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此文檔收集于網絡,如有侵權,請聯(lián)系網站刪除天馬行空官方博客:/tmxk_docin ;QQ:1318241189;QQ群:175569632室內檢驗員專業(yè)技術知識之發(fā)芽試驗第十三章 發(fā)芽試驗第一節(jié) 概述一、發(fā)芽試驗的目的和意義發(fā)芽試驗的目的是測定種子批的最大發(fā)芽潛力,據此可比較不同種子批的質量,也可估測田間播種價值。二、有關術語1、發(fā)芽(germination)在實驗室內幼苗出現和生長達到一定階段,幼苗的主要構造表明在田間的適宜條件下能否進一步生長成為正常的植株。2、發(fā)芽率(Percentage germination)在規(guī)定的條件和時間內(表4-1)長成的正常幼苗數占供檢種子數的百分率。3、正常幼苗(normal seedling)在良好土壤及適宜水分、溫度和光照條件下,具有繼續(xù)生長發(fā)育成為正常植株的幼苗。4、不正常幼苗(abnormal seedling)生長在良好土壤及適宜水分、溫度和光照條件下,不能繼續(xù)生長發(fā)育成為正常植株的幼苗。6、未發(fā)芽的種子(ungerminated seeds)在表4-1規(guī)定的條件下,試驗末期仍不能發(fā)芽的種子,包括硬實、新鮮不發(fā)芽種子、死種子(通常變軟、變色、發(fā)霉,并沒有幼苗生長的跡象)和其他類型(如空的、無胚或蟲蛀的種子)。7、硬實種子(hard seed)指那些種皮不能滲水的種子。如棉花種子,豆科的苜蓿、紫云英種子等。8、新鮮不發(fā)芽種子(fresh ungerminated seeds)由生理休眠所引起,試驗期間保持清潔和一定硬度,有生長成為正常幼苗潛力的種子。17、幼苗的主要構造(the essential seedling structures)因種而異,由根系、幼苗中軸(上胚軸、下胚軸或中胚軸)、頂芽、子葉和芽鞘等構造組成。38、感染(infection)病原菌侵入活體(如幼苗主要構造)并蔓延,引起病癥和腐爛。包括初生感染(primary infection)(種子本身攜帶病原菌)和次生感染(secondary infection)(其他種子或幼苗蔓延而被感染)39、50%規(guī)則(50% rule)如果整個子葉組織或初生葉有一半或一半以上的面積具有功能,則這種幼苗可列為正常幼苗;如果一半以上的組織不具備功能,如缺失、壞死、變色或腐爛,則為不正常幼苗。當從子葉著生點到下胚軸有損傷和腐爛的跡象時,這時不能采用50%規(guī)則。當初生葉形狀正常,只是葉片面積較小時,則不能應用50%規(guī)則。第二節(jié) 發(fā)芽設備一、發(fā)芽箱和發(fā)芽室發(fā)芽箱:是提供種子發(fā)芽所需的溫度、濕度或水分、光照等條件的設備。發(fā)芽箱可分為兩類:一類是“干”型,只控制溫度不控制濕度,其中又可分為恒溫和變溫兩種;另一類是“濕”型,既控制溫度又控制濕度。 我國目前常用的發(fā)芽箱多數屬于“干”型,如光照變溫發(fā)芽箱。它們有一個保溫良好的箱體,箱的上下部分別設有加熱系統(tǒng)和制冷系統(tǒng),可根據發(fā)芽技術要求升溫、降溫或變溫。箱體后部裝有鼓風機,箱內中間配有數層發(fā)芽架,箱體的內壁裝有日光燈。其特點是可調節(jié)和控制溫度和光照條件,是一種功能較為完備的發(fā)芽箱。在選用發(fā)芽箱時,應考慮以下因素:控溫可靠、準確、穩(wěn)定,箱內上、下各部位溫度均勻一致;致冷致熱能力強,變溫轉換要能在1 h內完成;光照強度至少達到7501 250 lx(勒克司);裝配有風扇,通氣良好;操作簡便等。發(fā)芽室: 可以認為是一種改進的大型發(fā)芽箱,其構造原理與發(fā)芽箱相似,只不過是容量擴大,在其四周置有發(fā)芽架。發(fā)芽室跟發(fā)芽箱一樣,也有“干型”和“濕型”,干型發(fā)芽室放置的培養(yǎng)皿需加蓋保濕。二、數種設備為使合理置床和提高工作效率,可使用數種設備。目前使用的數種設備主要有活動數種板和真空數種器等。1活動數種板 數種板由固定下板和活動上板組成。其板面大小剛好與所數種的發(fā)芽容器相適應。上板和下板均開有與欲數種子大小和形狀相適應的50或25個孔。固定下板有糟,使活動上板定位。數種板適用于大粒種子,如玉米、大豆、菜豆和脫絨棉子等種子的數種和置床。操作時,數種板放在發(fā)芽床上,把種子散在板上,并將板稍微傾斜,以除去多余的種子。然后進行核對,當所有孔裝滿了種子并每孔只有一粒種子時,移動上板,使上板孔與下板班孔對齊,種子就落在發(fā)芽床的適當位置。 2真空數種器通常由數種頭、氣流閥門、調壓閥、真空泵和連接皮管等部分組成。數種頭有圓形、方形和長方形,其數種頭面積大小剛好與所用的培養(yǎng)皿或發(fā)芽盒的形狀和大小相適應。其面板設有100、或50個數種孔,孔徑大小也與種子類型相適應。真空數種器主要適用于小、中粒種子,如水稻、小麥種子的數種和置床。操作時,在未產生真空前,將種子均勻撒在數種頭上,然后接通真空泵,倒去多余種子,并進行核對,使全部孔都放滿種子,并使每個孔中只有一粒種子。然后將數種頭倒轉放在發(fā)芽床上。應避免將數種頭 直接 嵌入種子,防止有選擇選取重量較輕的種子。