酶工程 第五章 酶改性的基本理論酶的結構及其與催化特性的關系VIP

.,1,酶工程EnzymeEngineering,林范學fanxuelin,.,2,第二篇酶的改性,酶的改性（enzymeimproving）：通過各種方法使酶的催化特性得以改進的技術過程酶的改性的目的提高酶的催化效率增加酶的穩(wěn)定性降低或消除酶的抗原性提高酶的使用效率（反復或連續(xù)使用酶）擴大酶的使用范圍（研究酶在水溶液以外的條件下進行催化反應的特性和條件）酶的結構與功能的關系研究,.,3,常用的方法:酶分子修飾（enzymemoleculemodification）酶分子定向進化（enzymemoleculedirectedevolution）酶固定化（enzymeimmobilization）酶非水相催化（enzymecatalysisinnon-aqueousphase）,.,4,第五章酶改性的基本理論酶的結構及其與催化特性的關系,第一節(jié)酶的化學組成第二節(jié)酶的化學結構第三節(jié)酶的空間結構第四節(jié)酶的活性中心第五節(jié)酶的結構與催化特性的關系,.,5,第一節(jié)酶的化學組成,.,6,一、蛋白類酶的基本組成單位氨基酸,氨基酸結構肽鍵,.,7,.,8,.,9,二、核酸類酶的基本組成單位核苷酸,堿基+核糖+磷酸=核苷酸3,5-磷酸二酯鍵,.,10,5AMP,5GMP,5UMP,5CMP,.,11,三、酶的輔因子,單成分酶：僅有蛋白質或核糖核酸組成的酶雙成分酶：除了蛋白質或核糖核酸外，還有其他非生物大分子成分的酶。,全酶holoenzyme,無催化活性,有催化活性,決定專一性,傳遞電子、原子或某些化學基團,.,12,1.無機輔因子,金屬離子的作用：參與催化反應、穩(wěn)定酶的構象。,.,13,無機輔助因子主要是指各種金屬離子，尤其是各種二價金屬離子。,（1）鎂離子鎂離子是多種酶的輔助因子，在酶的催化中起重要作用。例如，各種激酶、檸檬酸裂合酶、異檸檬酸脫氫酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、各種自我剪接的核酸類酶等都需要鎂離子作為輔助因子。,1.無機輔因子,.,14,（2）鋅離子鋅離子是各種金屬蛋白酶，如木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶等的輔助因子，也是銅鋅-超氧化物歧化酶（Cu，Zn-SOD）、碳酸酐酶、羧肽酶、醇脫氫酶、膠原酶等的輔助因子。,（3）鐵離子鐵離子與卟啉環(huán)結合成鐵卟啉，是過氧化物酶、過氧化氫酶、色氨酸雙加氧酶、細胞色素B等的輔助因子。鐵離子也是鐵-超氧化物歧化酶（Fe-SOD）、固氮酶、黃嘌呤氧化酶、琥珀酸脫氫酶、脯氨酸羧化酶的輔助因子。,.,15,（4）銅離子銅離子是銅鋅-超氧化物歧化酶、抗壞血酸氧化酶、細胞色素氧化酶、賴氨酸氧化酶、酪氨酸酶等的輔助因子。,（5）錳離子錳離子是錳-超氧化物歧化酶（MnSOD）、丙酮酸羧化酶、精氨酸酶等的輔助因子。,（6）鈣離子鈣離子是-淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等的輔助因子。,.,16,2.有機輔因子,是指雙成分酶中相對分子量較小的有機化合物。它們在酶催化過程中起著傳遞電子、原子或基團的作用。(1)傳遞電子體：如卟啉鐵、鐵硫簇；(2)傳遞氫（遞氫體）：如FMN/FAD、NAD+/NADP+、CoQ、硫辛酸；(3)傳遞?；w：如CoA、TPP、硫辛酸；(4)傳遞一碳基團：如四氫葉酸；(5)傳遞磷酸基：如ATP，GTP；(6)其它作用：轉氨基，如磷酸吡哆醛（VB6）；傳遞CO2，如生物素。,.,17,(1)煙酰胺核苷酸(NAD+，NADP+)B族維生素許多脫氫酶的輔因子：乳酸脫氫酶、醇脫氫酶、谷氨酸脫氫酶、異檸檬酸脫氫酶NAD+：煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，輔酶I一般與呼吸鏈相連，與分解反應偶聯(lián)：（醇脫氫酶催化伯醇脫氫生成醛）RCH2CH2OH+NAD+=RCH2CHO+NADH+H+NADP+：煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，輔酶。