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探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量變化本實驗選自人教版高中生物必修3穩(wěn)態(tài)與環(huán)境第4章第2節(jié)種群的數(shù)量變化,是其中的一個探究活動,目的讓學(xué)生通過探究培養(yǎng)液中酵母菌種群的動態(tài)變化,建立數(shù)學(xué)模型,分析酵母菌種群變化規(guī)律,同時利用我校顯微鏡教學(xué)系統(tǒng)的優(yōu)勢,充分拓展學(xué)生的探究能力,踐行新課標(biāo)理念。我主要以下幾個方面來簡單說明對本節(jié)實驗課的設(shè)計和開展過程。一、實驗器材(一)實驗儀器:超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、冰箱、光學(xué)數(shù)碼顯微鏡試管(二)實驗用具:培養(yǎng)皿、錐形瓶、量筒、玻璃棒、載玻片、蓋玻片、微量移液器、血細(xì)胞計數(shù)板(三)實驗材料及藥品:酵母菌、馬鈴薯、葡萄糖、美藍(lán)染色劑、氫氧化鈉、乙醇二、實驗方案的改進(jìn)與創(chuàng)新一節(jié)成功的實驗教學(xué)課程離不開完備的實驗設(shè)計方案,我們首先對傳統(tǒng)的實驗方案作了改進(jìn)與創(chuàng)新,主要有以下四點。(一)教材中酵母菌培養(yǎng)時間不合理,將酵母菌培養(yǎng)時間縮短為15h首先,教材上給出的實驗方案是:對酵母菌連續(xù)培養(yǎng)7天,每天取樣計數(shù)。這是按照教材要求繪制的酵母菌種群數(shù)量變化的曲線(圖1),沒有體現(xiàn)出典型的“s”型變化規(guī)律。通過分析結(jié)果以及查閱文獻(xiàn),我們確定將酵母菌連續(xù)培養(yǎng)的時間縮短為15小時,每隔2小時取樣計數(shù)。這是改進(jìn)之后我們再次根據(jù)實驗結(jié)果繪制的曲線圖(圖 2),呈現(xiàn)出了s型種群數(shù)量變化規(guī)律。(二)實驗全過程耗時長,不符合教學(xué)實際。通過低溫保存樣品,統(tǒng)一時間對所有樣品計數(shù),解決了與實際課程安排的矛盾本節(jié)實驗課共涉及到微生物的培養(yǎng)、抽樣檢測、顯微計數(shù)和模型構(gòu)建等多項內(nèi)容,實驗的全過程在一節(jié)課很難完成。酵母菌培養(yǎng)是一個連續(xù)的過程,每隔2個小時就要取樣,并完成計數(shù),這顯然與學(xué)生上課時間產(chǎn)生很大的沖突。根據(jù)“低溫條件下,微生物暫不增殖但仍舊保持生命力”的原理,我們采取的方法是:每次取樣后置于4低溫冷藏,可以暫時抑制酵母菌的增殖。最后讓學(xué)生在一節(jié)課內(nèi)對所有樣品統(tǒng)一進(jìn)行計數(shù),這樣不僅將實驗最核心的部分集中一節(jié)課呈現(xiàn)給學(xué)生,同時也解決了實驗方案與課程安排沖突的問題。(三)死亡的酵母菌影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性 ,計數(shù)前補(bǔ)充美藍(lán)染色法區(qū)分活細(xì)胞與死細(xì)胞根據(jù)本實驗的內(nèi)容,我們認(rèn)為,在顯微鏡下對酵母菌計數(shù)時,只統(tǒng)計活菌數(shù)目才是更準(zhǔn)確的結(jié)果,尤其在培養(yǎng)后期,大量死亡的酵母菌必然會影響對種群數(shù)量的統(tǒng)計。但是教材的實驗方案是:取樣后直接計數(shù)統(tǒng)計。針對于此我們也做了改進(jìn):在計數(shù)之前補(bǔ)充美藍(lán)染色的實驗步驟,來達(dá)到區(qū)分活細(xì)胞與死細(xì)胞的目的。這是我們預(yù)實驗的結(jié)果(圖 3),無色的細(xì)胞是有活性的酵母菌,藍(lán)色或淡藍(lán)色的是死細(xì)胞或代謝作用微弱的衰老細(xì)胞,在計數(shù)過程中不統(tǒng)計在內(nèi)。(四)學(xué)生難以在顯微鏡下快速找到計數(shù)室,影響實驗進(jìn)度。利用簡單快速的新方法進(jìn)行酵母菌計數(shù)教材中的計數(shù)方法是通過血球計數(shù)板進(jìn)行計數(shù)。