原發(fā)性肝癌組織庫及數(shù)據(jù)庫的建立

原發(fā)性肝癌組織庫及數(shù)據(jù)庫的建立目的：建立原發(fā)性肝癌組織庫及數(shù)據(jù)庫，通過對(duì)肝癌患者的血液、新鮮組織、病理蠟塊等標(biāo)本的收集、保存和研究，對(duì)其進(jìn)行科學(xué)的管理和質(zhì)量控制，為肝癌的基礎(chǔ)和臨床研究提供寶貴材料，并能為腫瘤患者的個(gè)性化治療和隨訪提供幫助。材料：腫瘤患者血液樣本及腫瘤標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：診斷為原發(fā)性肝癌或原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移的患者?；颊邔?duì)血液、樣本采集均知情同意，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他腫瘤轉(zhuǎn)移到肝臟上的患者予以排除。所需試劑及儀器：1. 液氮罐2. -80 超低溫冰箱3. 4-20 冰箱4. 離心機(jī) 我科均已配置采集前準(zhǔn)備：術(shù)前一天安排采集標(biāo)本人員，填寫肝癌標(biāo)本臨床資料表（對(duì)具有診斷意義的影像學(xué)資料進(jìn)行照相留影存檔），請(qǐng)患者或家屬簽署知情同意書，確認(rèn)轉(zhuǎn)移式液氮罐充滿液氮，消毒滅菌兩套手術(shù)標(biāo)本采集器械（手術(shù)刀、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、不銹鋼標(biāo)尺、錫箔紙、凍存管）。手術(shù)當(dāng)天攜帶冰盒、轉(zhuǎn)移式液氮罐、標(biāo)本采集器械、10%福爾馬林溶液、照相機(jī)、標(biāo)記好的凍存管（標(biāo)本庫專用標(biāo)記碼）、肝癌標(biāo)本資料表等，提前入手術(shù)室準(zhǔn)備好標(biāo)本采集臺(tái)，鋪無菌手術(shù)巾，做好標(biāo)本采集的準(zhǔn)備。1. 血清和血漿的采集及處理：患者按術(shù)前、術(shù)中、術(shù)后當(dāng)天、術(shù)后1 周等不同時(shí)間段取血，每次采6 mL1 份3 mL EDTA抗凝，采血后輕輕顛倒混勻3次靜置，防止溶血1份3 mL不抗凝，室溫靜置 2 h，2 000 r/min離心10 min抗凝2 h內(nèi)分離血漿：2 000 r/min離心10 min。每管100 L分裝3 mL N.S+3 mL抗凝靜脈血，再加等體積Ficoll分離液至液面上，2 000 r/min離心10 min加樣器吸取血清，每管100 L 分裝，作蛋白組學(xué)分析在界面白膜處吸取淋巴細(xì)胞，N.S漂洗3次，沉淀于凍存管上述標(biāo)本編號(hào)、作好標(biāo)記，在采血后3 h內(nèi)凍存在-80 冰箱中2. 組織標(biāo)本的處理和保存：手術(shù)結(jié)束后在不影響病理診斷取材需要的前提下采集組織樣本。整個(gè)切取標(biāo)本的過程應(yīng)控制在20分鐘內(nèi)。用于提取RNA及蛋白的組織新鮮組織的采集及保存組織標(biāo)本切成厚度小于0.5 cm小塊，放入滅菌的EP管中，迅速放入冰盒生理鹽水沖洗2次，取腫瘤組織、癌旁組織(癌組織旁1 cm)、正常組織(癌組織旁35 cm以外或最遠(yuǎn)處)。將標(biāo)本切成小塊(0.5 cm0.5 cm，厚度1.6，28S和18S條帶清晰明亮，且28S亮度強(qiáng)于18S，比值在2左右，則完整性良好。若比值1，則RNA已降解?？偟鞍诇y(cè)定濃度后加入5xloading Buffer并在100煮5min變性后放入-20冰箱中保存。總RNA樣本利用Fermentas反轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA入-20冰箱保存剩余RNA樣本-80低溫冰箱保存。3. 標(biāo)本的標(biāo)記和儲(chǔ)存3.1 標(biāo)本分裝入凍存管。標(biāo)記：凍存管編號(hào)、患者姓名、住院號(hào)、疾病種類、組織部位(或血清、血漿)、標(biāo)本收集日期、標(biāo)本入庫日期。3.2 凍存管編號(hào)由存放位置坐標(biāo)確定。3.3 數(shù)據(jù)庫的管理。采用EXCEL軟件。3.3.1 患者信息錄入：包括患者的姓名、性別、年齡、民族、職業(yè)、聯(lián)系方式、隨訪時(shí)間、住院號(hào)（如多次住院則詳細(xì)記錄每次住院號(hào)）、臨床診斷、病史摘要（主要記錄有無肝炎、陽性家族史、黃疸、腹水、肝功Child分級(jí)等肝癌相關(guān)情況）、手術(shù)情況（包括手術(shù)方式、日期、術(shù)中探查所得重要信息、術(shù)中出血量等）、病理診斷（病理號(hào)）?；颊咻o助檢查信息：檢查項(xiàng)目、檢查日期、檢查結(jié)果等。3.3.2 標(biāo)本信息錄入：（A）病理信息：腫瘤體積、組織類型、分級(jí)、浸潤(rùn)深度、切緣情況、門脈及肝門淋巴結(jié)情況。（B）標(biāo)本基本信息：入庫編號(hào)、入庫時(shí)間、入庫類別、病變部位、標(biāo)本描述（附照片）、標(biāo)本采集時(shí)組織離體時(shí)間、收集人、保存方式、初步處理方式。（C）存放位置信息：存放位置坐標(biāo)。3.3.3 標(biāo)本使用管理：包括使用登記、標(biāo)本原始位置、使用單位、使用人、經(jīng)手人等。3.3.4 標(biāo)本廢除管理：包括廢除登記、標(biāo)本原始位置、廢除日期、廢除原因、審批人等。標(biāo)本庫的系統(tǒng)管理：標(biāo)本的采集、保存、使用實(shí)行專人管理。管理人員經(jīng)過專業(yè)的培訓(xùn)后，應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)本庫制定的各項(xiàng)規(guī)章制度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化管理。定期核對(duì)，隨機(jī)取庫存標(biāo)本進(jìn)行光鏡檢查、核酸抽提，了解保存質(zhì)量。病歷資料嚴(yán)格按照規(guī)范化錄入，定期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析。注意事項(xiàng)：1. 組織標(biāo)本的離體時(shí)間對(duì)于標(biāo)本的保存質(zhì)量至關(guān)重要，應(yīng)在切除后1 h內(nèi)取材。2. 應(yīng)盡量避免