一般與合成反應相偶聯(lián)。,.,18,(2)黃素核苷酸(FMN和FAD)維生素B2(核黃素)的衍生物各種黃素酶(氨基酸氧化酶、琥珀酸脫氫酶等)的輔助因子FMN：黃素單核苷酸FAD：黃素腺嘌呤二核苷酸FMN和FAD的主要作用是傳遞氫。,.,19,(3)鐵卟啉鐵卟啉是一些氧化酶（如過氧化氫酶、過氧化物酶等）的輔助因子。它通過共價鍵與酶蛋白牢固結合。(4)硫辛酸硫辛酸全稱為6,8-二硫辛酸。它在氧化還原酶的催化作用中，通過氧化型和還原型的互相轉變而起傳遞氫的作用。(5)核苷三磷酸(NTP)腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)、鳥苷三磷酸(CTP)、胞苷三磷酸(CTP)、尿苷三磷酸(UTP)等。它們是磷酸轉移酶的輔助因子。,.,20,(6)鳥苷鳥苷是含型IVS的自我剪接酶(R-酶)的輔助因子。(7)輔酶Q輔酶Q是一系列苯醌衍生物一些氧化還原酶的輔助因子。(8)谷胱甘肽(GSH)L-GluL-IleL-Gly三肽,.,21,(9)輔酶A（CoA）輔酶A是各種酰基化酶的輔酶，由一分子腺苷二磷酸、一分子泛酸和一分子巰基乙胺組成。(10)生物素生物素是維生素B的一種，又稱維生素H生物素是羧化酶的輔助因子，在酶催化反應中，起CO2的滲入作用。,.,22,(11)硫胺素焦磷酸(TPP)即維生素B1，是酮酸脫羧酶的輔助因子。(12)磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺即維生素B6，是各種轉氨酶的輔助因子。在酶催化氨基酸和酮酸的轉氨過程中，維生素B6通過磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺的互相轉變，起到氨基轉移作用,.,23,第二節(jié)酶的化學結構,一、酶蛋白的化學結構即一級結構，是指蛋白質中的氨基酸按照特定的排列順序通過肽鍵連接起來的多肽鏈結構。氨基酸的種類和數(shù)目氨基酸的排列次序二硫鍵的數(shù)目和位置肽鏈的數(shù)目等。每種蛋白質都由唯一而確定的遺傳信息決定氨基酸序列一級結構決定蛋白質的高級結構,.,24,氨基酸：20種,AA的結構特點-AA；除Gly外都具有光學性(有D-和L-型兩種光學異構體)。,結構通式:,.,25,-氨基酸,賴氨酸,.,26,L-型和D-型,丙氨酸,levorotatorydextrotatory,.,27,肽：一個氨基酸的-羧基和另一個氨基酸的-氨基脫水縮合而成的化合物。肽鍵（peptidebond）：一個氨基酸的-COOH和相鄰的另一個氨基酸-NH2脫水所形成的共價鍵。,.,28,.,29,肽單位：,CN，半雙鍵性（partialdouble-bondcharacter），不能旋轉CC、NC，真正單鍵（puresinglebond），可以旋轉,.,30,二硫鍵：2個Cys的巰基脫氫聯(lián)結而成,肽鏈內二硫鍵,肽鏈間二硫鍵,.,31,牛胰核糖核酸酶一級結構,.,32,胰凝乳蛋白酶chymotrypsin,.,33,.,34,酶蛋白化學結構的測定,（1）酶蛋白的分離純化（純度97）沉淀、離心、電泳、層析等等（2）氨基酸種類和數(shù)目的確定蛋白質水解后用層析技術等分離鑒定。氨基酸自動分析儀,.,35,（3）肽鏈數(shù)目的確定通過末端分析等方法測定肽鏈的數(shù)目通過還原法打開二硫鍵在8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍存在下，用過量的-巰基乙醇處理，使二硫鍵還原為巰基，然后用烷基化試劑保護生成的巰基，防止重新被氧化。（4）氨基酸順序測定酶蛋白不完全水解各種小肽末端分析綜合分析,.,36,末端分析,二硝基氟苯（FDNB）法（N-末端分析）,.,37,肼解法（C-末端分析）,.,38,二、酶RNA的化學結構,酶RNA的化學結構主要包括組成RNA的核苷酸種類、數(shù)目和排列順序。