水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導(dǎo)書

1、常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： wjes/qz-0017-2003名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導(dǎo)書第 1 頁共 5 頁1 水質(zhì) 細菌總數(shù)測定作業(yè)指導(dǎo)書1含義及執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)1.1含義細菌總數(shù)是指1ml 水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37培養(yǎng) 24 小時后，所生長細菌菌落的總數(shù)。1.2方法原理平板計數(shù)法是測定水中需氧菌、兼性厭氧菌和異養(yǎng)菌密度的方法。因為細菌在水中能以單獨個體、成雙成對、鏈狀、成簇等形式存在，而且沒有任何單獨一種培養(yǎng)基或一套物理、化學(xué)條件能滿足一個水樣中所有細菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落數(shù)可能要低于真正存在的活細菌的總數(shù)。1.3水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)表 1-1 細菌總數(shù)地下水質(zhì)

2、量分類指標(biāo)（gb/t 14848-93 ）類 別類類類類類標(biāo)準(zhǔn)值（個 /ml）100 100 100 1000 1000 表 1-2 細菌總數(shù)生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（gb 5749-2006 ）類 別飲用水農(nóng)村小型集中式供水和分散式供水標(biāo)準(zhǔn)值（個 /ml）100 500 2分析方法2.1方法名稱、方法來源和適用范圍方法名稱：平板計數(shù)法方法來源：水和廢水監(jiān)測分析方法(第四版 )國家環(huán)?？偩?002 年第五篇第二章 四方法適用范圍：此法主要作為判定飲用水、水源水、地表水等污染程度的標(biāo)志。2.2儀器高壓蒸汽滅菌器電熱干燥箱恒溫培養(yǎng)箱冰箱解剖鏡。采樣瓶、三角燒瓶、試管、平皿（直徑9cm） 、刻度吸管等器皿

3、121（ 20min）高壓常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： wjes/qz-0017-2003名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導(dǎo)書第 2 頁共 5 頁2 蒸汽滅菌后于電熱干燥箱中烘干。2.3培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：市售營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，按說明配制，裝于三角燒瓶中，經(jīng)121高壓蒸汽滅菌15min ，經(jīng)無菌性檢驗和標(biāo)準(zhǔn)菌株檢驗后，貯存于暗處備用。2.4分析步驟2.4.1 選擇稀釋度稀釋度要選擇適宜，以期在平皿上的菌落總數(shù)介于30300 之間。大多數(shù)飲用水水樣，未經(jīng)稀釋直接接種1ml，所得的菌落總數(shù)可適于計數(shù)。2.4.2 水樣的稀釋方法將水樣用力振搖2025 次，使可能存在的細菌凝團成分散狀。以無

4、菌操作方法吸取1ml 充分混勻的水樣，注入盛有9ml 滅菌水的試管中，混勻成 1：100 稀釋液。按同法依次稀釋成1：1000、1：10000 稀釋液（稀釋倍數(shù)按水樣污濁程度而定）。注意：吸取不同濃度的稀釋液時，必須更換吸管。2.4.3 操作方法以無菌操作方法用1ml 滅菌吸管吸取充分混勻的水樣或23 個適宜濃度的稀釋水樣 1ml，注入滅菌平皿中，傾注約15ml 已融化并冷卻到45左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即旋搖平皿，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。每個水樣應(yīng)傾注兩個平皿。待瓊脂冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上，置于37恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h，進行菌落計數(shù)。2.4.4 菌落計數(shù)培養(yǎng)之后，立即進行平皿菌落計

5、數(shù)。如果計數(shù)必須暫緩進行，平皿需存放于510冰箱內(nèi)，且不得超過24h。但是不可以使這種做法成為常規(guī)的操作方式。作平皿菌落計數(shù)時，可用解剖鏡檢查，以防遺漏，在記下各平皿的菌落數(shù)后，應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)。在求同稀釋度的平均數(shù)時，如果其中一個平皿有較大片狀菌落生長時，則不宜采用， 而應(yīng)以無片狀菌落生長的平皿作為該稀釋度的菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，則可將此半皿計數(shù)后乘以2 代表全皿菌落數(shù)，然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)。如果由于稀釋等過程中有雜菌污染，或者對照平皿顯示出培養(yǎng)基或其他材料染有雜菌，以致平皿無法計數(shù)，則應(yīng)報告“實驗事故”。對那些看來相似，距離相近但

6、是卻不相觸的菌落，只要它們之間的距離不小于最小菌落的直徑，便應(yīng)一一予以計數(shù)。那些緊密接觸而外觀（例如形態(tài)或顏色）相異的菌落，也應(yīng)該一一予以計數(shù)。2.4.5 計算細菌總數(shù)是以每個平皿菌落的總數(shù)或平均數(shù)（例如同一稀釋度兩個重復(fù)平皿的平均數(shù)）乘以稀釋倍數(shù)而得來的。各種不同情況的計算方法如下：常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： wjes/qz-0017-2003名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導(dǎo)書第 3 頁共 5 頁3 首先選擇平均菌落在30300 之間者進行計算，當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，即以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)報告（見表3 例 1） 。若有兩個稀釋度，其平均菌落數(shù)均在303

