乙型肝炎病毒表面抗體定量測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

1、乙型肝炎病毒表面抗體定量測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書(shū)一、 目的： 規(guī)范乙型肝炎病毒表面抗體測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，確保乙型肝炎病毒表面抗體測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。二、 適用范圍： 在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀上定量測(cè)定人血清中的乙型肝炎病毒表面抗體。三、臨床意義乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病，據(jù)估計(jì)全球范圍內(nèi)目前大約有 3 億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝臟疾病，流行病學(xué)研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細(xì)胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。表面抗體 (Anti-HBs) 是一種保護(hù)性抗體，是乙肝感染后痊愈或趨向治愈的象征；全程（ 3 針）疫苗接種結(jié)束后 1 個(gè)月檢測(cè)保護(hù)性表面抗體

2、 (Anti-HBs)的濃度，能夠判定免疫效果。關(guān)于表面抗體與保護(hù)力的關(guān)系，世界標(biāo)準(zhǔn)未完全統(tǒng)一，目前普遍認(rèn)為普通人群表面抗體濃度值10mIU/ml ，就有足夠的保護(hù)作用； 高危人群表面抗體濃度值100mIU/ml ，具有足夠的保護(hù)作用。肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期檢測(cè)表面抗體濃度值，每次檢測(cè)值100mIU/ml為宜。四、方法原理本產(chǎn)品采用雙抗原夾心法原理進(jìn)行檢測(cè)。用表面抗原包被磁微粒，用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記表面抗原制備酶結(jié)合物。通過(guò)免疫反應(yīng)形成抗原 -抗體 - 酶標(biāo)抗原復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強(qiáng)度與表面抗體的含量成正比。五、標(biāo)本的采集與處理5.1.采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血

3、清/血漿樣本，推薦對(duì)于使用普通管采血的樣本，離心前樣本應(yīng)37孵育至少1h；對(duì)于使用促凝管采血的樣本，離心 前 樣 本 應(yīng)37 孵 育 至 少0.5h ， 離 心 條 件10000g/min ，10min ；對(duì)于使用抗凝管采血的樣本，離心條件10000g/min ，10min ?？鼓芡扑]使用肝素鈉作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和EDTA 抗凝劑。5.2.樣本中的沉淀物和懸浮物可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)離心除去，并確定樣本未變質(zhì)方可使用。5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測(cè)定。5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過(guò)8 小時(shí)；如果不在8 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)需將樣本放置在28的冰箱中；若需48 小時(shí)以上保存或運(yùn)輸

4、，則應(yīng)凍存于-20 以下，避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動(dòng)混勻。六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)1）嚴(yán)重溶血、脂血2）標(biāo)本標(biāo)識(shí)不明七、儀器與材料7.1.儀器：適用于AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀。7.2.試劑： AutoLumo A2000 專用乙型肝炎病毒表面抗體試劑7.2.1.試劑準(zhǔn)備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。7.2.2.試劑盒于2 8儲(chǔ)存，有效期12 個(gè)月。7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍，避免強(qiáng)光照射。7.2.4.試劑盒開(kāi)啟使用后，28保存可使用1個(gè)月。7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸，運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽(yáng)光曝曬。7.2.6.試劑

5、機(jī)載穩(wěn)定性7.2.6.1.試劑包（磁微?；鞈乙?、酶結(jié)合物）豎直向上存放，在 2 10C 環(huán)境下冷藏保存2小時(shí)后，才可上機(jī)使用。首次使用后，機(jī)載或在210C 環(huán)境下穩(wěn)定期為28天。7.2.6.2.校準(zhǔn)品開(kāi)瓶后保存于28C，穩(wěn)定期可維持 1個(gè)月；若需使用更長(zhǎng)時(shí)間，應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行分裝，于 -20凍存（可以保存 2個(gè)月），但應(yīng)避免反復(fù)凍融。八、檢驗(yàn)方法8.1.消耗品檢查：8.1.1.根據(jù)儀器說(shuō)明裝載或檢查消耗品是否充足。8.1.2.參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。8.2.試劑包裝載：8.2.1.試劑包首次上機(jī)前，輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成份，避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開(kāi)的試劑包。8.2.2

6、.儀器通過(guò)掃描試劑包條碼自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。8.2.3.如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼，可以手工輸入。8.2.4.參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。8.3.測(cè)試：8.3.1.將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測(cè)試樣本量為50l 。8.3.2.裝載樣本架， 在儀器軟件界面中輸入樣本信息。8.3.3.選擇“運(yùn)行”開(kāi)始測(cè)試，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行試驗(yàn)操作。8.3.4.參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。8.4.定標(biāo)：8.4.1.儀器通過(guò)掃描條碼卡自動(dòng)獲取測(cè)試所需的參數(shù)。8.4.2.如果特殊情況下儀器無(wú)法識(shí)別條碼卡，可以手工輸入。8.4.3.將校準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。8.4.4.裝載樣本架，在儀

