2022年2022年微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載0.2pm1精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載試驗(yàn)一油鏡的使用和細(xì)菌的簡(jiǎn)潔染色法2試驗(yàn)二細(xì)菌的革氏染色與芽孢染色4試驗(yàn)三常用培育基的配制6試驗(yàn)四酵母菌霉菌的外形結(jié)構(gòu)觀看及酵母死活細(xì)胞的鑒別7試驗(yàn)五.微生物大小的測(cè)定與顯微計(jì)數(shù)9試驗(yàn)六環(huán)境中微生物的檢測(cè)和分別純化10試驗(yàn)七細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)11試驗(yàn)八（綜合試驗(yàn)）化能異養(yǎng)微生物的分別與純化12課程名稱：微生物學(xué)試驗(yàn)班級(jí)：化生系生命科學(xué)本科試驗(yàn)日期：指導(dǎo)老師：黎勇試驗(yàn)一油鏡的使用和細(xì)菌的簡(jiǎn)潔染色法2精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載目的要求學(xué)習(xí)并嫻熟把握油鏡的使用技術(shù)；觀看細(xì)菌的基本

2、外形；學(xué)習(xí)觀看細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性的基本方法；基本原理1. n· a=n· sin 2. d= /2n.a3. 目鏡可提高放大倍數(shù),但有效放大率取決于鏡口率；已經(jīng)辨論的物體不放大看不清,未辨論物放得再大也看不清；4. 用懸滴法或凹玻片法觀看細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性時(shí),可以通過真運(yùn)動(dòng)能定向地由一處快速運(yùn)動(dòng)來區(qū)分于顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)；器材用具顯微鏡.載玻片.凹玻片.蓋玻片.接種環(huán).香柏油.二甲苯.凡士林.吸水紙.擦鏡紙；細(xì)菌.放線菌等固定裝片；培育18 小時(shí)左右的b. subtilis.s. arueus 菌斜面培育物；無菌水.生理鹽水；方法步驟 ：（一）油鏡的使用鏡檢裝片在中倍（或高倍鏡）下找到目的

3、物,并使位于視野正中聚光鏡上升到最高位置,虹彩光圈開到最大,鏡頭轉(zhuǎn)開成八字形在玻片的鏡檢部位（光斑處）滴一滴香柏油油鏡轉(zhuǎn)入正下方側(cè)視當(dāng)心上升載物臺(tái)（縮短鏡頭與裝片距離,鏡頭浸入油中,至油圈不擴(kuò)大為止鏡頭幾與裝片接觸）粗調(diào)器漸漸下降載物臺(tái)（親密凝視視野,當(dāng)捕獲到物像時(shí),立刻用細(xì)調(diào)器校正）認(rèn)真觀看并繪圖取出裝片,清洗油鏡：擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油擦鏡紙沾少許二甲苯擦去殘留（用手指幫助,快速拭擦一.二次）用清潔擦鏡紙認(rèn)真擦干二甲苯（2-3 次）；（二）細(xì)菌的簡(jiǎn)潔染色法：涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油鏡觀看（三）細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的觀看取干凈蓋玻片,四周涂上凡士林滴加一小滴菌懸液凹玻片的凹窩向下蓋于蓋玻片上翻

4、轉(zhuǎn)觀看結(jié)果分析1.畫一圓圈表示視野,選取所觀看的微生物繪圖,留意特別結(jié)構(gòu).外形和排列；（描畫時(shí)按視野實(shí)際大小 5 10 倍繪制）菌名：大腸桿菌菌名：金黃色葡萄球菌放大倍數(shù)： 100× 10（× 5）放大倍數(shù)： 100× 10（× 5）特別結(jié)構(gòu)：無特別結(jié)構(gòu)：無視野觀看下微生物的外形2.油鏡使用時(shí)為什么必需干燥裝片？防止水油分層,光受到折射而影響油鏡性能的發(fā)揮試驗(yàn)爭(zhēng)論首次試驗(yàn)中有幾個(gè)要點(diǎn)：一為按無菌操作取用菌；二為涂片技術(shù)的把握；三為油鏡使用技術(shù)；凡試驗(yàn)3精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載中同學(xué)的所思所想,如無菌操作技術(shù)要點(diǎn).自行處理試驗(yàn)材料.失