必須注意的是,使用數種設備應 確保 置床的種子是隨機選取的。三、發(fā)芽器皿 根據GB/T 3543.41995農作物種子檢驗規(guī)程發(fā)芽試驗的要求,發(fā)芽試驗種子置床培養(yǎng)至幼苗主要構造能清楚鑒定的階段,以便鑒定正常幼苗和不正常幼苗,因此,發(fā)芽器皿(如培養(yǎng)皿)要求:透明、保濕、無毒,具有一定的種子發(fā)芽和發(fā)育的空間,確保一定的氧氣供應,使用前要清洗和消毒。第三節(jié) 發(fā)芽介質與發(fā)芽床 發(fā)芽床是供發(fā)芽測定的容器,由供給種子發(fā)芽水分和支撐幼苗生長的介質和盛放介質的發(fā)芽器皿構成。 種子檢驗規(guī)程規(guī)定的發(fā)芽床主要有紙床、砂床以及土壤發(fā)芽床等種類。 各種發(fā)芽床都應具備保水、通氣性好,無毒質,無病菌和具一定強度的基本要求。一、發(fā)芽介質及其要求1紙 采用紙作為發(fā)芽介質是種子發(fā)芽試驗中應用最多的一類發(fā)芽床。供作發(fā)芽床用的紙有專用發(fā)芽紙、濾紙等。 一般來說,發(fā)芽紙應滿足以下要求:持水力強。吸水良好的紙,不但吸水要快(可將紙條下端浸入水中,2 min內水上升30 或以上的紙為好),而且持水力也要強,使發(fā)芽試驗期間具有足夠的保水能力,以保證對種子發(fā)芽不斷供應水分。無毒質。紙張必須無酸堿、染料、油墨及其他對發(fā)芽有害的化學物質。紙張的pH值應在6.07.5范圍內。無病菌。因為紙上帶有真菌或細菌會導致病菌滋長而影響種子發(fā)芽,所以所用紙張必須清潔干凈,無病菌污染。紙質韌性好。紙張應具有多孔性和通氣性,并具有一定強度,以免吸水時糊化和破碎,并在操作時不致撕破和發(fā)芽時種子幼根不致穿入紙內,便于幼苗的正確鑒定。2砂 采用砂作為發(fā)芽介質是種子發(fā)芽試驗中較為常用的一類發(fā)芽床。 一般來說,用作發(fā)芽試驗的砂粒應選用無任何化學藥物污染的細砂,并在使用前作如下處理:洗滌揀去較大的石子和雜物后用清水洗滌,以除去污物和有毒物質;消毒將洗凈的濕砂放在鐵盤內薄攤,在130170 高溫下烘干約2 h,以殺死病菌和砂內的其他種子;過篩取孔徑為0.8 和0.05 的圓孔篩兩個,將烘干的砂子過篩,取出兩層篩之間的砂子,即直徑為0.050.8 的砂粒作為發(fā)芽介質。這樣大小的砂粒既具有足夠的持水力,又能保持一定的孔隙,以利通氣;加水拌勻,調配適宜含水量。 一般加水量為其飽和含水量的60%80%水分。通常也可采用簡便方法調配,即100 g干砂中加入1826 mL的水,充分拌勻后,達到手捏成團,放手即散開,不能出現手指一壓就出現水層。 應注意,須將所用砂子加水拌勻后再分放入培養(yǎng)盒,不能將干砂先倒入培養(yǎng)盒,然后加水拌勻。這種拌砂法往往會造成砂中水分多、孔隙少,氧氣不夠,影響正常發(fā)芽。 砂床的pH值應在6.07.5范圍內。一般情況下,砂可重復使用。在重復使用前,應洗凈,重新消毒。但化學藥品處理過的種子發(fā)芽所用的砂子,不再重復使用。3土壤 供作發(fā)芽試驗用的土壤其土質必須疏松良好、不結塊(如土質粘重應加入適量的砂),無大顆粒。土壤中應基本上不含混入的種子、細菌、真菌、線蟲或有毒物質。使用前,必須經過高溫消毒,一般不重復使用。 濕潤發(fā)芽床的水質應純凈,不含有機雜質和無機雜質,無毒無害,pH值在6.07.0范圍內。二、發(fā)芽床的種類和用法1紙床(1)紙上(簡稱TP) 紙上是指種子放在一層或多層紙上發(fā)芽,可采用下列三種方法:在培養(yǎng)皿里墊上兩層發(fā)芽紙,充分吸濕,瀝去多余水分,種子直接置放在濕潤的發(fā)芽紙上,用培養(yǎng)皿蓋蓋好或用塑料袋罩好,放在發(fā)芽箱或發(fā)芽室內進行發(fā)芽試驗;數種置床于濕潤的發(fā)芽紙上,并將其直接放在“濕型”發(fā)芽箱的盤上,發(fā)芽箱內的相對濕度盡可能接近飽和;放在雅可勃遜發(fā)芽器上,這種發(fā)芽器配有放置發(fā)芽紙的發(fā)芽盤(2)紙間(簡稱BP) 紙間是指種子放在兩層紙中間發(fā)芽,可采用下列兩種方法:在培養(yǎng)皿里把種子均勻置放在濕潤的發(fā)芽紙上,另外用一層發(fā)芽紙松松地蓋在種子上;采用紙卷,把種子均勻置放在濕潤的發(fā)芽紙上,再用一張同樣大小的發(fā)芽紙覆蓋在種子上,底部褶起2厘米,然后卷成紙卷,兩端用橡皮筋扎住,豎放在培養(yǎng)皿或塑料筒里,套上透明塑料袋保濕,放在規(guī)定條件下發(fā)芽。有些種子可用短紙卷,直接放在塑料袋內包好放在發(fā)芽箱內發(fā)芽。(3)褶裥紙(簡稱PP)把種子放在類似手風琴的具有50個褶裥的紙條內,通常每個褶裥放兩粒種子,或者具有10個褶裥,每褶裥放5粒種子。將褶裥紙條放在盒內或直接放在“濕型”發(fā)芽箱內,并可用一張紙條蓋在褶裥紙上面。規(guī)程規(guī)定使用TP或BP進行發(fā)芽的,可用這種方法代替。2砂床砂床使用方法有兩種:砂上(簡稱TS),適用于小、中粒種子。將拌好的濕砂裝入培養(yǎng)盒中至23 cm厚,再將種子壓入砂表層,即砂上發(fā)芽;砂中(簡稱S),適用于中、大粒種子。將拌好的濕砂裝入培養(yǎng)盒中至24 cm厚,播上種子,覆蓋12 cm厚度(厚度取決于種子的大小)的松散濕砂,以防翹根。 