ 3.3.為什么滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑？（參考生為什么滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑？（參考生物技術(shù)資料卡）物技術(shù)資料卡） 4.4.不滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑嗎？不滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑嗎？ 5.5.動物細胞融合的結(jié)果是什么？動物細胞融合的結(jié)果是什么？ 6.6.融合后一定是雜交細胞嗎？融合后一定是雜交細胞嗎？ 7.7. 雜交細

3、胞遺傳物質(zhì)有什么特點？雜交細胞遺傳物質(zhì)有什么特點？ 8.8.動物細胞融合的意義？最大的應(yīng)用？動物細胞融合的意義？最大的應(yīng)用？細胞膜的流動性細胞膜的流動性滅活病毒、滅活病毒、PEGPEG、電激等、電激等融合后的細胞進行有絲分融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞裂，形成完整的雜交細胞1.1.誘導(dǎo)的方法？誘導(dǎo)的方法？6.6.融合后細胞的類型？融合后細胞的類型？7.AB7.AB雜交細胞遺傳物質(zhì)雜交細胞遺傳物質(zhì)有什么特點？有什么特點？三種三種AAAA、ABAB、BBBB（A A、B B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)含兩種生物的遺傳物質(zhì)1.11.1動物細胞融合過程動物細胞融合過程2.2.原理？原理？AB編

4、輯編輯pptA細胞細胞B細胞細胞人工誘導(dǎo)人工誘導(dǎo)1.21.2動物動物細胞融合的概念細胞融合的概念雜交細胞雜交細胞 動物細胞融合（也稱細胞雜動物細胞融合（也稱細胞雜交）：是指交）：是指兩個或多個細胞兩個或多個細胞融融合形成一個合形成一個單核細胞單核細胞的過程。的過程。編輯編輯ppt主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株主要用途主要用途物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振動、電刺激）動、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細胞分散后誘使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合導(dǎo)細胞融合去除細胞壁后誘去除細胞壁

5、后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合 細胞融合的方法細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、植物細胞全能性植物細胞全能性細胞融合的原理細胞融合的原理動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交比較項目比較項目植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較編輯編輯ppt1.31.3動物動物細胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用細胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用編輯編輯ppt抗體：能夠與抗原發(fā)生特抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的異性結(jié)合的免疫球蛋白免疫球蛋白。1.1.抗體是什么？抗體是什么？2.2.抗體如何產(chǎn)生？抗體如何產(chǎn)生？3.3.抗體主要分布在哪里？抗體主要

6、分布在哪里？能產(chǎn)生抗體的細胞是能產(chǎn)生抗體的細胞是漿漿細胞（即效應(yīng)細胞（即效應(yīng)B B細胞）。細胞）。4.4.如果一個農(nóng)夫被毒蛇如果一個農(nóng)夫被毒蛇咬了，如何獲得相應(yīng)的咬了，如何獲得相應(yīng)的抗體來治療？抗體來治療？編輯編輯ppt抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原抗原 反復(fù)注射反復(fù)注射從動物的從動物的血清血清中分離抗體中分離抗體該法制備抗體的缺點：該法制備抗體的缺點：產(chǎn)量低、純度低，且產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈抗體的特異性差、靈敏度低。敏度低。編輯編輯ppt2.12.1單克隆抗體的定義：單克隆抗體的定義：克隆單個克隆單個B B淋巴細胞所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、淋巴細胞所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特

7、異性強的抗體稱為單克隆抗體。特異性強的抗體稱為單克隆抗體。 單：單：一個一個B B淋巴細胞淋巴細胞 克隆：克?。涸摷毎罅吭鲋碁橄嗤募毎涸摷毎罅吭鲋碁橄嗤募毎?抗體：抗體：該細胞群產(chǎn)生的特異性抗體。該細胞群產(chǎn)生的特異性抗體。二、單克隆抗體二、單克隆抗體編輯編輯ppt一個一個B B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體淋巴細胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細胞能無限增殖骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計方案：設(shè)計方案：動物細胞融合技術(shù)動物細胞融合技術(shù)單克隆單克隆抗體抗體 既能迅速大量增殖，既能迅速大量增殖，又能的產(chǎn)生專一抗體又能的產(chǎn)生專一抗體編輯編輯ppt