5、敗與摸索等均可進(jìn)行爭(zhēng)論（如涂片時(shí)蒸餾水不宜過多.取用菌時(shí)防止菌被灼燙變形.取菌宜少不宜多等均為可以爭(zhēng)論的內(nèi)容）；試驗(yàn)二細(xì)菌的革氏染色與芽孢染色目的要求觀看細(xì)菌菌落的特點(diǎn)；把握簡(jiǎn)潔染色法.革蘭氏染色法的原理及操作步驟；在油鏡下觀看細(xì)菌個(gè)體外形；學(xué)習(xí)環(huán)境中微生物的檢查方法,并加深對(duì)微生物分布廣泛性的熟悉器材用具e.colib.subtiliss.aureus.的斜面培育物（18 24 小時(shí)）以及菌落平板各一個(gè)；染4精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載液：草酸銨結(jié)晶紫.劃蘭氏染液.盧戈氏碘.95%的乙醇.蕃紅；無菌水.顯微鏡.載片.濾紙.液體石蠟為.擦鏡紙.接種環(huán)；方法內(nèi)容 ：（一）試驗(yàn)室

6、環(huán)境中微生物的檢查（二）革蘭氏染色法涂片固定冷卻結(jié)晶紫染色1min水洗碘媒染 1min95%乙醇 30-60s水洗番紅復(fù)染2 3min水洗干燥油鏡鏡檢（三）芽孢染色涂片固定孔雀綠加熱染色（勿干）5min水洗番紅復(fù)染1min水洗鏡檢結(jié)果分析試驗(yàn)結(jié)果被染成紫色者即為革蘭氏陽性,被染成紅色者為革蘭氏陰性；菌體染成紅色,芽孢被染成綠色；菌名：大腸桿菌菌名：金黃色葡萄球菌放大倍數(shù)： 100× 10（× 5）放大倍數(shù)： 100× 10（× 5）染色反應(yīng)：紅色（陰性）染色反應(yīng)：紫色（陽性）精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載菌名：枯草芽孢桿菌放大倍數(shù)： 10

7、0× 10（× 5） 染色反應(yīng)：紫色（陽性）圖 1視野觀看下細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)芽孢（綠色）精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載5精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載圖 2枯草芽孢桿菌芽孢外形圖試驗(yàn)爭(zhēng)論嚴(yán)格把握脫色程度,為成敗的關(guān)鍵；如脫色時(shí)間過度,就陽性菌初時(shí)之紫色脫出,復(fù)染成紅色,誤成陰性,反之脫色時(shí)間不足,陰性菌在初染時(shí)的紫色未能脫出,復(fù)染時(shí)不能染成紅色,誤以為陽性菌；涂片不能厚；盧弋氏碘即用即配；作業(yè)1.繪出所觀看到到細(xì)菌的視野圖,并說明染色反應(yīng)；2.哪些因素會(huì)影響到革蘭氏染色結(jié)果的正確？其中為關(guān)鍵的一步為什么？菌齡及培育條件和染色技術(shù)為最主要的

8、,關(guān)鍵為脫色；3.怎樣對(duì)未知菌進(jìn)行革蘭氏染色,以證明你的結(jié)果的正確？與已知菌混合涂片比較；試驗(yàn)三常用培育基的配制目的要求明白培育基的配制原理；明白培育基常規(guī)配制程序；明白培育基過程各環(huán)節(jié)的要求和留意事項(xiàng)；明白半合成培育基的配制原理,學(xué)習(xí)把握肉膏蛋白胨培育基.馬鈴薯培育基的配制方法；器材用具等配各種培育基的組成成分,瓊脂.1n naoh溶液 1n hcl 天平或臺(tái)秤高壓蒸汽滅菌鍋.移液管.試管.燒杯.量筒.錐形瓶.培育皿.玻璃漏斗等；藥匙.稱量紙.ph 試紙.記號(hào)筆.棉花.紗6精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載布.線繩.塑料試管蓋.牛皮紙報(bào)紙等；方法步驟 一 玻璃器皿的洗滌和包裝以小

9、組為單位清洗.控水,按9 個(gè)為一組,分別用報(bào)紙包好并放入烘箱中等待滅菌； 二 液體及固體培育基的配制過程原料稱量（按配方次序）溶解調(diào)劑 h過濾澄清分裝塞棉塞和包札滅菌分別按教材配方配制牛肉膏蛋白胨.馬鈴薯液體及固體培育基； 三 培育基的分裝用玻璃漏斗, 橡皮管,小玻璃管及彈簧夾制作分裝裝置選用 15× 150平口試管或150ml 錐形瓶貼上標(biāo)簽分裝（至試管高度1/4-1/3,斜面制作用1/5 ,半固體用 1/3 ）要求：每人制作斜面3 支；其余分裝至錐形瓶中； 四 棉塞的制作及試管.錐形瓶的包扎分別制作試管及錐形瓶棉塞并塞好好以牛皮紙包裝頭部； 五 培育基的滅菌培育基用濕熱法滅菌；皿