當由于紙床污染,對已有病菌的種子樣品鑒定困難時,可用砂床替代紙床。有時為了研究目的和證實有疑問的幼苗鑒定,也可采用砂床。3土壤床 除了規(guī)程規(guī)定使用土壤床外,當紙床或砂床上的幼苗出現中毒癥狀時或對幼苗鑒定發(fā)生懷疑時,或為了比較或研究目的,可采用土壤床。 選用符合要求的土壤,經高溫消毒后,加水調配適宜水分,然后再播種,并覆上疏松土層。第四節(jié) 發(fā)芽條件及其控制種子發(fā)芽需要有水分、溫度、氧氣和光照等條件。不同作物種由于起源和進化的生態(tài)環(huán)境不同,其發(fā)芽所要求的條件也有所差異。農業(yè)生產上選擇適當的播種期,采用各種播種、浸種、催芽的方法,就是為種子萌發(fā)創(chuàng)造良好條件。 一、水分 水分是種子發(fā)芽的關鍵性因素。種子必須吸取足夠的水分才能使內部的酶或植物激素活化,促進貯藏物質的轉化,加強呼吸作用,增加能量供給,促進細胞的生長,從而促進種子的萌發(fā)。 不同作物種的種子對水分的需求有差異。有些種子,如煙草、西瓜、大豆、大麥、棉花、菠菜等種子對水分較敏感,水分一多,則發(fā)芽差,甚至不發(fā)芽。而水稻、玉米等種子對水分不太敏感。 根據發(fā)芽床和種子特性決定發(fā)芽床的加水量:如-紙床,吸足水分后,瀝去多余水即可; -砂床加水為其飽和含水量的60%80%(禾谷類等中小粒種子為60%,豆類等大粒種子為80%); -用土壤作發(fā)芽床,加水至手握土粘成團,手指輕輕一壓就碎為宜。 發(fā)芽期間發(fā)芽床必須始終保持濕潤,并注意保持試驗各重復間的水分和濕度的一致性。二、溫度 農作物種子發(fā)芽應按表13-1規(guī)定的溫度進行。-發(fā)芽箱的溫度在發(fā)芽期間應盡可能一致,溫度變幅不應超過2。-變溫是模擬種子發(fā)芽的自然環(huán)境,一般來說,變溫有利于種子滲入氧氣,促進酶活化,加速發(fā)芽。新收獲的休眠種子對發(fā)芽溫度要求特別嚴格,必須選用表13-1中幾種恒溫中的較低溫度或變溫。如洋蔥種子發(fā)芽溫度有20、15 ,則應選用15 發(fā)芽,又如西瓜種子,規(guī)定溫度有2030 、30 、25 ,則應選用2030 或25 恒溫。陳種子,也以選用其中的變溫或較低恒溫發(fā)芽為好。-當規(guī)定用變溫時,通常應保持低溫16 h及高溫8 h。對非休眠種子,可以在3 h內完成變溫。如果是休眠種子,應在1 h或更短時間內完成急劇變溫或將試驗移至另一個設定低溫的發(fā)芽箱內。表1 農作物種子的發(fā)芽技術規(guī)定三、氧氣 不同作物種的種子對氧氣的需要量和敏感性是有差異的。一般來說,旱生的大粒種子,如大豆、玉米、棉花、花生等種子對氧氣的需求較多;而水生的小、中粒種子則對氧氣的需求較少。 幼苗的不同構造對氧氣的需要量和敏感性也是有差異的。種子發(fā)芽時,胚根伸長對氧氣需求比胚芽伸長更為敏感。如果發(fā)芽床上水分多、氧氣少,則長芽;反之,水少氧多則宜于長根。 發(fā)芽期間應使種子周圍有足夠的空氣,尤其是用紙卷發(fā)芽應注意紙卷需疏松,用砂床和土壤試驗時,覆蓋種子的砂或土壤不要壓緊。 應注意水分和通氣的協(xié)調,防止水分過多在種子周圍形成水膜,阻隔氧氣進入種胚而影響發(fā)芽;防止水分過多或過少,導致幼苗的不均衡生長。四、光照光照因不同作物種而異,按種子發(fā)芽對光反應的不同可分為三類: 需光型種子。發(fā)芽時必須有紅光或白熾光,促使光敏色素轉變?yōu)榛罨?,如茼蒿等。特別是這類新收獲的休眠種子發(fā)芽時,必須給予光照;需暗型種子。這類種子必須在黑暗條件下,其光敏色素才能達到萌發(fā)水平,如黑種草種子;光不敏感型種子。在光照或黑暗條件下均能良好發(fā)芽,這類種子包括大多數大田作物和蔬菜種子。表13-1中大多數種的種子可在光照或黑暗條件下發(fā)芽,但最好采用光照。即便是需暗型種子,也只是發(fā)芽初期必須黑暗,隨著莖葉系統(tǒng)的形成,為其進一步生長發(fā)育提供能量和養(yǎng)分的光合作用也需要光。光照條件下培養(yǎng)發(fā)芽,利于抑制發(fā)芽過程中霉菌生長繁殖,并有利于正常幼苗的鑒定,區(qū)分黃化和白化不正常幼苗。 需光照的光照強度為7501 250 lx,如在變溫條件下發(fā)芽,光照應在8 h高溫時進行。第五節(jié) 發(fā)芽試驗程序一、選用發(fā)芽床 按表13-1規(guī)定,選用其中最適宜的發(fā)芽床。每一作物種通常列出23種發(fā)芽床,如水稻,表13-1中規(guī)定TP、BP和S三種發(fā)芽床。 一般來說,-小、中粒種子可用紙上(TP)發(fā)芽床;-中粒種子可用紙間(紙卷,)(BP)發(fā)芽床;-大粒種子或對水分敏感的小、中粒種子宜用砂床(S)發(fā)芽。-活力較差的種子,也以用砂床的效果為好。 在選好發(fā)芽床后,按不同作物種的種子和發(fā)芽床的特性,調 節(jié)其適當的濕度。二、數種置床1試樣來源和數量 除委托檢驗外,試驗樣品來源必須是凈種子,從充分混合的凈種子中隨機數取,一般數量是400粒。 凈種子可以從凈度分析后的凈種子中隨機數取,也可以從送驗樣品中直接隨機數取。