微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(新課)ppt課件.ppt

課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 一 培養(yǎng)基作用 種類二 無(wú)菌技術(shù)三 制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基四 純化大腸桿菌 主要內(nèi)容 一 培養(yǎng)基 人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求 配置出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)稱培養(yǎng)基 一般的培養(yǎng)基均需要碳源 氮源 無(wú)機(jī)鹽和水等 培養(yǎng)基的基本成分 液體培養(yǎng)基 一般用錐形瓶盛裝 固體培養(yǎng)基 一般用試管或培養(yǎng)皿盛裝 在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上再添加瓊脂 培養(yǎng)基的種類 1 按物理狀態(tài)分 2 按功能分 選擇培養(yǎng)基 加入某種化學(xué)物質(zhì) 從眾多微生物中分離出所需微生物 鑒別培養(yǎng)基 加入某種試劑 鑒別不同種類的微生物 加入青霉素的培養(yǎng)基 不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基 不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基 幾種選擇培養(yǎng)基舉例 分離酵母菌 霉菌等真菌 分離固氮菌 分離自養(yǎng)型微生物 唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基 分解纖維素的細(xì)菌 二 無(wú)菌技術(shù) 無(wú)菌技術(shù)泛指在培養(yǎng)微生物的操作中 所有防止雜菌污染的方法技術(shù) 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵 無(wú)菌技術(shù)就是防止雜菌污染的操作技術(shù) 消毒 1 無(wú)菌技術(shù)的種類 滅菌 使用較為溫和的方法 酒精 紫外線 來(lái)殺死部分對(duì)人體有害的微生物 對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間 操作者的衣著和手進(jìn)行清潔消毒 將培養(yǎng)皿 接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌 接種的過(guò)程要在酒精燈火焰附近進(jìn)行 避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸 使用較為強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外的所有微生物 包括芽孢和孢子 1 灼燒滅菌 接種用具和接種過(guò)程中的試管口或瓶口放在酒精燈火焰的充分燃燒層中進(jìn)行灼燒滅菌 2 常用的消毒與滅菌的方法 2 干熱滅菌 將玻璃器皿 金屬用具等能耐高溫并需要保持干燥的物品放到干熱滅菌箱內(nèi) 在160 170OC中加熱1 2h即可 3 高壓蒸汽滅菌 將需滅菌的物品放到盛有水的高壓滅菌鍋內(nèi)煮沸 待冷空氣排盡后 密閉繼續(xù)加熱至鍋內(nèi)壓力到100kPa 溫度到121OC后 維持15 30min即可 一 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 1 計(jì)算 2 稱量準(zhǔn)確稱取各種成分 注意事項(xiàng) 牛肉膏要放在稱量紙上稱量 牛肉膏 蛋白胨都易吸潮 稱取時(shí)動(dòng)作要迅速 稱后及時(shí)蓋上瓶蓋 三 實(shí)驗(yàn)操作 3 溶化 先將牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯 加少量水 加熱至牛肉膏溶化并與稱量紙分離后 用玻璃棒取出稱量紙 加入蛋白胨和氯化鈉 用玻璃棒攪拌使之溶解 再加入瓊脂 攪拌 待溶解后 加自來(lái)水定溶至100mL 4 滅菌 將配制好的培養(yǎng)基放到錐形瓶中 瓶口加棉塞 包上牛皮紙 連同培養(yǎng)皿 3 5套 用幾層報(bào)紙包好 一起放到高壓鍋內(nèi)滅菌 5 倒平板 待培養(yǎng)基冷卻到50OC左右時(shí)倒平板 倒平板操作的討論 1 培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到50OC時(shí)倒平板 用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度 用手觸摸錐形瓶 溫度下降到剛剛不燙手時(shí)即可開始倒平板 2 為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰 通過(guò)灼燒滅菌 防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基 3 平板冷凝后 為什么要將平板倒置 平板冷凝后 皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠 凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高 將平板倒置 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā) 又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基 造成污染 4 在倒平板的過(guò)程中 如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位 這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎 為什么 空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生 因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物 二 純化大腸桿菌 微生物接種方法常見(jiàn)的有平板劃線法和稀釋涂布平板法 1 平板劃線法通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作 將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面 在數(shù)次劃線后可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體稱菌落 平板劃線法獲取的微生物經(jīng)恒溫培養(yǎng)后的生長(zhǎng)情況 平板劃線法獲取的微生物經(jīng)恒溫培養(yǎng)后的生長(zhǎng)情況 1 為什么在操作的第一步以及劃線之前都要灼燒接種環(huán) 在劃線操作結(jié)束時(shí) 仍然需要灼燒接種環(huán) 第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后 接種環(huán)上殘留的菌種 使下一次劃線時(shí) 接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端 從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加 使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少 以便得到菌落 劃線結(jié)束后仍然要灼燒接種環(huán) 能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種 避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者 平板劃線法的討論 2 在灼燒接種環(huán)之后 為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線 以免接種環(huán)溫度太高 殺死菌種 3 在作第二次以及其后的劃線操作時(shí) 為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線 劃線后 線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少 每次從上一次劃線的末端開始 能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少 最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落 2 稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋 然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng) 在稀釋度足夠高的菌液里 聚集在一起的微生物將分散成單個(gè)細(xì)胞 從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落 稀釋涂布平板法操作過(guò)程分兩個(gè)步驟 即系列稀釋操作和涂布平板操作 系列稀釋操作 101 102 103 104 105 106 1 將分別盛有9mL水的試管滅菌并編號(hào) 2 用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液 注入第二支試管中 輕壓橡皮頭 吹吸三次使之充分混勻 3 從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液 注入第三支試管中 重復(fù)步驟2 直至到第六支試管 涂布平板操作 1 將涂布器浸在盛有70 的酒精的燒杯中 2 取少量菌液 不超0 1mL 滴加到培養(yǎng)基表面 3 將沾有酒精的涂布器在火焰上引燃 火熄后冷卻8 10s 4 用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面 稀釋涂布平板法獲取的菌落 涂布平板操作討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行 結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求 想一想 第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作 應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證 無(wú)菌 例如 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適 吸管頭不要接觸任何其他物體 吸管要在酒精燈火焰周圍等等 將接種后和未接種 作為對(duì)照組 的培養(yǎng)基均放到370C的恒溫箱中 培養(yǎng)12 24h后進(jìn)行觀察并記錄結(jié)果 1 未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng) 如果有菌落生長(zhǎng) 說(shuō)明了什么 未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 2d后無(wú)菌落生長(zhǎng) 說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的 否則需要重新制備 2 在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上 能否觀察到獨(dú)立的菌落 它們的大小 形狀 顏色相似嗎 如果接種成功的話 在培養(yǎng)基的表面可觀察到大小 形狀 顏色相似的菌落 四 結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 3 培養(yǎng)12h和24h后 觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同嗎 如果不同 請(qǐng)分析產(chǎn)生差異的原因 培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同 隨著時(shí)間的延長(zhǎng) 菌落的不斷生長(zhǎng) 使菌落不斷增大 4 如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落 請(qǐng)分析其可能的原因 無(wú)菌操作未達(dá)到要求 可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底 可能是接種時(shí)發(fā)生了污染 也可能是在培養(yǎng)的過(guò)程中受到了污染