10、用干熱法分別滅菌； 六 斜面和平板的制作（下次試驗(yàn)完成） 七 培育基的無菌檢查（下次試驗(yàn)完成） 八 無菌水的制備同時(shí)制作無菌生理鹽水,置錐形瓶中備用；結(jié)果分析以斜面接種培育驗(yàn)證培育基配制成效；以平板制作及接種24 小時(shí)培育驗(yàn)證滅菌成效；簡(jiǎn)述移液管包裝的留意事項(xiàng)；試驗(yàn)爭(zhēng)論滅菌器的滅菌成效必需間隔一段時(shí)間,加以驗(yàn)證,主要方法除無菌檢查外,仍通過壓力試紙同時(shí)滅菌來驗(yàn)證其壓力與溫度；培育基通常成批制作備用；但制作后,其貯藏時(shí)間有肯定限制,一般室溫條件下不超過三周；冰箱 4條件下可貯藏半年,過期不能用；作業(yè)：1.記錄培育基的成分和名稱2.分析所配制培育基的碳源.氮源.能源及無機(jī)鹽.維生素的來源； 所配制

11、均為自然培育基,各成分主要來自有機(jī)質(zhì),微量元素可以由自來水供應(yīng)；3.什么為自然培育基？什么為半合成.合成培育基？試驗(yàn)四酵母菌霉菌的外形結(jié)構(gòu)觀看及酵母死活細(xì)胞的鑒別目的要求觀看并把握酵母菌霉菌的菌落特點(diǎn).個(gè)體外形.生長(zhǎng)及繁衍方式；學(xué)習(xí)酵母死活細(xì)胞的鑒別方法；材料用具釀酒酵母.紅酵母.假絲酵母； 釀酒酵母和紅酵母菌落平板各一個(gè)；釀酒酵母豆芽汁7精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載斜面及釀酒酵母醋酸鈉斜面各一支,假絲酵母加蓋片培育的平板 ；7.6%孔雀綠染液,0.5%蕃紅染液,蘇丹黑染液,二甲苯,中性紅染液,碘液；目鏡測(cè)微尺.鏡臺(tái)測(cè)微尺；載片及蓋片；方法步驟 一 菌落特點(diǎn)的觀看 二 個(gè)體外

12、形與出芽 三 子囊孢子的觀看 四 酵母死活細(xì)胞的觀看；結(jié)果分析描述釀酒酵母霉菌的菌落外形特點(diǎn)；繪圖釀酒酵母的菌體.出芽方式及細(xì)胞細(xì)節(jié)；（一）酵母的菌落潮濕,大而隆起,顏色多樣,正反面顏色一樣,不透亮,邊緣整齊；酵母養(yǎng)分細(xì)胞酵母出芽芽體酵母死細(xì)胞（藍(lán)色）菌名：釀酒酵母放大倍數(shù)： 100× 10（× 5） 特別結(jié)構(gòu)：芽（出芽繁衍）（二）霉菌菌落特點(diǎn)：干燥,正反面及中心與邊緣不一樣；大而疏松；（如右圖）8精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載菌名：青霉（penicillium）菌名：毛霉（circinella）放大倍數(shù)： 100× 10（× 5）放大倍

13、數(shù)： 100× 10（× 5）特別結(jié)構(gòu)：分生孢子梗（帚狀分枝）特別結(jié)構(gòu)：孢子囊足細(xì)胞菌名：曲霉（ aspergillus）菌名：根霉（rhizopus）放大倍數(shù)：模式圖放大倍數(shù)： 100× 10（× 5）特別結(jié)構(gòu)：足細(xì)胞特別結(jié)構(gòu)：假根試驗(yàn)爭(zhēng)論作業(yè)：1.繪圖說明所觀看到的酵母菌.霉菌的外形特點(diǎn)；試驗(yàn)五.微生物大小的測(cè)定與顯微計(jì)數(shù)目的要求 學(xué)習(xí)并把握用測(cè)微尺測(cè)定微生物細(xì)胞大小的方法；明白血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的構(gòu)造及計(jì)數(shù)原理,把握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法；材料用具啤酒酵母；顯微鏡.目鏡測(cè)微尺.鏡臺(tái)測(cè)微尺；血球計(jì)數(shù)板；蓋玻片,載玻片,滴管,試管,無菌水,9精