血球計數(shù)板對學(xué)生而言是非常陌生的一種實驗器材,所以操作起來也非常困難。學(xué)生在使用過程中,往往要花費(fèi)很長的時間才能找到血球計數(shù)板的計數(shù)室,極大地影響了實驗進(jìn)度。針對于此,我們查閱了很多文獻(xiàn),不斷摸索,反復(fù)實驗,最終確定采用另外一種更為快速簡單的計數(shù)方法。這種方法操作非常簡單:直接將樣品滴加到普通載玻片上,依據(jù)樣方法的原理,在數(shù)碼顯微鏡下的微觀視野中劃取多個樣方(數(shù)碼顯微鏡操作系統(tǒng)可實現(xiàn)直接測量樣方的實際面積),求出每個樣方中酵母菌的平均數(shù)量,再根據(jù)相關(guān)公式就可以計算樣品中所含酵母菌總數(shù)(公式1)。我們分別用快速測定法和血球計數(shù)板法對同一樣品進(jìn)行計數(shù)。結(jié)果顯示,雖然新方法與血球計數(shù)板法相比,結(jié)果有一些差異,但用快速計數(shù)法對同一樣品重復(fù)計數(shù),結(jié)果并沒有明顯差異(表1)??焖贉y定法(1013個/ml)血球計數(shù)板法(1012個/ml)16.214.8225.734.7936.175.0145.954.9356.045.16表格 1:快速測定法與血球計數(shù)板法計數(shù)結(jié)果我們進(jìn)一步采用快速計數(shù)法對不同培養(yǎng)時間的酵母菌樣品進(jìn)行數(shù)量統(tǒng)計,繪制的曲線也符合典型的s型種群變化規(guī)律(圖5)。因此我們認(rèn)為,這種計數(shù)方法在本實驗中是可行的。三、實驗原理(一)在含糖的液體培養(yǎng)液中酵母菌繁殖很快,迅速形成一個封閉容器內(nèi)的酵母菌種群,通過細(xì)胞計數(shù)可以測定封閉容器內(nèi)的酵母菌種群隨時間發(fā)生的數(shù)量變化(二)養(yǎng)分、空間、溫度、ph和有毒代謝產(chǎn)物等是影響種群數(shù)量持續(xù)增長的限制因素(三)活細(xì)胞具有較強(qiáng)的還原能力,能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型,呈無色。死細(xì)胞或代謝作用微弱的衰老細(xì)胞則被染成藍(lán)色或淡藍(lán)色 (四)利用樣方法的原理,在光學(xué)數(shù)碼顯微鏡下的微觀視野中劃取多個樣方,通過相關(guān)公式計算出樣品中酵母菌的數(shù)量四、實驗教學(xué)目標(biāo)(一)知識目標(biāo):說明構(gòu)建種群數(shù)量增長模型的方法,用數(shù)學(xué)模型解釋種群數(shù)量變化(二)能力目標(biāo):通過探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化,嘗試構(gòu)建種群增長的數(shù)學(xué)模型(三)情感態(tài)度與價值觀目標(biāo):關(guān)注種群數(shù)量變化對人類生活以及人類活動對種群數(shù)量變化的影響五、實驗教學(xué)內(nèi)容 教學(xué)內(nèi)容包括兩個課時,第一課時課前通過學(xué)案預(yù)習(xí)實驗內(nèi)容,課上確定實驗方案并練習(xí)兩種計數(shù)方法的操作過程;課下根據(jù)實驗方案進(jìn)行培養(yǎng)基的配制、分裝、滅菌、酵母菌的接種、培養(yǎng)以及取樣;第二課時用新方法對所有樣品中酵母菌數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計,構(gòu)建種群數(shù)量變化的數(shù)學(xué)模型,分析種群數(shù)量變化規(guī)律。六、實驗教學(xué)過程具體的教學(xué)過程包括3個環(huán)節(jié):設(shè)計并完善實驗方案;課前完成相關(guān)實驗準(zhǔn)備 ;統(tǒng)一計數(shù)、構(gòu)建模型并 分析種群數(shù)量變化規(guī)律。 (一)設(shè)計并完善實驗方案由于學(xué)生缺乏系統(tǒng)的設(shè)計實驗方案的經(jīng)驗,所以我們首先利用學(xué)案的形式,指導(dǎo)學(xué)生了解探究性實驗的一般步驟,明確實驗的假設(shè),圍繞著實驗?zāi)康?,通過組內(nèi)合作,共同完成初步實驗方案。