一般小、中粒種子(如油菜、結球白菜、小麥、水稻等)以100粒為一重復,試驗為4次重復;大粒種子(如玉米、大豆、棉花等)以50粒為一副重復,試驗為8個副重復;特大粒的種子(如花生和蠶豆等)可以25粒為一副重復,試驗為16個副重復。復胚種子單位可視為單粒種子進行試驗,不需弄破(分開),但芫荽例外。2置床的要求 種子要均勻分布在發(fā)芽床上,種子之間留有15倍間距,以防發(fā)霉種子的相互感染和保持足夠的生長空間。每粒種子應良好接觸水分,使發(fā)芽條件一致。3貼(放)標簽 在培養(yǎng)皿或其它發(fā)芽容器底盤的內側放上或側面貼上標簽,注明樣品編號、品種名稱、重復序號和置床日期等,然后蓋好容器蓋子或套一薄膜塑料袋。三、在規(guī)定條件下培養(yǎng) 按表13-1規(guī)定的發(fā)芽條件,選擇適宜的溫度。-雖然各種溫度均為有效,但一般來說,新收獲的有休眠種子和陳種子,以選用其中的變溫或較低恒溫發(fā)芽為好。-關于光照條件,對需光型種子如茼蒿種子發(fā)芽時必須光照促進發(fā)芽。除需暗型種子在發(fā)芽初期應放置黑暗條件下培養(yǎng),由于光照利于抑制發(fā)芽過程中霉菌生長繁殖和幼苗子葉、初生葉的光合作用,其他種子發(fā)芽時,只要條件允許,最好在光照下培養(yǎng)。四、檢查管理 種子發(fā)芽期間,應進行適當的檢查管理,以保持適宜的發(fā)芽條件。1、發(fā)芽床應始終保持濕潤,水分不能過多或過少。2、溫度應保持在所需溫度的2范圍內,防止因控溫部件失靈、斷電、電器損壞等意外事故造成溫度失控。如采用變溫發(fā)芽,則應按規(guī)定變換溫度。3、如發(fā)現霉菌滋生,應及時取出洗滌去霉。當發(fā)霉種子超過5%時, 應更換發(fā)芽床,以免霉菌傳開。4、如發(fā)現腐爛死亡種子,則應及時將其除去并記載。5、注意通氣,避免因缺氧而使正常發(fā)芽受影響。五、觀察記載1試驗持續(xù)時間 每個種的試驗持續(xù)時間詳見表13-1。試驗前或試驗間用于破除休眠處理所需時間不作為發(fā)芽試驗時間的一部分。-如果樣品在規(guī)定的試驗時間內只有幾粒種子開始發(fā)芽,則試驗時間可延長7 d,或延長規(guī)定時間的一半。根據試驗情況,可增加計數的次數。-如果在規(guī)定的試驗時間結束前,樣品已達到最高發(fā)芽率,則該試驗可提前結束。2鑒定幼苗和觀察計數 每株幼苗都必須按規(guī)定的標準進行鑒定。鑒定要在主要構造已發(fā)育到一定時期時進行。 根據種的不同,試驗中絕大部分幼苗應達到:子葉從種皮中伸出(如萵苣屬)、初生葉展開(如菜豆屬)、葉片從胚芽鞘中伸出(如小麥屬)。盡管一些種如胡蘿卜屬在試驗末期,并非所有幼苗的子葉都從種皮中伸出,但至少在末次 計數時,可以清楚地看到子葉基部的“頸”。-在初次計數時,應把發(fā)育良好的正常幼苗從發(fā)芽床中揀出,對可疑的或損傷、畸形或不均衡的幼苗,通常到末次 計數。-嚴重腐爛的幼苗或發(fā)霉的死種子應及時從發(fā)芽床中除去,并隨時增加計數。-末次 計數時,按正常幼苗、不正常幼苗、新鮮不發(fā)芽種子、硬實和死種子分類計數和記載。-復胚種子單位作為單粒種子計數,試驗結果用至少產生一個正常幼苗的種子單位的百分率表示。當送驗者提出要求時,也可測定100個種子單位所產生的正常幼苗數,或產生一株、兩株及兩株以上正常幼苗的種子單位數??偟膩碚f,發(fā)芽試驗鑒定時把握以下原則:(1)如果有的幼苗發(fā)育很快,可以在初次計數進行鑒定;(2)如果有的幼苗發(fā)育遲緩,可以在末次計數進行鑒定;(3)如果在末次計數仍有較多的幼苗發(fā)育遲緩,可延長規(guī)定時間的一半,增加計數的次數;(4)如果有的幼苗發(fā)霉或腐爛,則應及時從發(fā)芽床中清除;(5)對有損傷的幼苗,盡可能延長觀察時間,通常到末次計數。六、結果計算和表示 試驗結果以粒數的百分率表示。 計算時,以100粒種子為一重復,如采用50粒或25粒的副重復,則應將相鄰副重復合并成100粒的重復。-當一個試驗的4次重復,其正常幼苗百分率都在最大容許差距范圍內(表13-2),則取其平均數表示發(fā)芽百分率。不正常幼苗、新鮮不發(fā)芽種子、硬實和死種子的百分率按4次重復平均數計算。發(fā)芽試驗結果修約: 在發(fā)芽試驗中,正常幼苗百分率修約至最接近的整數,0.5則進位。計算其余成分百分率的整數,并獲得其總和。如果總和為100,修約程序到此結束。 如果總和不是100,繼續(xù)執(zhí)行下列程序:在不正常幼苗、硬實、新鮮不發(fā)芽種子和死種子中,首先找出其百分率中小數部分最大值者,修約此數至最大整數,并作為最終結果;其次計算其余成分百分率的整數,獲得其總和,如果總和為100,修約程序到此結束,如果不是100,重復此程序;如果小數部分相同,優(yōu)先次序為不正常幼苗、硬實、新鮮不發(fā)芽種子和死種子。實例:在發(fā)芽試驗中,正常幼苗、不正常幼苗、硬實、新鮮不發(fā)芽種子和死種子四個重復的平均百分率分別為97.25%、0.5%、0.25%、0.5%和1.5%,如何填報結果。 首先修約正常幼苗為97,取其他整數,得97+0+0+0+1=98,總和不是100,需繼續(xù)修約。 因不正常幼苗、新鮮不發(fā)芽種子和死種子的小數部分相同時,按優(yōu)先次序為不正常幼苗、新鮮不發(fā)芽種子和死種子進行依次修約。