14、品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載方法步驟 一 酵母細(xì)胞大小測(cè)定(1) 目鏡測(cè)微尺的校正2細(xì)胞大小的測(cè)定 二顯微計(jì)數(shù)法(1) 鏡檢計(jì)數(shù)室(2) 菌懸液制備及加樣(3) 計(jì)數(shù)(4) 清洗計(jì)數(shù)板結(jié)果分析結(jié)果記錄入表中；1.目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定結(jié)果（精確到零點(diǎn)幾小格）精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載物鏡倍數(shù)（目鏡均為10 倍）40 倍2.酵母菌大小測(cè)定結(jié)果目鏡測(cè)微尺的格數(shù)（小格）鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)（小格）目鏡測(cè)微尺的每格的長(zhǎng)度（ m）精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載菌號(hào)12345678910目 鏡 測(cè) 微 尺 的長(zhǎng)軸格數(shù)（小格）短軸酵母大小平均值±（保留小數(shù)

15、點(diǎn)后2 位）長(zhǎng)軸短軸3.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)酵母菌懸液計(jì)數(shù)結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)各中格中菌數(shù)總菌數(shù)稀釋倍數(shù)平均值菌數(shù) 個(gè)/ml 123456789試驗(yàn)爭(zhēng)論精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載作業(yè)：1. 什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡和物鏡時(shí),必需用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺校正；2. .依據(jù)試驗(yàn)體會(huì)說明血細(xì)胞計(jì)數(shù)法的誤差主要來自哪些方面？如何削減誤差？3. .在滴加菌液時(shí),為什么要先置蓋玻片然后滴加菌液？能否先加菌液再置蓋玻片？4. .用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物數(shù)量時(shí),哪些步驟易造成誤差？如何預(yù)防？運(yùn)算細(xì)胞數(shù)目時(shí)此法為否可以適用？試驗(yàn)六環(huán)境中微生物的檢測(cè)和分別純化精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下

16、載目的要求1. 學(xué)習(xí)并把握各種無菌操作技術(shù),并用此技術(shù)進(jìn)行微生物的劃線分別接種2. 學(xué)習(xí)把握平板菌落計(jì)數(shù)法基本原理10精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載土壤為微生物生活的大本營,為生物多樣性的重要場(chǎng)所,也為發(fā)揚(yáng)微生物資源的重要基地,可以從中分別純化得到很多的菌株；劃線法為常用的分別與純化方法,通過無菌操作條件下,“漸劃漸稀”的效應(yīng)而得到菌落純的菌株；平板菌落計(jì)數(shù)法為將待測(cè)樣品經(jīng)過適當(dāng)稀釋,使其中的微生物充分分散形成單個(gè)細(xì)胞,取肯定量的稀釋樣液接種到平板上,經(jīng)過培育,由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁衍而形成肉眼可見的菌落,即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞；統(tǒng)計(jì)菌落數(shù),依據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種

17、量即可換算出樣品含菌量；這種方法為活菌計(jì)數(shù)法,廣泛應(yīng)用于生物制品及污染程度（含菌指數(shù)）的檢測(cè)；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載土壤中菌含量（個(gè)/g 土壤）同一稀釋度0.13個(gè)平板平均菌落數(shù)稀釋液濃度精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載材料與用品土樣 10g,無菌平皿（ 20 套）及無菌水,牛肉膏蛋白胨平板（2 只）；取液器（ 0.5ml 及 1ml 各三支）；無菌有帽試管,三角瓶,無菌涂棒,接種環(huán),記號(hào)筆,酒精燈,火柴,試管架方法步驟1.四周環(huán)境中微生物的檢測(cè)平板分 4 個(gè)區(qū)做好標(biāo)記用未洗的手指及肥皂洗過的手指（1 次. 2 次. 3 次,或其它）分別在四個(gè)區(qū)上涂抹倒置

18、到 37培育 24 小時(shí)觀看結(jié)果；2.土壤中微生物分別純化及平板計(jì)數(shù)采土樣（ 5 20cm）土 10g,裝入到已滅菌的牛皮袋（信封）中,封好袋口1.0g 加入 99ml無菌水（三角瓶）中1ml無菌吸管0.5ml 加入到 4.5ml 無菌水試管中,吹吸三次,振蕩勻稱10 -3 ；同法得104 610土壤溶液精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載-2用接種環(huán)沾取10土壤懸液在已經(jīng)凝固的平板表面進(jìn)行劃線分別精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載分別取各濃度土壤懸液0.1ml 對(duì)號(hào)勻稱地放入已寫好稀釋度的牛肉膏蛋白胨平板,用無菌涂棒涂勻（多涂幾遍） ；每個(gè)濃度做3 個(gè)平板；結(jié)果分析1.