8、活動二：閱讀課本活動二：閱讀課本P53-54P53-54思考與討論思考與討論: : 1.1.為什么要對小鼠進行注射特定的抗原？為什么要對小鼠進行注射特定的抗原？ 2.2.選擇了哪兩種細胞進行細胞融合？選擇了哪兩種細胞進行細胞融合？ 3.3.為什么選這兩種細胞？為什么選這兩種細胞？ 4.4.細胞融合后獲得幾種類型的融合細胞？細胞融合后獲得幾種類型的融合細胞？ 5.5.有幾種雜交瘤細胞？有幾種雜交瘤細胞？ 6.6.兩次篩選的目的？兩次篩選的目的？ 7.7.如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？2.22.2單克隆抗體的制備過程單克隆抗體的制備過程編輯編輯ppt用抗原免疫小鼠用抗原免疫小鼠骨

9、髓瘤細胞的培養(yǎng)骨髓瘤細胞的培養(yǎng)B B淋巴淋巴細胞細胞骨髓瘤骨髓瘤細胞細胞融合融合多種細胞多種細胞獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B B細胞細胞BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）編輯編輯ppt由于培養(yǎng)基中由于培養(yǎng)基中缺乏相應(yīng)的營缺乏相應(yīng)的營養(yǎng)物，骨髓瘤養(yǎng)物，骨髓瘤細胞死亡細胞死亡B B淋巴細胞培淋巴細胞培養(yǎng)幾天后死亡養(yǎng)幾天后死亡雜交瘤細胞雜交瘤細胞置于選擇培置于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)養(yǎng)基上培養(yǎng)（一選）（一選）選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基：只有只有雜交瘤細胞雜交瘤細胞才能存活才能存活編輯編輯ppt多多孔孔細細胞胞培培養(yǎng)養(yǎng)板板陽性克隆的篩選和克隆化陽性克隆的篩選和克隆化培養(yǎng)培養(yǎng)用培養(yǎng)

10、液稀釋用培養(yǎng)液稀釋（二選）：選能產(chǎn)生所需（二選）：選能產(chǎn)生所需專專一抗體的雜交瘤細胞一抗體的雜交瘤細胞編輯編輯ppt注射到小鼠體內(nèi)注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)體外培養(yǎng) 由由單個雜交瘤細胞單個雜交瘤細胞通過克隆，所產(chǎn)生的通過克隆，所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)化學(xué)性質(zhì)單一單一、特異性強的抗體特異性強的抗體。 單克隆抗體單克隆抗體編輯編輯ppt活動三、用以下文字和箭頭來活動三、用以下文字和箭頭來構(gòu)建單克隆抗體的制備過程構(gòu)建單克隆抗體的制備過程已免疫的已免疫的B B淋巴細胞、骨髓瘤細胞、淋巴細胞、骨髓瘤細胞、BBBB細胞，細胞，B B瘤細胞，瘤瘤細胞、雜交瘤瘤細胞，瘤瘤細胞、雜交瘤細胞、產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞、細胞、

11、產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞、體外培養(yǎng)、體內(nèi)培養(yǎng)、單克隆抗體、體外培養(yǎng)、體內(nèi)培養(yǎng)、單克隆抗體、融合、篩選融合、篩選編輯編輯ppt過程：B淋巴細胞骨髓瘤細胞融合融合B-B細胞B-瘤細胞瘤-瘤細胞選擇性選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)基篩選篩選雜交瘤細胞（ B-瘤細胞）克隆化培養(yǎng)抗體檢測產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體編輯編輯ppt2.32.3單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準確、高效、簡易、快速準確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點：單克隆抗體最主要的優(yōu)點：特異性強，靈敏特異性強，靈敏度高，并能大量制備。度高，并能大量制備。用抗人絨毛膜促性腺激素單克

12、隆抗體做用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的成的“早早孕診斷試劑盒早早孕診斷試劑盒”，靈敏度很，靈敏度很高，在妊娠第高，在妊娠第8 8天就可以做出診斷，比天就可以做出診斷，比原來的診斷方法提前了原來的診斷方法提前了1010天左右，可以天左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準確率在測的準確率在9090以上。以上。編輯編輯ppt“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈” 單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物 單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭主要用于治療主要用于治療癌癥治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載

13、抗，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”，準確殺傷癌變細胞。準確殺傷癌變細胞。編輯編輯ppt兩個過程兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法 滅活的病毒滅活的病毒一個新細胞雜交瘤細胞一個新細胞雜交瘤細胞一個優(yōu)勢一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性單克隆抗體特異性 強、靈敏度高，可大量制備強、靈敏度高，可大量制備特點：既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體編輯編輯ppt1.1.動物細胞融合最常用的誘導(dǎo)方法是動物細胞融合最常用的誘導(dǎo)方法是 （ ）A.A.離心離心 B.B.滅活的病