7、00 之間，則應(yīng)該按二者之比值來決定。若其比值小于2 應(yīng)報告兩者的平均數(shù)，若大于 2 則報告其中較小的數(shù)值（見表 3 例 2、 例 3） 。若所有的稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最大的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告（見表3 例 4） 。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最小的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告（見表3 例 5） 。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300 之間，則以最接近300 或 30 的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報告（見表3 例 6） 。表 3 稀釋度選擇及菌落總數(shù)報告方式例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)（個 /ml）報告方式（個 /ml

8、 ）備注10-1 10-210-31 1365 164 20 16400 16000 或 1.6104 兩位以后的數(shù)字采取四舍六入五單雙的原則取舍2 2760 295 46 1.6 37750 38000 或 3.81043 2890 271 60 2.2 27100 27000 或 2.71044 無法計數(shù)1650 513 513000 510000 或 5.11055 27 11 5 270 270 或 2.71026 無法計數(shù)305 12 30500 31000 或 3.11043質(zhì)量控制要求3.1對照控制采用無菌水作全過程對照控制，當(dāng)有明顯雜菌污染時，表明測定過程某環(huán)節(jié)無菌性失控，應(yīng)重

9、新檢驗；每次檢驗時，另用兩個平皿只傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并且打開平皿10min作實驗室對照控制，當(dāng)有明顯雜菌污染時，表明測定過程實驗環(huán)境無菌性失控，應(yīng)重新檢驗3.2精確度同一實驗人員所作前15 個陽性水樣平行雙樣結(jié)果為x1i、 x2i（x1i、 x2i 0， i1， 2， , ，15） ，則精確度判斷值r27. 3。（，iiixxr21loglog）當(dāng)分析所得21loglogxxrr27. 3表示精密度已失控；否則平行雙樣的差距可以接受。3.3最佳計數(shù)量細菌總數(shù)的測定無標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用，為提高檢驗分析的準(zhǔn)確性，除要盡量消除系統(tǒng)誤差、15115/ )(iirr常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：

10、 wjes/qz-0017-2003名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導(dǎo)書第 4 頁共 5 頁4 人為誤差的影響外，還應(yīng)盡量降低隨機誤差的影響。增加計數(shù)量可減少隨機誤差的影響，考慮到工作量等因素，細菌總數(shù)測定每一平皿的最佳菌落數(shù)為30 300 個，因此， 應(yīng)盡量選取菌落數(shù)在這一范圍的平皿計數(shù)。4數(shù)據(jù)處理4.1數(shù)據(jù)審核分析結(jié)果填寫原始記錄表與樣品送檢單，應(yīng)經(jīng)科室內(nèi)部校對、審核后，方可上交。4.2數(shù)據(jù)填報菌落計數(shù)報告時， 菌落數(shù)在100 以內(nèi)按實有數(shù)據(jù)報告； 大于 100 采用二位有效數(shù)字報告，有效數(shù)字后面的數(shù)值以四舍五入方法計算，為縮短數(shù)字后面的零數(shù)可用10 的指數(shù)形式表示（如報告16，000 或 1

11、.6104） 。在報告菌落數(shù)為“無法計數(shù)”時，應(yīng)注明水樣的稀釋倍數(shù)。5樣品采集5.1 采樣瓶應(yīng)經(jīng)高壓或干熱滅菌處理后方可使用；5.2 樣品含有余氯時采樣瓶滅菌前應(yīng)加脫氯劑，即于500ml 采樣瓶中加入0.3ml10% 硫代硫酸鈉溶液；5.3 樣品含銅鋅等重金屬較高時采樣瓶滅菌前應(yīng)加螯合劑，即于500ml 采樣瓶中加入1.0ml15% 乙二胺四乙酸二鈉（edta-na2）溶液；5.4 同一地點同時采多瓶水樣時，細菌學(xué)檢驗水樣先采；5.5 采樣時，采樣瓶不得用水樣蕩洗；5.6 采樣后，樣品應(yīng)2 小時內(nèi)檢驗，否則，應(yīng)10以下保存且不超過6 小時。6期間核查6.1人員素質(zhì)首先要參加省上崗證理論考試，理論考試合格后方能上崗。同時站內(nèi)進行操作技能考核、培訓(xùn)，考核合格后方能持證上崗，承但本項分析。按國家和省環(huán)境監(jiān)測中心的要求，須要進行五年換證的理論考試、操作技能考核。6.2儀器設(shè)備臭氧殺菌效果、高壓鍋壓力表指示、恒溫培養(yǎng)箱溫控情況每年由站質(zhì)管中心組織持證人員檢驗、校正，玻璃量具每三年由站質(zhì)管中心組織持證人員校正。7分析環(huán)境條件控制7.1儀器設(shè)備保持實驗室環(huán)境整潔，定期檢查，避免恒溫培養(yǎng)箱溫控失控，做好儀器設(shè)備使用和保養(yǎng)記錄。7.2無菌室定期采用消毒劑清潔無菌室，定期檢查臭氧殺菌效果，保證無菌室微生物實驗條件的滿足