可得最后填報的結果應為97%、1%、0、1%和1%。七、破除休眠和重新試驗1破除休眠 當試驗結束還存在硬實或新鮮不發(fā)芽種子時,可進行處理后(詳見表13-1)重新試驗,如預知或懷疑種子有休眠,這些處理方法也可用于初次試驗。2重新試驗當試驗出現下列情況時,應重新試驗。(1)懷疑種子有休眠(即有較多的新鮮不發(fā)芽種子)時,可采用上述休眠種子處理方法重新試驗,將得到的最佳結果填報,同時注明所用的方法。(2)由于真菌或細菌的蔓延而使試驗結果不一定可靠時,可采用砂床或土壤發(fā)芽床重新試驗。如有必要,應增加種子之間的距離。(3)當正確鑒定幼苗困難時,可采用表13-1中規(guī)定的一種或幾種方法用砂床或土壤發(fā)芽床重新試驗。 (4)當發(fā)現實驗條件、幼苗鑒定或計數有差錯時,應采用同樣方法重新試驗。(5)當100粒種子重復間的差距超過表13-2最大容許差距時,應采用同樣的方法重新試驗。-如果第二次結果與第一次結果相一致,即其差異不超過表13-4中所示的容許差距,則將兩次試驗結果的平均數填報在結果單上。-如果第二次結果與第一次結果不相符合,即其差異超過表13-4所示的容許差距,則采用同樣的方法進行第三次試驗。用第三次結果分別與第一次結果和第二次結果進行比較,填報符合要求的結果平均數。-若第三次試驗仍得不到符合要求的結果,則應考慮是否人員操作(如是否使用數種設備不當,造成試樣誤差太大等)、發(fā)芽設備或其他方面存在重大問題,無法得到滿意結果。八、發(fā)芽試驗容許誤差 容許誤差應符合GB/T 3543.1和GB/T 3543.4的規(guī)定,為了便于理解和掌握,舉例說明如下。例1 某一水稻雜交種發(fā)芽試驗4次重復的發(fā)芽率分別為97%、96%、98%、95%,其發(fā)芽試驗條件為紙上,30 恒溫。4次重復的結果平均值為:(97+96+98+95)/496.5,根據修約至最近似整數的原則,發(fā)芽率修約(0.5進為1計算)為97%。這個結果可靠嗎?就需要去查 GB/T3543.4-1955中表3 同一發(fā)芽試驗四次重復間的最大容許差距。用97查表13-2(或GB/T 3543.41995中表3),查得重復間最大容許差距為7,而重復間的最大值98與最小值95之差為3,在容許差距范圍內,所以本試驗結果是可靠的,發(fā)芽率的填報結果為97%。表3 同一發(fā)芽試驗四次重復間的最大容許差距 (2.5%顯著水平的兩尾測定)用97查GB/T 3543.41995中表3,查得重復間最大容許差距為7,而重復間的最大值98與最小值95之差為3,在容許差距范圍內,所以本試驗結果是可靠的, 發(fā)芽率的填報結果為97%。例2 現測得一發(fā)芽試驗4次重復的發(fā)芽率分別為:76、65、68和57,其發(fā)芽試驗條件為紙上,2030變溫,并經硝酸鉀處理。4次重復的結果平均值為:(76十65十68十57)466.5,根據進入最大值保留整數的修約原則,用67查表13-2(或GB/T 3543.41995中表3),查得容許誤差為18,而重復間的最大差異為:765719,超過了容許誤差18,所以必須進行重新試驗。第二次的發(fā)芽試驗4次重復的發(fā)芽率分別為:70、70、68和72。4次重復的結果平均值為:(70十70十68十72)470,用70查表13-2(GB/T 3543.41995中表3),容許誤差為18,而重復間的最大差異為:72684,未超過容許誤差18。這時就涉及到我們要比較兩次試驗的一致性 。 現在再比較兩次試驗的一致性:(66.5十70)268.25,用68查表13-4(或GB/T 3543.4一1995中表4),其容許誤差為7,而兩次試驗間的差距為7066.53.5,未超過容許誤差。因此,發(fā)芽率的最后填報結果為68。表4 同一或不同實驗室來自相同或不同送驗樣品間發(fā)芽試驗的容許差距(2.5%顯著水平的兩尾測定)現在再比較兩次試驗的一致性:(66.5十70)268.25,用68查GB/T3543.4一1995中表4,其容許誤差為7,而兩次試驗間的差距為7066.53.5,未超過容許誤差。因此,發(fā)芽率的最后填報結果為68。例3 發(fā)芽試驗的第一次結果為87、72、68和85,按上述例1計算超過容許誤差;第二次發(fā)芽試驗為91、84、80和93,按上述例2計算仍超過容許誤差;第三次為93、87、89和96,這樣最后填報符合要求的第二、第三次發(fā)芽試驗結果為89。例4 有一批種子,種子銷售者測定發(fā)芽率為87,而種子消費者測定為80,請問種子銷售者的測定值可以接受嗎? 先計算兩者平均值為84,查GB/T 3543.41995中表5,得容許誤差為7,而兩者試驗差距為7,所以銷售者的測定值可以接受。表5 同一或不同實驗室不同送驗樣品間發(fā)芽試驗的容許差距(5%顯著水平的一尾測定)例5 在例4中,如果第一次測定為80,而第二次測定為88,由于第二次測定好于第一次測定,就不必計算,得出第一次測定值可以接受九、結果報告 填報發(fā)芽結果時,須填報正常幼苗、不正常幼苗、新鮮不發(fā)芽種子、硬實和死種子的百分率。假如其中任何一項結果為零,則將符號“0”填入該格中。 填報正常幼苗等百分率時,同時還須填報采用的發(fā)芽床種類和溫度、發(fā)芽試驗持續(xù)時間以及為促進發(fā)芽所采用的處理方法。