非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因檢測

1、NSCLC患者EGFR基因突變檢測腺癌的驅(qū)動基因腺癌的驅(qū)動基因LCMC(美國)MSN(法國)中國日本EGFR17%13%40%50%KRAS22%28%7%15%ELM4-ALK7%2%7%5%BRAF2%2%2%1%HER21%1%NA3%PIK3CA1%1%4%NAPTENNANA6%NAMET擴增1%1%5%4%Nil46%33%29%22%Kris ASCO 2011 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 2010 97%的基因突變互相排斥的基因突變互相排斥單個突變數(shù)ALKAKTBRAFEGFRHER2KRASMEK1METNR

2、ASPIK3CAALK (38)X1211AKT (1)XBRAF (9)X1EGFR (89)X13HER2 (3)XKRAS (114)X11MEK1 (2)X11MET AMP (3)XNRAS (2)XPIK3CA (6)XKris MG. et al. ASCO 2011, Abstract # CRA7506. 4高加索人腺癌各基因構(gòu)成比圖5中國人肺腺癌各基因構(gòu)成比圖關(guān)于關(guān)于“驅(qū)動基因驅(qū)動基因”近50% NSCLC驅(qū)動基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)雙基因同時突變罕見對已知的靶點，已有很多上市或在研的藥物驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。NSCLC基因檢測的意

3、義基因檢測決定了分子靶向治療基因檢測決定了分子靶向治療2011年我國制定了年我國制定了:中國非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長因子中國非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變檢測專家共識受體基因突變檢測專家共識EGFR基因突變檢測的臨床意義EGFR-TKI一線治療必須進(jìn)行EGFR基因突變的檢測，國內(nèi)外均推薦EGFR基因突變陽性的NSCLC給予EGFR-TKI一線治療優(yōu)勢人群不代表個體：盡管在女性、亞裔、不吸煙或少吸煙、腺癌EGFR基因突變發(fā)生頻率較高，但在鱗癌、腺鱗癌，甚至SCLC中也可檢測到EGFR基因突變。EGFR基因突變檢測的臨床意義EGFR突變不同類型療效也不一樣，19-del較L858R療效好

4、,檢測的必要性EGFR基因突變檢測的臨床意義化療能改變EGFR突變狀態(tài)264例一線化療的bIV期NSCLC患者的血DNA標(biāo)本，EGFR突變率在化療后顯著降低（23.1%對34.5%，P1毫升。如需長途運輸，加入乙醇浸泡60分鐘以上。為符合托運要求，可付運前可離心后倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標(biāo)準(zhǔn)試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保3天內(nèi)到達(dá)。 EGFR檢測方法目前公認(rèn)有兩種：測序法和ARMS法（等位基因特異PCR+熒光探針）EGFR檢測方法測序法ARMS法敏感度1030%(變異)10.1 %(變異)發(fā)現(xiàn)突變已知和未知已知石蠟包埋組織成功率低高假陽性（交叉污染）多少假陰性多少檢測流程復(fù)雜漫長，污染多

5、簡單快速儀器成本高低試劑成本低略高 EGFR檢測方法北京協(xié)和張靜報道：82例NSCLC直接測序法中24例無結(jié)果，ARMS法均有結(jié)果，且16例檢測到變異 中華病理學(xué)雜志，2008,37（5）有結(jié)果變異率測序法70.7% （58/82例）43.1%(25/58例）ARMS法100%（82/82例）51.2 %(42/82例） 關(guān)于胸水EGFR突變的檢測Cancer Sci. 2006;97(7):642-8. Int J Cancer. 2006;119(10):2353-8. Chang Gung Med J. 2006;29(4):373-9. Br J Cancer. 2006;95(10)

6、:1390-5. J Cancer Res Clin Oncol. 2010;136(9):1341-7. 國內(nèi)外胸水標(biāo)本國內(nèi)外胸水標(biāo)本EGFR檢測的研究檢測的研究作者作者 國家國家/地區(qū)地區(qū) 病例數(shù)病例數(shù)EGFR突變率突變率（%）Kimura H日本2433%Soh J日本6126%Hung MS臺灣2941%Kimura H日本4325.6%Jian G中國 3228.1%用胸水檢測腫瘤用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法突變需要敏感方法用胸水中細(xì)胞及無細(xì)胞液均可檢測用胸水中細(xì)胞及無細(xì)胞液均可檢測EGFR突變，且檢突變，且檢出率基本相同出率基本相同目前缺少胸水與腫瘤組織直接對比（配對樣本

7、檢測）目前缺少胸水與腫瘤組織直接對比（配對樣本檢測）數(shù)據(jù)，故對其敏感度與特異性尚無結(jié)論數(shù)據(jù)，故對其敏感度與特異性尚無結(jié)論胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究本研究的目的：探索胸腔積液與胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變檢測的一致性，從而判斷當(dāng)存在胸膜轉(zhuǎn)移灶時，胸液EGFR基因突變狀態(tài)檢測的價值。收集2011年4月-2012年12月間就診于上海長海醫(yī)院呼吸科符合入組條件患者的胸液標(biāo)本及相應(yīng)的胸膜轉(zhuǎn)移病灶組織，共35對樣本。研究步驟胸膜轉(zhuǎn)移灶樣本采集電子胸腔鏡在局麻下進(jìn)行胸腔鏡檢查術(shù)鏡下見病灶后以活檢4-6塊組織，10%中性福爾馬林固定，后包埋成蠟塊每例蠟塊切取10-12片5m 厚連續(xù)切片，切片在37烘箱內(nèi)烤片3h后常溫

8、保存研究步驟胸腔積液樣本采集胸腔積液樣本采集每例患者同時收集胸水100-200ml，常溫靜置30min后取上清15ml，-80保存，為待檢測的胸液上清；在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細(xì)胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本），為待檢測的胸液沉淀；每例蠟塊切取10-12片5m 厚連續(xù)切片，切片在37烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存。胸膜活檢組織EGFR突變狀況病人數(shù)EGFR突變 突變率%P男性18633.30.094女性171164.7有吸煙史101100.007無吸煙史251664胸液沉淀與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶胸液沉淀與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFREGFR突變的比較

9、突變的比較 胸膜組織胸膜組織EGFR突變突變胸液沉淀胸液沉淀EGFR突變突變+-合計+12416-2810合計合計141226符合率為符合率為73.1%胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFREGFR突變的比較突變的比較胸膜組織胸膜組織EGFR突變突變胸液上清胸液上清EGFR突變突變+-合計合計+14216-31619合計合計171835符合率為符合率為85.7% 胸液上清與相應(yīng)沉淀胸液上清與相應(yīng)沉淀EGFREGFR突變的比較突變的比較胸液沉淀胸液沉淀EGFR突變突變胸液上清胸液上清EGFR突變突變+-合計合計+12113-4913合計合計161026 符合率為符合率為80.8% 胸液胸液EGFREGFR突變檢測率的比較突變檢測率的比較敏感性敏感性特異性特異性例數(shù)比例數(shù)比百分?jǐn)?shù)百分?jǐn)?shù)例數(shù)比例數(shù)比百分?jǐn)?shù)百分?jǐn)?shù)胸液沉淀胸液沉淀12/1485.7%8/1266.7%胸液上清胸液上清14/1782.4%16/1888.9%胸液沉淀胸液沉淀+上清上清16/1794.1%14/1877.8%結(jié)結(jié) 論論以ARMS方法檢測胸液中EGFR突變狀態(tài)，與經(jīng)胸腔鏡取