大多數(shù)小組展示的實驗方案,流程大體相同。再通過創(chuàng)設(shè)問題情境、向ipad推送資料等手段推進(jìn)教學(xué)過程,引導(dǎo)學(xué)生對最初的實驗方案進(jìn)行完善與創(chuàng)新。確定了實驗方案之后,小組成員相互合作,利用顯微鏡練習(xí)兩種計數(shù)方法的操作。老師先做教學(xué)示范(圖6),將調(diào)好的標(biāo)準(zhǔn)圖像發(fā)送給每個小組,然后在學(xué)生練習(xí)過程中來回巡視,及時發(fā)現(xiàn)問題,規(guī)范學(xué)生的實驗操作(圖7),并且鼓勵同伴交流,大家共同分享經(jīng)驗(圖8)。這是上課過程中學(xué)生們拍攝的一些顯微視野照片(圖9、圖10)。(二)課前完成培養(yǎng)基的配制、酵母菌接種、培養(yǎng)、取樣等工作在老師的指導(dǎo)下,同學(xué)們利用課下時間完成準(zhǔn)備工作。包括培養(yǎng)基的配制、滅菌(圖11)、分裝、酵母菌的接種(圖12)與培養(yǎng)(圖13)。在實驗過程中,老師指導(dǎo)組長對組內(nèi)同學(xué)統(tǒng)籌安排,定時取樣,并做好樣品的標(biāo)記與記錄等細(xì)節(jié)工作。(三)進(jìn)行酵母菌的計數(shù)和模型構(gòu)建,分析酵母菌種群變化規(guī)律首先,分小組完成酵母菌計數(shù)與統(tǒng)計。每組成員分工合作,在計數(shù)過程中及時將統(tǒng)計結(jié)果記錄在數(shù)據(jù)表格中,求出平均值。整理完相關(guān)數(shù)據(jù)后,讓學(xué)生直接在顯微鏡的平板電腦上利用excel表格建構(gòu)數(shù)學(xué)模型,作出酵母菌種群數(shù)量變化的曲線圖(圖14),一個小組的實驗數(shù)據(jù)可能會有誤差,比如這是其中個別小組根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)繪制的曲線,與實驗假設(shè)并不符合(圖 15)。但對于不同小組來說,組間重復(fù),將每3個小組的數(shù)據(jù)匯總,求出平均值,數(shù)據(jù)共享后再次繪制出的曲線圖就和實驗假設(shè)一致了(圖16)。完成酵母菌的計數(shù)和模型構(gòu)建后,還要引導(dǎo)學(xué)生利用手中的資料分析酵母菌種群變化的規(guī)律,總結(jié)影響數(shù)量變化的因素(圖17),預(yù)測酵母菌數(shù)量變化趨勢(圖18)。這樣可以進(jìn)一步強(qiáng)化學(xué)生的探究意識,讓他們在上完實驗課之后真正的有所收獲。八、實驗效果評價(一).實驗教學(xué)時,不拘泥于教材,要勇于創(chuàng)新,積極改進(jìn)。我認(rèn)為我們這個實驗課程的優(yōu)點是:通過縮短培養(yǎng)時間和低溫保存樣品解決了實驗教學(xué)與有限的課堂時間的矛盾;補(bǔ)充美藍(lán)染色的步驟,使實驗結(jié)果更接近酵母菌的真實變化規(guī)律;采用更為快速方便的新方法進(jìn)行酵母菌計數(shù),充分發(fā)揮了先進(jìn)教學(xué)手段的優(yōu)勢。(二)實驗中我們使用的菌種是聯(lián)系大學(xué)微生物實驗室獲得的,但如果時間和條件允許,可以將選修一有關(guān)于微生物分離純化的實驗內(nèi)容也融入進(jìn)來,讓學(xué)生自己去倒平板、稀釋涂布或平板劃線挑取單菌落,這樣的話實驗效果會更好、學(xué)生的收獲會更多。(三)學(xué)生在上完這次實驗課后,也有很深的體會,比如,劉趙樂佳同學(xué)認(rèn)為:“教材上的內(nèi)容不一定百分百正確,要勇于創(chuàng)新,但理論要與實踐相結(jié)合?!痹封鶟赏瑢W(xué)說:“我不僅掌握了血細(xì)胞計數(shù)板的操作,還學(xué)會了更加簡便的新方法,收獲良多?!弊U贞柾瑢W(xué)做完實驗后非常興奮:“今天的實驗課十分有趣,讓我產(chǎn)生了強(qiáng)烈的學(xué)習(xí)欲望!”在這節(jié)實驗課的實

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