19、 有較大片菌苔生長(zhǎng)時(shí),棄用；2. 選擇平均菌落數(shù)在30 300 之間的平板；只有一個(gè)濃度符合此范疇時(shí),以該平均菌落數(shù)為準(zhǔn)；有兩個(gè)濃度的平板菌落數(shù)在30 300 之間時(shí),按兩者的總數(shù)平均打算,比值小于2,取平均,比值大于2 就取較少的菌落總數(shù)；全部菌落數(shù)大于300,取稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)；全部菌落數(shù)均小于 30,取稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)（即當(dāng)全部菌落數(shù)均不在30300 之間時(shí),此試驗(yàn)的精確度要求下,可以最接近30 或 300 的菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)） ；試驗(yàn)爭(zhēng)論土壤中的菌數(shù)量在哪個(gè)數(shù)量級(jí)？你分別的微生物主要有哪些種類？為什么？105 數(shù)量級(jí),主要為細(xì)菌,也有酵母；主要通過其菌落

20、特點(diǎn)來判定；細(xì)菌的菌落為潮濕,其正反面顏色一般一樣,普遍比較?。唤湍傅木涑睗?大而隆起,顏色多樣,正反面顏色一樣,不透亮,邊緣整齊；而霉菌菌落特點(diǎn)：干燥,正反面及中心與邊緣不一樣；大而疏松；試驗(yàn)七細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)目的要求明白細(xì)菌生理生化反應(yīng)原理,把握細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)方法；通過對(duì)不同細(xì)菌對(duì)不同含碳.氮化合物的分解利用情形,明白基代謝多樣性；學(xué)習(xí)不同培育基基中的不同生長(zhǎng)現(xiàn)象及其代謝產(chǎn)物在鑒別細(xì)菌中的意義；試驗(yàn)原理各種細(xì)菌所具有的酶系統(tǒng)不盡相同,對(duì)養(yǎng)分基質(zhì)的分解才能也不一樣,因而代謝產(chǎn)物存在差11精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載別；細(xì)菌的這種代謝方式可供鑒別細(xì)

21、菌之用；用生理生化試驗(yàn)的方法檢測(cè)細(xì)菌對(duì)各種基質(zhì)的代謝作用及其代謝產(chǎn)物,從而鑒別細(xì)菌的種屬,稱為細(xì)菌的生理生化反應(yīng)；有些細(xì)菌能發(fā)酵葡萄糖,而不能分解乳糖；有些細(xì)菌能分解某種糖產(chǎn)生有機(jī)酸和氣體；有的細(xì)菌就只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；在配制培育基時(shí)預(yù)先加入溴甲酚紫（ h4.4 紅色 h6.2 黃色）,當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí),培育基由紫色變黃,氣體的產(chǎn)生就可由試管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來判定；大腸桿菌不產(chǎn)生丁二醇,v.p. 試驗(yàn)為陰性；其進(jìn)行混合酸發(fā)酵,故甲基紅試驗(yàn)為陽性；產(chǎn)氣桿菌就進(jìn)行丁二醇發(fā)酵,v.p 試驗(yàn)為陽性,甲基紅試驗(yàn)為陰性；材料用具e.coli,變形桿菌,枯草芽孢桿菌,產(chǎn)氣桿菌,糞水中分別的未知菌種斜面,糖發(fā)

22、酵培育基；超凈工作臺(tái),恒溫培育箱,試管,移液管,杜氏小管；甲基紅試劑.v.p.試劑；試驗(yàn)步驟各取4 支相應(yīng)的培育基,標(biāo)記好發(fā)酵培育基的名稱.所接菌種名及組號(hào),1 支接大腸桿菌,1支接變形桿菌,1 支接未知斜面菌種,1 支不接；1. 糖發(fā)酵試驗(yàn)2. 甲基紅試驗(yàn)3. v.p. 試驗(yàn)接種后 37分別培育24h.48h.48h,觀看試驗(yàn)結(jié)果,將試驗(yàn)結(jié)果填入表中；試驗(yàn)結(jié)果表 71試驗(yàn)結(jié)果編號(hào)大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣桿菌未知菌ck葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵 甲基紅試驗(yàn)v.p. 試驗(yàn)試驗(yàn)爭(zhēng)論如：爭(zhēng)論通過哪些生理生化反應(yīng)可以區(qū)分大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌？大腸桿菌不產(chǎn)生丁二醇,v.p. 試驗(yàn)為陰性；其進(jìn)行混合酸發(fā)酵,故甲基紅