4種核苷酸：AMP，GMP，CMP，UMP3-5磷酸二酯鍵連接,.,39,酶RNA化學結構的測定核酸自動測序儀,.,40,高通量測序（High-throughputsequencing）又稱“下一代”測序技術（“Next-generation”sequencingtechnology），以能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定和一般讀長較短等為標志。大規(guī)模平行簽名測序（MassivelyParallelSignatureSequencing,MPSS)聚合酶克?。≒olonySequencing）454焦磷酸測序（454pyrosequencing）Illumina(Solexa)sequencingABISOLiDsequencing離子半導體測序（Ionsemiconductorsequencing）DNA納米球測序（DNAnanoballsequencing）等。,.,41,.,42,傳統(tǒng)方法:(1)酶RNA的分離純化，得到較純的RNA樣品(2)將RNA水解成各種核苷酸，確定核苷酸的種類和數(shù)量(3)用特異性酶切法或雙脫氧終止法進行RNA序列測定,.,43,第三節(jié)酶的空間結構,酶蛋白的空間結構：二、三、四級結構酶RNA的空間結構：二、三級結構,.,44,一、酶蛋白的空間結構,包括二級結構、三級結構、四級結構基本結構單位：螺旋、折疊、轉角、卷曲等結構,.,45,1、酶蛋白的副鍵,（1）氫鍵:肽鍵中羰基的氧原子等與亞氨基、羥基、氨基等基團中氫原子聯(lián)結成的副價鍵（2）鹽鍵：蛋白質分子中氨基與羧基形成，結合力較強,.,46,（3）酯鍵：蛋白質分子中羧基與氨基酸上的羥基脫水而縮合而成（4）二硫鍵：由蛋白質分子上兩個半胱氨酸殘基上巰基通過氧化脫氫而成，對蛋白質穩(wěn)定性起重要作用,R1SSR2,.,47,（5）疏水鍵：蛋白質分子中疏水性較強的側鏈基團聚集而成，對穩(wěn)定蛋白有一定作用；,.,48,（6）范德華力：借助靜電引力而形成，鍵能較?。?）金屬鍵：通過金屬離子與蛋白質中基團聯(lián)結而成，維持蛋白質空間構型有一定作用，在四級結構中聯(lián)結亞基。,CopperchaperoneproteinPcoC,銅伴侶蛋白,.,49,2、酶蛋白的二級結構,主要指多肽鍵主鏈原子的局部空間排列，一般不考慮側鏈的構象。包括：-螺旋結構-片層結構-轉角結構無規(guī)卷曲,.,50,（1）-螺旋結構,-螺旋結構是由蛋白質的肽鏈環(huán)繞中心軸有規(guī)則一圈一圈盤旋而成。右手螺旋（-helix）,螺距為0.54nm,含3.6個AA殘基兩個AA之間的距離為0.15nm；AA殘基側鏈伸向外側，相鄰的螺圈之間形成鏈內氫鍵；主要靠氫鍵維持,.,51,-螺旋有左旋和右旋兩種，右旋比左旋更加穩(wěn)定，因此也更常見。,.,52,（2）-片層結構(pleatedsheet),又稱-折疊，是兩條或多條肽鏈充分伸展成鋸齒狀的折疊結構，通過側向聚集，形成與肽鏈長軸方向平行的折扇狀構象。,肽鏈幾乎完全伸展，通過鏈間的氫鍵交聯(lián)維持結構；肽鏈的主鏈呈鋸齒狀折疊構象，R基團處于折疊平面的兩側。,.,53,平行式,反平行式,.,54,（3）-轉角結構（turn）,又稱轉彎或發(fā)卡結構，是在球蛋白中發(fā)現(xiàn)。,球狀蛋白的多肽鏈經常出現(xiàn)180的回折，這個回折角就是轉角結構；它由四個AA殘基組成;回折處的第一個AA殘基的-C=O和第四個AA殘基的N-H之間形成氫鍵，形成一個不很穩(wěn)定的環(huán)狀結。-轉角結構中常出現(xiàn)的AA有Gly、Pro、Asp、Asn、Trp等,.,55,.,56,（4）無規(guī)卷曲（nonregularcoil）,又稱自由回轉（randomcoil)，是肽鏈的主鏈不規(guī)則、多向性地隨機盤曲所形成構象。,.,57,在同一種蛋白質中，無規(guī)卷曲出現(xiàn)的部位和結構完全相同（有規(guī)律）不同蛋白質中或同一蛋白中不同肽段中，無規(guī)卷曲形式多樣（無規(guī)律）通常酶的活性中心常處在這一構象區(qū)域里。