《辣椒種子甲基磺酸乙酯化學(xué)誘變技術(shù)規(guī)程》標準文本（征求意見稿）

ICSXX.XXX.XX中國標準文獻分類號:XXXDB52貴州省地方標準DB 52/ T XXXXX2019辣椒種子甲基磺酸乙酯化學(xué)誘變技術(shù)規(guī)程Technical regulation for chemical mutagenesis by Ethyl Methane Sulfonate on pepper seed XXXX - XX - XX發(fā)布XXXX - XX - XX實施貴州省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DBXX/ XXXXXXXXX目 次目 次1前言11 范圍32 規(guī)范性引用文件33 術(shù)語與定義34儀器設(shè)備45 EMS處理液的配制46 EMS誘變處理辣椒種子47 EMS誘變處理后辣椒種子半致死劑量的確定48 EMS誘變后代的種植、篩選與鑒定59 EMS誘變后代的田間管理5前言本標準按照GB/T 1.1-2009標準化工作導(dǎo)則 第1部分:標準的結(jié)構(gòu)和編寫給出的規(guī)則起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本標準由貴州省辣椒研究所提出。 本標準由貴州省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。本標準起草單位：貴州省辣椒研究所。本標準主要起草人：黃冬福、何建文、付文婷、詹永發(fā)、范高領(lǐng)、梁鄲娜、嚴希、吳迪。辣椒種子甲基磺酸乙酯化學(xué)誘變技術(shù)規(guī)程1 范圍本規(guī)程規(guī)定了甲基磺酸乙酯（EMS）化學(xué)誘變的儀器設(shè)備、EMS處理液的配制、EMS誘變處理辣椒種子、EMS誘變處理后辣椒種子半致死劑量的確定、EMS誘變后代的種植、篩選與鑒定。本規(guī)程適用于采用EMS對辣椒種子進行化學(xué)誘變創(chuàng)新辣椒材料。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/Z 26583-2011辣椒生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范DB52/T 957-2014貴州辣椒栽培技術(shù)規(guī)程DB52/T 958-2014貴州辣椒施肥技術(shù)規(guī)程DB52/T 962-2014辣椒漂浮育苗技術(shù)規(guī)程DB52/T 971-2014辣椒主要病害綜合防治技術(shù)規(guī)程DB52/T 972-2014辣椒主要蟲害綜合防治技術(shù)規(guī)程DB52/T 973-2014辣椒疫病監(jiān)測與無害化治理技術(shù)規(guī)程DB52/T 974-2014辣椒煙青蟲監(jiān)測與無害化治理技術(shù)規(guī)程3 術(shù)語與定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1 EMS化學(xué)誘變用化學(xué)誘變劑EMS處理植物材料，以誘發(fā)遺傳物質(zhì)的突變，從而引起植株形態(tài)特征的變異。3.2半致死劑量植物材料經(jīng)過誘變處理后，相對發(fā)芽率接近50%的處理劑量。3.3野生型野生型和突變是相對的，非人工誘變的個體作為野生型。3.4 M1代誘變后第一代。3.5 M2代誘變后第二代。3.6 M3代誘變后第三代。3.7 M4代誘變后第四代。3.8突變體庫由于基因突變而表現(xiàn)出突變性狀的個體，突變體庫則由各類突變體組成。