23、試驗(yàn)為陽性；產(chǎn)氣桿菌就進(jìn)行丁二醇發(fā)酵, v.p 試驗(yàn)為陽性,甲基紅試驗(yàn)為陰性；試驗(yàn)八（綜合試驗(yàn)）化能異養(yǎng)微生物的分別與純化 目的要求 1 把握細(xì)菌.放線菌.酵母苗和霉菌稀釋分別.劃線分別等技術(shù)；2 學(xué)習(xí)從樣品中分別.純化出所需菌株；3 學(xué)習(xí)并把握平板傾注法和斜面接種技術(shù),明白培育細(xì)菌.放線菌.酵母菌及霉菌四大類微生物的培育條件和培12精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載養(yǎng)時(shí)間；4 學(xué)習(xí)平板菌落計(jì)數(shù)法； 基本原理 土壤為微生物生活的大本營,為查找和發(fā)覺有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源；不同土樣中各類微生物數(shù)量不同,一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多,其次為放線菌和霉菌；一般在較干燥,偏堿性.有機(jī)質(zhì)

24、豐富的土壤中放線苗數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少,而在水果表皮. 葡萄園. 果園土中數(shù)量多些；本次試驗(yàn)從土壤中分別細(xì)菌.放線菌和霉菌； 白面曲 發(fā)面用的引子 或酒曲或果園土中分別酵母菌；為了分別和確保獲得某種微生物的單苗落,第一要考慮制備不同稀釋度的苗懸液；各類菌的稀釋度因菌源.采集樣品時(shí)的季節(jié).氣溫等條件而異；其次,應(yīng)考慮各類微生物的不同特性,防止樣品中各類微生物的相互干擾；細(xì)菌或放線苗在中性或微堿性環(huán)境較多但細(xì)菌比放線萌生長(zhǎng)快,分別放線菌時(shí),一般在制備土壤稀釋液時(shí)添加10%酚或在分別培育基中加相 應(yīng)的抗生素以抑制細(xì)菌和霉菌 如加鏈霉素25-50 g ml以抑制細(xì)菌； 添加制霉菌素5

25、0 gml或多菌靈 30 ml以抑制霉菌 ；酵母苗和霉菌都喜酸性環(huán)境,一般酵母菌只能以糖為碳源,不能直接利用淀粉,酵母菌在ph 5 時(shí)生長(zhǎng)極快；而細(xì)菌生長(zhǎng)相宜的酸堿度為ph7,所以分別酵母菌時(shí)只要選擇好相宜的培育基和ph,可降低細(xì)菌增殖率,霉菌生長(zhǎng)慢,也不干擾酵母菌分別； 如分別霉菌, 需降低細(xì)菌增殖率,一般培育基臨用前須添加滅過菌的乳酸或鏈霉素；為了防止菌絲擴(kuò)散干擾菌落計(jì) 數(shù),分別霉菌經(jīng)常在培育基中加入化學(xué)抑制劑；要想獲得某種微生物的純培育,仍需供應(yīng)有利于該微生物生長(zhǎng)繁衍的最適培 養(yǎng)基及培育條件；四大類微生物的分別培育基.培育溫度.培育時(shí)間見表所示；表 8-1四大類微生物的分別培育條件 材料

26、與用品 1. 菌源選定采土地點(diǎn)舌；鏟去表土層2 3cm,取 310cm深層土壤 10g ,裝入已滅過菌的牛皮紙袋內(nèi)封好袋口,并記錄用樣地點(diǎn).環(huán)境及日期；土樣采集后應(yīng)準(zhǔn)時(shí)分別,凡不能立刻分別的樣品,應(yīng)儲(chǔ)存在低溫.干燥條件下,盡量削減其中菌種的變化；從面曲中分別酵母菌；也可用酒曲等替代；2培育基肉膏蛋白胨培育基.馬丁氏培育基.高氏合成一號(hào)培育基.豆芽汁葡萄糖培育基 制平板和斜面,3無菌水或無菌生理鹽水配制生理鹽水 分裝于 250ml 錐形瓶中, 每瓶裝 99ml或 95ml分別霉菌用 ,每瓶?jī)?nèi)裝 10粒玻璃珠；分裝試管,每管裝約4.5 5ml不超過試管高度的15 ；4其他試劑與用品無菌培育皿.無菌

27、移液管.無菌玻璃涂棒 刮刀 .稱量紙.藥匙.洗耳球.10酚溶液； 試驗(yàn)步驟 1稀釋分別法平板分別菌有傾注法和涂布法兩種；本次試驗(yàn)分別細(xì)菌.放線菌.霉菌時(shí)采納傾注法,酵母菌分別采納涂布法： 2(1) 細(xì)菌的分別1制備土壤稀釋液稱取土樣 1 g,在火焰旁加入盛有99ml 并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽 水錐形瓶中振蕩10 一 20min ,使土樣中菌體.芽孢或孢子勻稱分散,制成10稀釋度的土壤稀釋液；然后按10 倍稀釋法進(jìn)行稀釋分別,以制備10-2 稀釋度為例,詳細(xì)操作過程如下：取4.5 ml無菌水試管 6 支,按 10-210-7 次序編號(hào),放置在試管架上；取無菌移液管一支,從移液管包裝紙?zhí)字?/p>