,.,58,3、超二級結構和結構域,超二級結構(supersecondarystructure，Motif)：是指若干相鄰的二級結構中的構象單元彼此相互作用，形成有規(guī)則的，在空間上能辨認的二級結構組合體。，。,.,59,超二級結構,-花式,-loop-花式,-loop-花式,.,60,結構域（domain）：是在超二級結構基礎上進一步卷曲折疊成緊密的近似球狀的結構，在空間上彼此分隔，各自具有部分生物功能的結構。,.,61,由4個組成的/桶結構域,/桶結構域：丙酮酸激酶,小的蛋白質分子只有一個結構域結構域三級結構大的蛋白質分子有數(shù)個結構域,.,62,丙酮酸激酶,己糖激酶,前清蛋白,肌紅蛋白,免疫球蛋白,.,63,4、三級結構（TertiaryStructure）,在二級結構基礎上，肽鏈不同區(qū)段的側鏈基團相互作用，進一步盤繞、折疊形成的的空間結構。不考慮亞基和分子間的互相關系作用力主要有：氫鍵、疏水鍵、離子鍵、范德華力和二硫鍵等。,.,64,多肽鏈,疏水鍵,氫鍵,二硫鍵,離子鍵,CH2OH,CH2OH,范德華力,維持三級結構的作用力,.,65,蛋白質三級結構的特征,（1）三級結構是具有二級結構的肽鏈盤繞折疊形成的三維球狀結構。（2）分子中的非極性基團集中在分子內部，形成酶分子的骨架，稱為疏水核；而極性基團相對集中于酶分子表面，形成親水區(qū)。（3）酶分子表面往往有一個內陷的凹槽，又稱為裂隙，酶分子的活性中心就在其中。由一個具有三級結構的酶蛋白組成的酶分子稱為單體酶（monomericenzyme）。一般由一條肽鏈組成，也可由多條肽鏈組成。,.,66,.,67,人類他克莫司結合蛋白三級結構,CrystalstructureofHomo.sapiensFKBP12tertiarystructure,人類他克莫司結合蛋白三級結構,.,68,胰凝乳蛋白酶,241個AA3條肽鏈,.,69,5、四級結構（QuaternaryStructure）,由兩條或兩條以上具有三級結構的肽鏈聚合而成的特定構象的蛋白質分子叫蛋白質的四級結構；其中具有獨立三級結構的一條肽鏈叫亞基（subunit)，無生物功能；由幾個亞基聚集而成的蛋白質常常稱為寡聚蛋白。四級結構指寡聚蛋白中亞基的種類、數(shù)目、各亞基的空間排布及其相互作用等。,.,70,寡聚蛋白中亞基數(shù)目相差很大過氧化氫酶4個亞基大腸桿菌天冬氨酸轉氨甲酰酶12個亞基四級結構的穩(wěn)定性主要靠亞基之間的疏水鍵維持,.,71,由2種亞基（、）各2個締合而成，亞基呈球形亞基兩兩相同，分別為1、2、1、2每個亞基都含有一個血紅素輔基,血紅蛋白hemoglobin,.,72,氨基酸序列大不相同，但結構（三級）相似，功能也相似（載氧）結構決定功能。,.,73,.,74,.,75,二、酶RNA的空間結構,1、酶RNA的二級結構指單鏈酶RNA分子的自身回折、鏈內互補堿基配對形成的局部雙螺旋區(qū)及非配對順序形成的突環(huán)之間的空間排布。雙螺旋由RNA中互補堿基配對而成，至少含46個對堿基，占堿基數(shù)量的40%-70%。互補堿基對通常是G-C，A-U，G-U,.,76,突環(huán)：由不互補配對的堿基組成發(fā)夾環(huán)（hairpinloop）膨脹環(huán)（expansionloop）內環(huán)（internalloop）多分枝環(huán)（multibranchingloop）,hairpinloop,expansionloop,internalloop,multibranchingloop,.,77,H：hairpinloopI：internalloopB：bulgeloop(expansionloop)M:multibranchingloop,.,78,(1)錘頭結構（hammerheadstructure）,11個保守堿基3個雙螺旋區(qū),Cleavagesite,.,79,(2)發(fā)卡結構（hairpinstructure）,50個左右核苷酸4個雙螺旋5個突環(huán)兩個結構域（螺旋-突環(huán)-螺旋）,.,80,(3)多分枝環(huán)結構(multibranchingloop),ThesequenceandsecondarystructureoftheVS(Varkudsatellite)ribozyme.,底物,剪切位點,A730loop,animportantcomponentoftheactivesiteoftheribozyme.,活性中心,.,81,.,82,2、酶RNA的三級結構,酶RNA的三級結構是在二級結構的基礎上，進一步盤繞折疊而成的三維結構。