14、毒滅活的病毒 C.C.電刺激電刺激 D.D.振動振動2.2.動物細胞融合的作用中最重要的是（動物細胞融合的作用中最重要的是（ ）A.A.克服遠源雜交不親和克服遠源雜交不親和 B.B.制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.C.培育新物種培育新物種 D.D.生產(chǎn)雜種細胞生產(chǎn)雜種細胞BB評價方向：學(xué)習目標評價方向：學(xué)習目標1 1 動物細胞融合的方法、動物細胞融合的方法、意義意義編輯編輯ppt3.3.單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的 （ ）B B淋巴細胞淋巴細胞 B BT T淋巴細胞淋巴細胞 C C骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞 D D雜交瘤細胞雜交瘤細胞D評價方向：學(xué)習目標評價方向

15、：學(xué)習目標2 2 單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念4.4.科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（體，與骨髓瘤細胞融合的是（ ）A.A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B B淋巴細胞淋巴細胞 C.C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T T淋巴細胞淋巴細胞B.B.不經(jīng)過免疫的不經(jīng)過免疫的T T淋巴細胞淋巴細胞 D.D.不經(jīng)過免疫的不經(jīng)過免疫的B B淋巴細胞淋巴細胞A評價方向：學(xué)習目標評價方向：學(xué)習目標3 3 單克隆抗體制備的過程單克隆抗體制備的過程編輯編輯ppt5 5下列關(guān)于單克

16、隆抗體的敘述，錯誤的是下列關(guān)于單克隆抗體的敘述，錯誤的是 A.A.特異性強、靈敏度高特異性強、靈敏度高 B.B.單克隆抗體就是單克隆抗體就是“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”C.C.單克隆抗體可用于疾病診斷和治療單克隆抗體可用于疾病診斷和治療 D.D.生產(chǎn)單克隆抗體需要利用動物細胞培養(yǎng)技生產(chǎn)單克隆抗體需要利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)術(shù) B評價方向：學(xué)習目標評價方向：學(xué)習目標4 4 單克隆抗體的優(yōu)點與單克隆抗體的優(yōu)點與應(yīng)用應(yīng)用編輯編輯ppt編輯編輯ppt因為每一種B淋巴細胞可以產(chǎn)生一種抗體，人體有幾百萬個B淋巴細胞，也就是可以產(chǎn)生幾百萬中抗體。雖然你注射了某種抗原，但是產(chǎn)生對應(yīng)的抗體也只有其中的一個B淋巴細胞。所以我

17、們用傳統(tǒng)方法從動物血清里面提取的抗體往往特異性差，純度低。編輯編輯ppt6 6、（1）單克隆抗體是指）單克隆抗體是指 。（2 2）制備單克隆抗體的步驟：）制備單克隆抗體的步驟：將將_注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細胞，其中至少胞，其中至少1 1個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。將步驟獲得的將步驟獲得的B B淋巴細胞與步驟培養(yǎng)的骨髓瘤細胞淋巴細胞與步驟培養(yǎng)的骨髓瘤細胞在在_的誘導(dǎo)下融合。的誘導(dǎo)下融合。將誘導(dǎo)后產(chǎn)生的多種細胞，放在將誘導(dǎo)后產(chǎn)生的多種細胞，放在_培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。這樣獲得的

18、雜交瘤細胞既具有這樣獲得的雜交瘤細胞既具有B B淋巴細胞淋巴細胞_的能力，又具有的能力，又具有_的本領(lǐng)。的本領(lǐng)。檢測和分離帶有抗檢測和分離帶有抗X X抗體的陽性細胞，培養(yǎng)板中每孔放抗體的陽性細胞，培養(yǎng)板中每孔放一個細胞進行培養(yǎng)。一個細胞進行培養(yǎng)。將陽性細胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克將陽性細胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體。隆抗體?；瘜W(xué)性質(zhì)單一，特異性強的抗體化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強的抗體抗原抗原聚乙二醇聚乙二醇選擇性選擇性無限增殖無限增殖產(chǎn)生專一抗體產(chǎn)生專一抗體編輯編輯ppt（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：體外培養(yǎng)法，可獲得體外培養(yǎng)法，可獲得10 g/mL的抗體；的抗體；動物體內(nèi)動物體內(nèi)誘生法