發(fā)芽試驗原始記載表發(fā)芽試驗原始記載表.doc第六節(jié) 幼苗鑒定一、幼苗鑒定基礎知識1幼苗的發(fā)育過程要了解幼苗的發(fā)育過程,了解苗期器官的形成,首先要了解種子的構造,要追溯到種子胚的組成和活動情況。 種子檢驗所稱的“種子”實質上是“種子單位”,即真種子(由胚珠發(fā)育而來)和其他構造(如子房及偶爾花器)的殘留物。-“種子單位”主要由種胚、營養(yǎng)組織和種皮組成。-種胚包括胚根、胚軸、胚芽和子葉或盾片(禾本科某些屬中的變態(tài)子葉)四個部分。圖3-12 玉米種子的萌發(fā) (引自Raven)A.種子(籽實)縱切面 B. 幼苗形成過程 圖3-8 大豆種子的萌發(fā)1.大豆種子 2.種皮破裂,胚根伸出 3.胚根向下生長,并長出根毛4.種子在土中萌發(fā),胚軸突出土面 5.胚軸伸長,牽引子葉脫開種皮而出6.子葉出土,胚芽長大 7.胚軸繼續(xù)伸長,二片真葉張開,幼苗長成 幼苗的所有主要構造都是由種胚在發(fā)育期間分化出來的組織所衍生。當種子萌發(fā)時,-通常胚根首先突破種皮,向下生長形成幼苗的地下根系。根系一般由初生根和次生根組成,禾本科植物的某些屬根系為數條種子根。-胚根伸出的同時,胚軸隨之生長,胚芽露出土面,發(fā)育成幼苗的莖葉系統(tǒng)。-子葉或隨胚軸伸長而帶出地面或留在土壤中的種皮里。禾本科植物的胚芽之外,套有筒狀胚芽鞘,胚芽鞘一經露出土表,在光的影響下,隨即停止生長,真葉相繼從胚芽鞘中伸出。-伸長的胚軸即幼苗中軸,一般分為兩個部分:初生根以上至子葉著生點以下的這一段苗軸為下胚軸;子葉以上至第一片真葉或一對真葉以下的這一段苗軸為上胚軸。而在禾本科植物中為中胚軸(即盾片著生點至胚芽之間這一段苗軸)。在植物系統(tǒng)分類中,根據胚中子葉的數目,分為單子葉植物、雙子葉植物和多子葉植物。-因胚中著生一片子葉稱為單子葉植物,-胚中著生兩片子葉稱為雙子葉植物。-林木種子的針葉樹種類(如松科等)胚中著生多枚子葉稱為多子葉植物。種子胚構造的分化程度2幼苗的出土類型(1)子葉出土型(epigeal germination) 由于下胚軸伸長而使子葉和幼梢伸出地面的一種發(fā)芽習性,例如單子葉植物的洋蔥(圖13-2A),雙子葉植物的菜豆(圖13-3A)、油菜(圖13-3B)、瓜類和棉花等。這類種子發(fā)芽時,隨著胚根突出種皮,下胚軸背地性迅速伸長,將子葉和胚芽一起帶出地面,此時子葉變綠展開并形成幼苗的第一個光合作用器官,接著上胚軸和頂芽發(fā)育生長。圖3-9 蓖麻幼苗1. 萌發(fā)早期,開始形成根系 2.萌發(fā)后期,子葉展開 3.幼苗外形 (2)子葉留土型(hypogeal germination) 子葉或變態(tài)子葉(盾片)留在土壤中的種皮內的一種發(fā)芽習性,例如單子葉植物的水稻、小麥(圖13-2B)、玉米(圖13-2C)等,雙子葉植物的蠶豆、豌豆(圖13-3C)等。這類種子發(fā)芽時,僅子葉以上的上胚軸或禾本科的胚芽鞘和中胚軸伸長,它們連同胚芽向上伸出地面,形成植株的莖葉系統(tǒng),子葉或盾片留在土壤中的種皮內。與子葉出土型發(fā)芽相比,首先進行光合作用的器官是初生葉或從胚芽中長出的第一片真葉。圖3-11 蠶豆種子的留土萌發(fā) (引自李揚漢) 1.種子萌發(fā)初期 2.成長的幼苗在農業(yè)生產上播種時,應注意掌握兩種類型幼苗的種子播種深度。 首先要了解各種作物的幼苗類型,一般來說,子葉出土幼苗的種子播種要淺一些,但也要看各種作物的下胚軸頂土力情況,如棉花的頂土力較弱要淺播,菜豆的頂土力較強要深播一些。而子葉留土幼苗的種子,播種可以稍深。另外,也要根據種子大小、土壤濕度等條件綜合考慮播種措施。 3幼苗的主要構造 幼苗的主要構造因作物種類而有明顯差異,但通常由下列的一些構造的特定組合所組成:根系,主要是初生根和次生根,在禾本科某些屬中為種子根。幼苗中軸,包括下胚軸、上胚軸、頂芽,在禾本科某些屬中表現為中胚軸。子葉,具有特定數目,1至數個。芽鞘,禾本科中所有屬。A1 術語A1.1 初生根 primary root 由胚根發(fā)育而來的幼苗主根。A1.2 次生根 secondary root 除初生根外的其他根。A1.3 種子根 seminal roots 在禾谷類植物中,由初生根和胚中軸上長出的數條次生根所形成的幼苗根系。A1.4 殘缺根 stunted root 不管根的長度如何,缺少根尖或根尖有缺陷的根。A1.5 粗短根 stubby root 雖根尖完整,但根縮短呈棒狀,是幼苗中毒癥狀所特有的根。A1.6 停滯根 retarded root 通常具有完整根尖,但異常短小而細弱,與幼苗的其他構造相比失去均衡。A1.7 上胚軸 epicotyl 子葉以上至第一片真葉或一對真葉以下的部分苗軸。A1.8 中胚軸 mesocotyl 在禾本科一些高度分化的屬中,盾片著生點至胚芽之間的部分苗軸。A1.9 下胚軸 hypocotyl 初生根以上至子葉著生點以下的部分苗軸。A1.10 扭曲構造 twisted structure 沿著幼苗伸長主軸、下胚軸、芽鞘等幼苗構造發(fā)生扭曲狀。包括輕度扭曲(loosely twisted)和嚴重扭曲(tightly twisted)。