4儀器設(shè)備分析天平、純水儀、磁力攪拌器、冰箱、移液槍、通風(fēng)櫥、恒溫搖床、人工氣候箱、單反相機。5 EMS處理液的配制5.1磷酸緩沖液的配制稱取Na2HPO4.2H2O （分析純）35.61g，用蒸餾水溶解至1000mL，配成濃度為0.2mol/L的Na2HPO4母液。稱取NaH2PO4.H2O （分析純）27.6g，用蒸餾水溶解至1000mL，配成濃度為0.2mol/L的NaH2PO4母液。將0.2mol/L的Na2HPO4母液61ml與0.2mol/L的NaH2PO4母液39ml混合稀釋至200mL，即成pH7.0,濃度為0.1mol/L的磷酸緩沖液。5.2 EMS處理液的配制將0，6，7，8，9，10，11，12mL的EMS加至規(guī)程6.1所訴的磷酸緩沖液中，用蒸餾水定容至1L，配成體積比濃度分別為0，0.6%，0.7%，0.8%，0.9%，1.0%，1.1%，1.2%的EMS處理液。6 EMS誘變處理辣椒種子6.1 辣椒種子的溫湯浸種選取飽滿的辣椒干種子，每100粒為1份，分別裝入15*10cm的尼龍網(wǎng)袋，放入55溫水中不斷攪拌，浸種15min。6.2 EMS誘變處理辣椒種子用濾紙吸干溫湯浸種后每份種子的表面水分，將其放入250mL的錐形瓶中，向錐形瓶中注入規(guī)程6.2所訴的EMS處理液，保持1粒種子1mL的EMS處理液，分別放置在26，110rpm的搖床內(nèi)恒溫振蕩處理8h，10h，12h，14h，16h，每個處理100粒種子，3次重復(fù)，然后取出種子，用純水漂洗5遍。7 EMS誘變處理后辣椒種子半致死劑量的確定將處理后的辣椒種子置于鋪有潤濕的2層濾紙的培養(yǎng)皿中，置于人工氣候箱內(nèi)26暗培養(yǎng)，定期向培養(yǎng)皿中補加水，保持濾紙濕潤，以胚根的長度不短于種子長度的一半為發(fā)芽標準，每天記載發(fā)芽種子數(shù)，并計算14天時的發(fā)芽率和相對發(fā)芽率，將相對發(fā)芽率接近50%的處理劑量確定為最適宜的誘變劑量，即半致死劑量。發(fā)芽率()(全部正常發(fā)芽數(shù)/供試種子數(shù))100；相對發(fā)芽率()=（處理的發(fā)芽率/對照的發(fā)芽率）100；8 EMS誘變后代的種植、篩選與鑒定8.1 M1代的種植用確定的半致死劑量，對辣椒種子進行EMS誘變處理；誘變處理后的種子播于1016孔含育苗基質(zhì)的漂浮盤中進行漂浮育苗；待辣椒苗長到適齡大小按每畝2000-2500株進行移栽；辣椒開花前覆蓋40目防蟲網(wǎng)；植株生長期間以野生型為對照對M1代出現(xiàn)的突變植株表型進行觀察、記錄、拍照，待M1代植株果實紅熟后按單株統(tǒng)一編號，進行種子采收和干燥保存。8.2 M2代的篩選將收獲的M1代種子按株系播種定植，每個株系定植12株，剩余的種子入庫保存?zhèn)溆?；M2代進行播種育苗移栽；在植株生長的各個時期以野生型為對照，篩選出性狀發(fā)生變異的單株，掛牌標記，單株自交留種，按單株收種并編號。8.3 M3代的篩選與鑒定將收獲的M2代種子按株系播種定植，每個株系定植12株，剩余的種子入庫保存?zhèn)溆?；M3代進行播種育苗移栽；在植株生長的各個時期根據(jù)M2代變異株的特點鑒定穩(wěn)定遺傳的M3代植株，對能穩(wěn)定遺傳的M3代植株掛牌標記，單株自交留種，按單株收種并編號。8.4 M4代的鑒定將收獲的M3代種子按株系播種定植，每個株系定植12株，剩余的種子入庫保存?zhèn)溆?；M4代進行播種育苗移栽；在植株生長的各個時期根據(jù)M2、M3代變異株的特點鑒定穩(wěn)定遺傳的M4代株系，對能穩(wěn)定遺傳的M4代株系掛牌標記，株系內(nèi)混合收種并編號。所有能穩(wěn)定遺傳的M4代株系構(gòu)成突變體庫。9 EMS誘變后代的田間管理9.1 田間管理 應(yīng)符合GB/Z 26583、