28、間撕口,將包裝紙?zhí)追殖缮?下兩段,去除下段包裝紙?zhí)?在移液管上端管口裝橡皮頭,取出下段移液管紙?zhí)追胖米烂?以右手拇指.食指.中指拿住移液管卜端的橡皮頭,將吸液端口及移液 管外部表面快速通過火焰2 3 次,殺滅撕紙?zhí)讜r(shí)可能污染的雜菌,切忌不要用手指去觸摸移液管吸液端口及外部；左手持錐形瓶底,以右手掌及小指.無名指夾住錐形瓶上棉塞,在火焰旁拔出棉塞 棉塞夾在于上,不能亂放在桌上 ,將 lml 移液管的吸液端伸進(jìn)振蕩混勻的錐形瓶土壤懸液底部,用手指輕按橡皮頭,在錐形瓶?jī)?nèi)反復(fù)吹吸二次 吹吸時(shí)留意其次次液面要 高于第一次吹吸的液面 ,然后精確吸取0.5ml10-2 土壤稀釋液,右手將棉塞插回錐形瓶上,左

29、手放下錐形瓶,換持一支盛13精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載有 4.5ml 無菌水的試管,依前法在火焰旁拔除試管帽 或棉塞 ,將 0.5m10-2 土壤稀釋液注入4.5m1 無菌水試管內(nèi),制成l0 -3的土壤稀釋液,將此移液管通過火焰再插入原先包裝移液管的下段紙?zhí)變?nèi),以備再用；另取一只未用過的無菌移液管在試 管內(nèi)反復(fù)吹吸三次,然后取出移液管,并將其通過火焰再插入原先包裝移液管的下段紙?zhí)變?nèi),以備再用；蓋上試管帽；右手持 10-3 稀釋液試管在左手十敲打2030 次；混勻土壤稀釋液；再從紙?zhí)兹〕鲈鹊囊埔汗?插入稀釋液已搖勻的試管內(nèi),再吹吸三次,然后精確吸出o.5ml 10 -3 的

30、稀釋液；置其次支裝有4.5 m1 無菌水試管,制成10 4 ：土壤稀釋液；用同法再制成 10 -5 . 10-6 .10 一 7 的土壤稀釋液 為防止稀釋過程誤差,進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí),最好每一個(gè)稀釋度更換一支移液管 ：最終用的移液管重新放人紙?zhí)變?nèi)；待滅菌后,再洗刷或?qū)⒂眠^的移液管放在廢棄物筒中用3%-5%來蘇爾浸泡l h后再滅菌洗滌；2 傾注法分別取無菌培育皿69 套,分別于培育皿底面按稀釋度編號(hào)；稀釋完畢后,用原先的移液管從菌液濃度最小的 10-7 土壤稀釋液開頭吸取1ml稀釋液,按無菌操作技術(shù)加到和應(yīng)編號(hào)的無菌培育皿內(nèi)；再依同方法分別吸取1mll0-6 .10-56-5的土壤稀釋液,各加到和

31、應(yīng)編號(hào)為10.10的無菌培育皿內(nèi)；將已滅菌的肉膏蛋白胨固體培育基融解,待冷卻至4550度左右, 分別傾入到已盛有i0 -5 .10-6 .10-7 土壤稀釋液的無菌培育皿內(nèi)；留意： 溫度過高易將菌燙死,且皿蓋上冷凝水太多,會(huì)影響分別成效；低于45培育基易凝固,平板易顯現(xiàn)凝塊.高低不平；傾倒培育基時(shí)留意無菌操作,要在火焰旁進(jìn)行；左手拿培育皿,右手拿錐形瓶底部,左手同時(shí)用小指和手掌將棉塞拔開,灼燒瓶口用左手大拇指將培育皿蓋打開一縫,至 瓶口正好伸入,傾入培育基約12 15 ml,將培育皿在桌面上輕輕轉(zhuǎn)動(dòng),使稀釋的菌懸液與融解的瓊脂培育基混合勻稱混勻后靜置桌上,待凝；3培育待平板完全冷凝后,將平扳倒

