酶的專一性及影響酶促反應(yīng)的因素.doc

酶的專一性及影響酶促反應(yīng)的因素一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過本實(shí)驗(yàn)，證明酶對底物催化的專一性，以及PH、溫度、激活劑、抵制劑對酶促反應(yīng)速度的影響。二 實(shí)驗(yàn)原理 唾液淀粉酶能專一的催化淀粉水解，生成一系列水解產(chǎn)物，即糊精、麥芽糖、葡萄糖等。麥芽糖或葡萄糖都屬于還原糖，能使班氏試劑中的二價(jià)銅離子還原成亞銅，并生成磚紅色的氧化亞銅。淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是還原糖，所以不能與班氏試劑作用呈色。以此證明酶催化底物的專一性。淀粉或淀粉的水解產(chǎn)物遇碘會呈現(xiàn)不同的顏色，淀粉遇碘變藍(lán)色；糊精遇碘則根據(jù)其分子量的大小依次呈現(xiàn)紫色、褐色、紅色；而麥芽糖、葡萄糖遇碘不呈色。通過顏色變化可以了解淀粉的程度，以觀察PH、溫度激活劑、抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響。三 藥品器材 試管、試管夾、樣品杯、滴瓶、溫度計(jì)、恒溫水浴箱，冰箱等。1.1%淀粉溶液 稱取可溶性淀粉1g，加5ml蒸餾水調(diào)成糊狀，徐徐倒入80ml煮沸的蒸餾水中，不斷攪拌，待其溶解后，加蒸餾水至100ml。此液應(yīng)新鮮配制，防止細(xì)菌污染。21%蔗糖溶液 稱1g蔗糖，加蒸餾水至100ml溶解。3PH6.8緩沖液 取0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液154.5ml，0.1mol/L檸檬酸溶液45.5ml混合即可。4PH4.8緩沖液 取0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液98.6ml，0.1mol/L檸檬酸溶液101.4ml混合即可。5PH8.0緩沖液 取0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液194.5ml，0.1mol/L檸檬酸溶液5.5ml混合即可。6班氏試劑 溶解結(jié)晶硫酸銅17.3g于100ml熱的蒸餾水中，冷卻后加水至150ml為A液。取檸檬酸鈉173g和無水碳酸鈉100g，加蒸餾水600ml,加熱溶解，冷卻后加水至850ml為B液。將A液緩慢倒入B液中，混合即可。7稀碘液 稱取碘1g，碘化鉀2g ,溶于300ml蒸餾水中。809%NaCl溶液。909%CuSO4溶液。1001%Na2SO4溶液。11稀釋唾液 用清水漱口，清除食物殘?jiān)?。再含蒸餾水30ml作咀嚼運(yùn)動，2分鐘后將稀釋唾液收集于樣品杯中備用。四 實(shí)驗(yàn)方法1 酶的專一性 取二支試管，編號，按下表操作。加入物（滴）1號管2號管PH6.8緩沖液20201%淀粉溶液 101%蔗糖溶液10稀釋唾液55將各管混勻，置37度水浴箱保溫10分鐘后取出班氏試劑 1515將各管混勻，置煮沸水浴箱煮沸35分鐘，觀察結(jié)果2 PH對酶促反應(yīng)速度的影響 取三支試管，編號，按下表操作。3加入物（滴）1號管2號管3號管PH4.8緩沖液20PH6.8緩沖液20PH8.0緩沖液201%淀粉溶液101010稀釋唾液555將各管混勻，置37度水浴箱保溫510分鐘后取出稀碘液 111觀察各管的顏色3.溫度對酶促反應(yīng)速度的影響 取三支試管，編號，按下表操作。加入物（滴）1號管2號管3號管PH6.8緩沖液2020201%淀粉溶液101010將1、2、3號管分別置于0、37、100預(yù)溫5分鐘稀釋唾液555繼續(xù)將1、2、3號管分別置于0、37、100預(yù)溫510分鐘稀碘液 111觀察各管的顏色4 激活劑、抵制劑對酶促反應(yīng)速度的影響 取四支試管，編號，按下表操作。加入物（滴）1號管2號管3號管4號管PH6.8緩沖餾水1009%NaCl1009%CuSO41001%Na2SO410稀釋唾液5555將各管混勻，置37水浴箱保溫510分鐘后取出稀碘液1111觀察各管的顏色五 注意事項(xiàng)1 唾液淀粉酶的活性存在個(gè)體差異，同時(shí)受唾液稀釋倍數(shù)影響，收集唾液時(shí)應(yīng)事先確定稀釋倍數(shù)，或收集24人的混合唾液。2