A1.11 環(huán)狀構造 looped structure 改變了原來的直線形,下胚軸、芽鞘等幼苗構造完全形成環(huán)狀或圓圈形。A1.12 出土型發(fā)芽 epigeal germination 由于下胚軸伸長而使子葉和幼苗中軸伸出地面的一種發(fā)芽習性。A1.13 留土型發(fā)芽 hypogeal germination 子葉或變態(tài)子葉(盾片)留在土壤和種子內的一種發(fā)芽習性。A1.14 子葉 cotyledon 胚和幼苗的第一片葉或第一對葉。A1.15 腐爛 decay 由于微生物的存在而引起的有機組織潰爛。A1.16 變色 discolouration 顏色改變或褪色。A1.17 向地性 geotropism 植物生長對重力的反應,包括向地下生長的正向地性(positive geotropism)和向上生長的負向地性(negative geotropism)生長。A1.18 芽鞘 coleoptile 在禾本科中,胚或幼苗芽鞘的鞘狀保護構造。A1.19 感染 infection 病原菌侵入活體(如幼苗主要構造)并蔓延,引起病癥和腐爛。包括初生感染(primary infection)(種子本身攜帶病原菌)和次生感染(secondary infection)(其他種子或幼苗蔓延而被感染)。A1.20 初生葉 primary leaf 在子葉后所出現的第一片葉或第一對葉。A1.21 鱗葉 scale leaves 通常緊縮在軸上(如石刁柏、豌豆屬)的一種退化葉片。A1.22 盾片 scutellum 在禾本科某些屬中所特有的變態(tài)子葉,其功能是從胚乳吸收養(yǎng)分輸送到胚部的一種盾形構造。A1.23 頂芽 terminal bud 由數片分化程度不同的葉片所包裹著的幼苗頂端。A1.24 50%規(guī)則 50%-rule 如果整個子葉組織或初生葉有一半或一半以上的面積具有功能,則這種幼苗可列為正常幼苗;如果一半以上的組織不具備功能(如缺失|壞死|變色或腐爛),則為不正常幼苗。當從子葉著生點到下胚有損傷和腐爛的跡象時,這時不能采用50%規(guī)則。在鑒定有缺陷的初生葉時可以應用,但初生葉形狀正常,只是葉片面積較小時則不能應用。 (1)單子葉植物幼苗的主要構造 單子葉植物子葉出土型幼苗的主要構造包括初生根、不定根和管狀子葉等,例如蔥屬(圖13-2A)。 單子葉植物子葉留土型幼苗的主要構造包括種子根初生根、次生根、不定根、中胚軸、胚芽鞘、初生葉等,例如小麥屬(圖13-2B)、玉米屬(圖13-2C)、稻屬等。(2)雙子葉植物幼苗的主要構造 雙子葉植物子葉出土型幼苗的主要構造包括初生根、次生根、下胚軸或上胚軸、子葉、初生葉和頂芽等部分,例如菜豆屬(圖13-3A)、蕓苔屬(圖13-3B)等。 雙子葉植物子葉留土型幼苗的主要構造包括初生根、次生根、子葉、上胚軸、鱗片、初生葉和頂芽等,例如碗豆屬(圖13-3C)等。幼苗的主要構造比較二、幼苗鑒定總則(一)正常幼苗的鑒定標準 正常幼苗分為:完整幼苗、帶有輕微缺陷的幼苗和次生感染的幼苗三種。凡符合下列類型之一者為正常幼苗。1. 完整幼苗幼苗主要構造生長良好、完全、勻稱和健康。因種不同,應具有下列一些構造。發(fā)育良好的根系,其組成如下:a細長的初生根,通常長滿根毛,末端細尖;b在規(guī)定試驗時期內產生的次生根;c在燕麥屬、大麥屬、黑麥屬、小麥屬和小黑麥屬中,由數條種子根代替一條初生根。發(fā)育良好的幼苗中軸,其組成如下:a出土型發(fā)芽的幼苗,應具有一個直立、細長并有伸長能力的下胚軸;b留土型發(fā)芽的幼苗,應具有一個發(fā)育良好的上胚軸;c在出土型發(fā)芽的一些屬(如菜豆屬、花生屬)中,應同時具有伸長的上胚軸和下胚軸;d在禾本科的一些屬(如玉米屬、高粱屬)中,應具有伸長的中胚軸。具有特定數目的子葉:a單子葉植物具有一片子葉,子葉可為綠色圓管狀(蔥屬),或變形而全部或部分遺留在種子內(如石刁柏、禾本科);b雙子葉植物具有二片子葉,在出土型發(fā)芽的幼苗中,子葉為綠色,展開呈葉狀;在留土型發(fā)芽的幼苗中,子葉為半球形和肉質狀,并保留在種皮內。具有展開、綠色的初生葉:a在互生葉幼苗中有一片初生葉,有時先發(fā)生少數鱗狀葉,如豌豆屬、石刁柏屬、巢菜屬;b在對生葉幼苗中有兩片初生葉,如菜豆屬。具有一個頂芽或苗端。在禾本科植物中有一個發(fā)育良好、直立的芽鞘,其中包著一片綠葉延伸到頂端,最后從芽鞘中伸出。 完整幼苗例圖2. 帶有輕微缺陷的幼苗 幼苗主要構造出現某種輕微缺陷,但在其他方面能均衡生長,并與同一試驗中的完整幼苗相當。有下列缺陷則為帶有輕微缺陷的幼苗。初生根:a初生根局部損傷,或生長稍遲緩;b初生根有缺陷,但次生根發(fā)育良好,特別是豆科中一些大粒種子的屬(如菜豆屬、豌豆屬、巢菜屬、花生屬、豇豆屬和扁豆屬)、禾本科中的一些屬(如玉米屬、高粱屬和稻屬)、葫蘆科所有屬(如甜瓜屬、南瓜屬和西瓜屬)和錦葵科所有屬(如棉屬);c燕麥屬、大麥屬、黑麥屬、小麥屬和小黑麥屬中有一條強壯的種子根。下胚軸、上胚軸或中胚軸局部損傷。子葉(采用“50%規(guī)則”):a子葉局部損傷,但子葉組織總面積的一半或一半以上仍保持著正常的功能,并且幼苗頂端或其周圍組織沒有明顯的損傷或腐爛;b雙子葉植物僅有一片正常子葉,但其幼苗頂端或其周圍組織沒有明顯的損傷或腐爛。