32、置于3537恒溫培育箱中,培育2448h 觀看結(jié)果；(2) 放線菌的分別1) 制備土壤稀釋液稱取土樣 l g ,加入盛有99m1并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中并加人lo 滴-210酚溶液 抑制細(xì)菌生長(zhǎng),可用l 的重鉻酸鉀溶液代替lo%酚溶液成效更好 ；振蕩后靜置5min,即成 10-4-5土壤稀釋液；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載-32) 傾注法分別按前法將土壤稀釋液分別稀釋為10.10.10三個(gè)稀釋度, 然后用無菌移液管依次分別吸取lml精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載10-5 .l0 -4 .10-3 土壤稀釋液于對(duì)應(yīng)編號(hào)的無菌培育皿內(nèi),用高氏合成

33、1 號(hào)培育基依前法傾倒平板,每個(gè)稀釋度做23 個(gè)平行培育皿；理鹽水內(nèi),振蕩20min,即成 10-2 的面曲稀釋液；如選用果園上樣,也依前法稱取土樣,制成 10-2 壤稀釋液；-6-5-43) 涂布法分別 依前法向無菌培育皿中傾倒已融解并冷卻至 45-50 的豆芽汁葡萄糖培育基,待平板冷凝后,用無菌移液管分別吸取上述 l0 .l0 .10 三個(gè)稀釋度苗懸液 0.1ml,依次滴加于對(duì)應(yīng)編號(hào)已制備好的豆芽汁葡萄糖培育基平板上；右手持無菌玻璃涂棒,左手拿培育皿,并用拇指將皿蓋打開一縫,在火焰旁右手持玻璃涂棒于培育皿平板表面將菌液自平板中心勻稱向四周涂布擴(kuò)散,切忌用力過猛將菌液直接推向平板邊緣或?qū)⑴嘤?/p>

34、基劃破；4) 培育接種后,將平板倒置于30恒溫培育箱中,培育2 3 d 觀看結(jié)果；2 劃線分別法菌種被其他雜苗污染時(shí)或混合菌懸液常用劃線法進(jìn)行純種分別；此法將蘸有混合菌懸液的接種環(huán)在平 板表面多方向連續(xù)劃線,使混雜的微生物細(xì)胞在平板表面分散,經(jīng)培育得到分散成由單個(gè)微生物細(xì)胞繁衍而成的菌落,從而達(dá)到純化目的； 平板制作方法如前所述；但劃線分別的培育基必需事先傾倒好,需充分冷凝待平板稍于后方可使用；為便于劃線,一般培育基不宜太薄,每皿約傾倒20ml培育基,培育基應(yīng)厚薄勻稱,平板表面光滑；劃線分別主要有連續(xù)劃線法和分區(qū)劃線法兩種；1 連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法為從平板邊緣一點(diǎn)開頭,連續(xù)作波浪式劃線直到平板

35、的另一端為止,當(dāng)中不需灼燒接種環(huán)上的菌；以無菌操作用接種環(huán)直接取平板上待分別純化的菌落；將菌種點(diǎn)種在平板邊緣一處,取出接種, 燒去余外菌體； 將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙伸人平板,在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線；劃線時(shí)平板面與接種環(huán)面成3040°的角度,以手腕力氣在平板表面輕巧滑動(dòng)劃線；接種環(huán)不要嵌入培育基內(nèi)劃破培育基,線條要平行密集,充分利用平板表面積,留意勿使前后兩條線重疊；劃線完畢,關(guān)上皿蓋；灼燒接種環(huán),待冷卻后放置接種架上；培育皿倒置于適溫的恒溫培育箱內(nèi)培育 以免培育過程中皿蓋冷凝水滴下,沖散 巳分別的菌落 ；培育后在劃線甲板上觀看沿劃線處長(zhǎng)出的菌落外形,涂片鏡檢為純種后再接種斜面；2分區(qū)劃線法平板分四區(qū),故又稱四分區(qū)劃線法；劃線時(shí)每次將平板轉(zhuǎn)動(dòng)60 一 70°劃線,每換一次角度,應(yīng)將接種環(huán)上的菌燒死后,再在上次劃線末尾處連續(xù)劃線；取菌.接種.培育方法與連續(xù)劃線法相像；分區(qū)劃線法劃線分別的平板分4 個(gè)區(qū),其中第四區(qū)為單菌落的主要分布區(qū),故其劃線面積應(yīng)最大；為防止第四區(qū)內(nèi)劃線與l .2.3 區(qū)線條和接觸,應(yīng)使4 區(qū)線條與l 區(qū)線條和平行,這樣區(qū)與區(qū)間線條夾角最好保持120 度左右；先將接種環(huán)沾取少量菌在平板1 區(qū)劃 3 5 條平行線,取出接種環(huán), 左手關(guān)上皿蓋 將平板轉(zhuǎn)動(dòng)6070°,右手把接