分成多個結構域，每個結構域又由多個螺旋和突環(huán)盤繞折疊而成。,.,83,StructureoftheTetrahymenaRibozyme.(A)Thesecondarystructureofthecrystallizedribozyme.(B)RIBBONSdiagramofthecrystalstructureoftheribozymeBmolecule,.,84,TetrahymenaGroupIintronsecondaryandtertiarystructures,.,85,第四節(jié)酶的活性中心,酶分子具有催化活性的特殊部位稱為酶的活性部位（activesite)或活性中心（activecenter）。,.,86,一、酶活性中心上的氨基酸殘基,酶的分子中存在著許多功能基團，例如，-NH2、-COOH、-SH、-OH等，但并不是這些基團都與酶活性有關。構成酶活性中心的只有少數(shù)幾個氨基酸殘基。,.,87,.,88,.,89,胰凝乳蛋白酶chymotrypsin,.,90,Asp102,His57,Ser195,Asp194,Gly193,Ile16,+NH3,CatalyticTriad,TheNH+3ofIle-16andtheCOO-ofAsp-194formanionpairwhenchymotrypsinogenisactivated.,.,91,2酶分子中的氨基酸殘基,(1)接觸殘基(contactresidues):這類殘基直接與底物接觸，參與底物的化學轉變。這類殘基的側鏈中起與底物結合作用的基團稱為結合基團；起催化作用的基團稱為催化基團。有時結合基團也參與催化作用，很難絕對區(qū)分。(2)輔助殘基(auxiliaryresidues)：這類殘基不與底物直接接觸，而是在使酶與底物結合及協(xié)助接觸殘基發(fā)揮作用方面起一定作用。接觸殘基和輔助殘基構成酶的活性中心。(3)結構殘基(structureresidues)：這類殘基在維持酶分子的完整空間結構并使之形成特定的空間構象方面起重要作用。與酶活性密切相關，但不在酶活性中心范圍之內，屬于酶活性中心外的必需范圍。接觸殘基、輔助殘基和結構殘基三類殘基統(tǒng)稱為酶的必需基團，若被其它氨基酸殘基取代，則往往造成酶失活。(4)非貢獻殘基(non-contributingresidues):除了上述三類酶的必需基團外，酶分子上其余的氨基酸殘基都可稱為非貢獻殘基或非必需基團。,.,92,酶分子中的氨基酸殘基（1960年，Koshland）,（1）接觸殘基（contactingresidues）直接與底物相接觸，并參與底物的化學轉變。與底物結合的基團稱為結合基團；起催化作用的基團稱為催化基團。（2）輔助殘基（auxiliaryresidues）不直接參與催化作用，在酶與底物結合的過程中起作用。接觸殘基和輔助殘基構成酶的活性中心。（3）結構殘基（structureresidues）又稱為貢獻殘基（contributingresidues），維持酶蛋白分子的完整極其規(guī)則的空間構象（4）非貢獻殘基（non-contributingresidues），對酶的結構和功能無明顯作用,.,93,底物,活性中心以外的必需基團,結合基團,催化基團,活性中心,.,94,.,95,R酶活性中心,酶RNA的某一段核苷酸序列。L-19IVS活性中心由第2227位的六個核苷酸序列：5GGAGGG3只要將其中的堿基置換一個，就可以使其底物專一性發(fā)生改變,.,96,I類內含子的酶學特性四膜蟲L-19IVS的體外催化活性,Interveningsequencelacking19nucleotide缺少19個核苷酸的居間序列1986年女科學家Grabowski,P.J.發(fā)現(xiàn)L-19可以催化5聚胞苷（5XpC）聚合為多聚胞苷。