7、器軟件界面中輸入定標(biāo)信息。8.4.5.選擇 “運(yùn)行 ”開(kāi)始測(cè)試，生成定標(biāo)曲線。8.4.6.定標(biāo)曲線有效期為28 天。8.4.7.參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明。8.4.8.出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行定標(biāo)曲線的重新生成：8.4.8.1.質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測(cè)定后仍然超出范圍；8.4.8.2.試劑盒或發(fā)光底物液的批號(hào)更改；8.4.8.3.超出定標(biāo)曲線的有效期限；8.4.8.4.儀器重要部件更換或維修。8.5.質(zhì)控：8.5. 1.使用至少兩個(gè)分析物水平的質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控。8.5.2 .出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行質(zhì)控：8.5. 2.1.測(cè)試試劑盒使用超過(guò)24 小時(shí)；8.5. 2.2.更換新的試劑盒；8.5. 2.3.重新生成

8、定標(biāo)曲線；8.5. 2.4. 停機(jī)。8.5.3.各實(shí)驗(yàn)室需根據(jù)自身情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的可接受范圍，以確保合適的測(cè)試性能。8.5.4.質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)失控，應(yīng)采取糾正措施。8.6.稀釋8.6.1.使用手工稀釋或儀器自動(dòng)稀釋功能，儀器自動(dòng)稀釋的最大比例為1:100。8.6.2.手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，將得到的檢測(cè)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算最終結(jié)果。8.6.3.選擇儀器自動(dòng)稀釋功能，可以得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說(shuō)明以及幫助系統(tǒng)。8.6.4.稀釋后的樣本含量應(yīng)不低于5mIU /ml 。8.7.結(jié)果計(jì)算：選擇適當(dāng)?shù)那€擬合方式，本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式

9、，以校準(zhǔn)品濃度值為x 軸，以校準(zhǔn)品發(fā)光強(qiáng)度log 值為 y 軸建立定標(biāo)曲線。根據(jù)待測(cè)樣本的發(fā)光強(qiáng)度值回算相應(yīng)的濃度值。儀器自動(dòng)操作系統(tǒng)可通過(guò)存儲(chǔ)的定標(biāo)曲線以及樣本測(cè)試得到的發(fā)光值自動(dòng)計(jì)算樣本測(cè)試結(jié)果。九、參考范圍正常參考值：10mIU/ml建議各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己實(shí)際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，供臨床醫(yī)生參考。十、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋10.1.用本試劑盒檢測(cè)結(jié)果濃度值為8.0 12.0mIU/ml的弱反應(yīng)性可疑樣本，建議雙份重新測(cè)定，如果雙份復(fù)查濃度值均小于 10 mIU/ml ，結(jié)果判為陰性，如果單份或雙份測(cè)定不低于10 mIU/ml ，結(jié)果判為陽(yáng)性，同時(shí)建議動(dòng)態(tài)觀

10、察。10.2.本試劑盒測(cè)定范圍為5 1000mIU/ml ，濃度值大于1000mIU/ml 的樣本，其結(jié)果是通過(guò)定標(biāo)曲線外延得出的計(jì)算結(jié)果。如果要獲得其更準(zhǔn)確的結(jié)果，需對(duì)樣本進(jìn)行稀釋后重新測(cè)定，推薦稀釋比例為 1/100，使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增大稀釋比例。10.3.由于方法學(xué)或免疫特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對(duì)同一份樣本進(jìn)行檢測(cè)可能會(huì)得到不同的檢測(cè)結(jié)果，因此不同試劑檢測(cè)所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)報(bào)告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測(cè)中，如果改變?cè)噭╊愋?，則應(yīng)進(jìn)行額外的連續(xù)性檢測(cè)并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以

11、重新確定基線值。十一、檢驗(yàn)方法的局限性11.1.本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，臨床診斷應(yīng)與臨床檢查、病史及其他檢測(cè)相結(jié)合。11.2.樣本中的異嗜性抗體或類風(fēng)濕因子會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。此類樣本不適合用本試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。11.3.溶血、脂血或渾濁的樣本可能會(huì)造成不正確的檢測(cè)結(jié)果。十二、產(chǎn)品性能特征12.1. 符合率：與 SFDA 批準(zhǔn)的試劑平行檢測(cè)1024 份臨床樣本，陰性符合率99.58%，陽(yáng)性符合率99.02% ，總符合率99.41%。12.2.最低檢出限：10mIU/ml 。12.3.精密性： 10 孔平行檢測(cè)濃度值為10mIU/ml 樣本，CV% 15.0%；10 孔平行檢測(cè)濃度值為 10

12、0mIU/ml 樣本，CV% 10.0%。 12.4. 線性：在 5 1000mIU/ml 范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù) （ r）不低于 0.9900。12.5.分析特異性：與抗-HIV （ 1+2）、抗 -HCV 、抗 -HAV等病毒性抗體無(wú)交叉反應(yīng)。 2.5mg/ml 血紅蛋白、 200mg/L 膽紅素、 10g/L甘油三酯和500mg/dl膽固醇對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著干擾。12.6.HOOK 效應(yīng)：測(cè)定HBsAb 濃度值為30000mIU/ml的樣本，未出現(xiàn)HOOK效應(yīng)引起的假陰性結(jié)果。十三、參考文獻(xiàn)1.LokASE,McMahonBJ. AASLDchronic hepatitis B.Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.2.LavanchyD.HepatitisBvirusburden, treatment, andpractice guidelines ：epidemiology,diseasecurrent an