初生葉: a初生葉局部損傷,但其組織總面積的一半或一半以上仍保持著正常的功能(采用“50%規(guī)則”);b頂芽沒有明顯的損傷或腐爛,有一片正常的初生葉,如菜豆屬;c菜豆屬的初生葉形狀正常,大于正常大小的四分之一;d具有三片初生葉而不是兩片,如菜豆屬(采用“50%規(guī)則”)。芽鞘: a芽鞘局部損傷;b芽鞘從頂端開裂,但其裂縫長度不超過芽鞘的三分之一;c受內外稃或果皮的阻擋,芽鞘輕度扭曲或形成環(huán)狀d芽鞘內的綠葉,沒有延伸到芽鞘頂端,但至少要達到芽鞘的一半。3. 次生感染的幼苗 由真菌或細菌感染引起,使幼苗主要構造發(fā)病和腐爛,但有證據表明病源不來自種子本身。(二)不正常幼苗的鑒定標準 不正常幼苗分為:受損傷的幼苗、畸形或不勻稱的幼苗和由初生感染的腐爛幼苗三類。1. 受損傷的幼苗-由機械處理、加熱、干燥、凍害、化學處理、昆蟲損害等外部因素引起,使幼苗構造殘缺不全或受到嚴重損傷,以致不能均衡生長者。這類所產生的不正常幼苗類型主要有:-子葉或幼苗中軸開裂并與其他幼苗構造分離;-下胚軸、上胚軸或子葉橫裂或縱裂;-胚芽鞘損傷或頂部破裂;初生根開裂、殘缺或缺失。2. 畸形或不勻稱的幼苗 由于內部因素引起生理紊亂,幼苗生長細弱,或存在生理障礙,或主要構造畸形或不勻稱者。這類所產生的不正常幼苗類型主要有:初生根停滯或細長;根負向地性生長;下胚軸、上胚軸或中胚軸粗短、環(huán)狀、扭曲或螺旋形;子葉卷曲、變色或壞死;胚芽鞘短而畸形、開裂、環(huán)狀、扭曲或螺旋形;缺失葉綠素(幼苗黃化或白化);幼苗纖細;幼苗透明水腫狀(玻璃體)。3. 腐爛幼苗 由初生感染(病源來自種子本身)引起,使幼苗主要構造發(fā)病和腐爛,并妨礙其正常生長者。 在實際應用過程中,由于不正常幼苗只占少數,而且只要能鑒別不正常幼苗就行。凡幼苗帶有下列其中一種或一種以上的缺陷則列為不正常幼苗。(1)根初生根 初生根殘缺;短粗;停滯;缺失;破裂;從頂端開裂;縮縊;纖細;卷縮在種皮內;負向地性生長;水腫狀;由初生感染所引起的腐爛。種子根 種子根沒有或僅有一條生長力弱的種子根。(2)下胚軸、上胚軸或中胚軸下胚軸、上胚軸或中胚軸縮短而變粗;深度橫裂或破裂;縱向裂縫(開裂);缺失;縮縊;嚴重扭曲;過度彎曲;形成環(huán)狀或螺旋形;纖細;水腫狀(玻璃體);由初生感染所引起的腐爛。(3)子葉(采用“50%規(guī)則”) 除蔥屬外所有屬的子葉缺陷 子葉腫脹卷曲;畸形;斷裂或其他損傷;分離或缺失;變色;壞死;水腫狀;由初生感染所引起的腐爛。蔥屬子葉的特定缺陷 蔥屬子葉縮短而變粗;縮縊;過度彎曲;形成環(huán)狀或螺旋形;無明顯的“膝”;纖細。(4)初生葉(采用“50%規(guī)則”) 初生葉畸形;損傷;缺失;變色;壞死;由初生感染所引起的腐爛;雖形狀正常,但小于正常葉片大小的四分之一。(5)頂芽及周圍組織頂芽及周圍組織畸形;損傷;缺失;由初生感染所引起的腐爛。(6)胚芽鞘和第一片葉(禾本科) 胚芽鞘 胚芽鞘畸形;損傷;缺失;頂端損傷或缺失;嚴重過度彎曲;形成環(huán)狀或螺旋形;嚴重扭曲;裂縫長度超過從頂端量起的三分之一;基部開裂;纖細;由初生感染所引起的腐爛。第一葉 第一葉延伸長度不到胚芽鞘的一半;缺失;撕裂或其他畸形。 (7)整個幼苗畸形;斷裂;子葉比根先長出;兩株幼苗連在一起;黃化或白化;纖細;水腫狀;由初生感染所引起的腐爛。為便于全面理解其含義,圖13-4至圖13-10示意各種缺陷的不正常幼苗。根的不正常幼苗類子葉的不正常幼苗類蔥屬子葉特有缺陷不正常幼苗類型除蔥屬外所有屬的子葉缺陷不正常幼苗類型胚芽鞘、頂芽及其周圍組織的不正常幼苗類4. 主要作物種類的幼苗鑒定示意圖(1)水稻幼苗構造及鑒定示意圖(水稻) (2)玉米幼苗構造及鑒定示意圖(玉米)(3)小麥幼苗構造及鑒定示意圖(小麥)(4)洋蔥幼苗構造及鑒定示意圖(洋蔥)(5)蕓苔屬幼苗構造及鑒定示意圖(蕓苔屬)(7)南瓜幼苗構造及鑒定示意圖(南瓜屬)(8)花生幼苗構造及鑒定示意圖(花生) (9)菜豆幼苗構造及鑒定示意圖(菜豆)(10)大豆屬幼苗構造及鑒定示意圖(大豆)(11)豌豆屬幼苗構造及鑒定示意圖(豌豆) (三)幼苗鑒定指南 ISTA于2003年發(fā)布第三版幼苗鑒定手冊,其中較有參考價值之一是明確了幼苗鑒定指南,作為判定正常幼苗與不正常幼苗標準的補充。1幼苗鑒定時期2、子葉和初生葉的損傷采用50%規(guī)則3、子葉壞死的幼苗4、橫裂和縱裂的幼苗5、環(huán)狀或螺旋形的幼苗6、考慮次生根的幼苗7、負向地性生長8、復胚種子單位的鑒定9、產生大量雙生苗的樣品三、幼苗鑒定按屬分類細則(一)幼苗鑒定按屬分類 由于各個種的不同屬幼苗形態(tài)特征結構的差異和不同構造對鑒定正常幼苗的重要性,為了便于正常幼苗鑒定,ISTA幼苗鑒定手冊將具有相似幼苗形態(tài)特征和發(fā)育特性的屬歸為一類。 其具體歸類依據如下: (1)、按植物種類分為A、B兩類: A、農業(yè)及園藝(如洋蔥、水稻、小麥、玉米、油菜、菜豆、豌豆等)。 B、喬木及灌木(如松樹和冬青等)(2)、按子葉系統(tǒng)分類分為三類: 1、單子葉植物(如洋蔥、小麥、玉米等) 2、雙子葉植物(如油菜、菜豆、豌豆、西瓜、棉花等)。 3、針葉植物(如松樹等)(3)、按發(fā)芽習性分類分為兩類:1、子葉出土型發(fā)芽植物;(如洋

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