,.,97,L-19IVS催化RNA寡核苷酸鏈延長,.,98,.,99,二、接觸殘基附近肽鏈的一級結構,有些酶的催化機制非常相似，在分類中列為一小類。相同的接觸殘基催化基團在接觸殘基附近的肽鏈一級結構也幾乎完全相同酶活性中心在種系進化上存在嚴格的保守性,.,100,一些絲氨酸蛋白酶活性中心絲氨酸附近的肽鏈組成,.,101,一些半胱氨酸蛋白酶活性中心的半胱氨酸殘基附近的氨基酸順序,.,102,第五節(jié)酶的結構與催化特性的關系,一、酶的一級結構與催化特性的關系酶的一級結構是酶的基本化學結構，決定了酶的空間結構、生物學活性酶的一級結構的改變包括酶分子主鏈的斷裂和連接，酶分子組成氨基酸的改變，都可能對酶的催化特性產生影響,.,103,1、主鏈斷裂的位置遠離活性中心，切去部分非貢獻殘基，一級結構的變化對酶活性幾乎沒有影響牛核糖核酸酶RNase（124aa）C末端3aaM1RNA（377nt）3end122nt,.,104,2、主鏈斷裂的位置靠近活性中心，切去部分接觸殘基、輔助殘基，引起酶活性喪失牛核糖核酸酶RNase（124aa）C末端4aaM1RNA（377nt）5end70nt,.,105,3、對酶的前體或酶原，酶主鏈特定位置斷裂，顯示出酶的催化活性(1)胰蛋白酶原（無活性）胰蛋白酶（有活性）,.,106,(2)胰凝乳蛋白酶原,.,107,2.胰凝乳蛋白酶原的激活p.50,245aa5對二硫鍵斷裂：Arg15與Ile16、Leu13與Ser14、Tyr146與Thr147、Asn148與Ala149切除2個二肽：Ser14-Arg15、Thr147-Asp148,.,108,(2)胰凝乳蛋白酶原活化,245aa5對二硫鍵斷裂：Arg15與Ile16、Leu13與Ser14、Tyr146與Thr147、Asn148與Ala149切除2個二肽：Ser14-Arg15、Thr147-Asp148,113164258122136146149168182191201221245,11315,164258122136146149168182191201221245,113,164258122136146,149168182191201221245,Trypsin,-Chymotrypsin(active),-Chymotrypsinrypsin,Twodipeptides,Achain,Bchain,Cchain,-Chymotrypsinrypsin,Chymotrypsinogen(inactive),His57,Asp102,Ser195,.,109,5,5,5,3,3,3,Upstreamexon,Downstreamexon,Intron,G,OH,G,OH,+,G,414,399,394,5,3,5,3,L19RNA,Splicedexons,四膜蟲RNA的自我剪接,(3)L-19IVS形成,多功能酶：水解RNA、轉核苷酸作用、轉磷酸基作用,.,110,二、酶的二、三級結構與催化功能的關系,完整的二、三級結構對維持酶的活性中心的空間構象至關重要。酶的二、三級結構破壞將使酶的催化活性喪失。,例如:牛胰核糖核酸酶RNaseA124aa,活性中心：His12和His119切開N端120aa(S)肽C端104aa(S)蛋白無活性混合1：1，恢復活性,.,111,.,112,核糖核酸酶變性與復性作用,Nativeribonuclease,Denativereducedribonuclease,Nativeribonuclease,變性,復性,.,113,三、酶的四級結構與催化功能的關系1有些四級結構酶僅僅具有催化作用（沒有調節(jié)部位）多催化部位寡聚酶多酶復合體2別構酶：具有催化和調節(jié)兩種作用。別構酶四級結構受到破壞時，有些催化亞基仍然可以保持酶的催化活性，但失去其調節(jié)功能，因為分開的調節(jié)亞基不再具有調節(jié)功能，只有四級結構完整時，調節(jié)亞基才能發(fā)揮調節(jié)作用。,.,114,三、酶的四級結構與催化功能的關系,酶的四級結構是由多個亞基聯(lián)結而成的催化作用調節(jié)作用四級結構破壞，功能和特性發(fā)生變化,.,115