超敏反應性疾病的免疫學檢驗課件PPT課件.ppt

超敏反應性疾病的免疫學檢驗 返回總目錄 目錄 超敏反應 hypersensitivity 又稱變態(tài)反應 是指機體再次接受相同抗原刺激后 發(fā)生的以組織細胞損傷或生理功能紊亂為主的特異性免疫應答 變應原 allergen 引起超敏反應的抗原稱之為變應原 超敏反應 第一節(jié)激發(fā)試驗 激發(fā)試驗 provocationtest 是模擬自然發(fā)病條件 用少量超敏原引起一次較輕的超敏反應發(fā)作 達到確定超敏原的一種體內試驗 非特異性激發(fā) 是用組胺等刺激物做霧化吸入 以觀察患者對 型超敏反應的敏感性 進而分析病因或判定療效 特異性激發(fā) 是用抗原如塵螨等做試驗 對明確超敏原有一定價值 用于 型和 型超敏反應性疾病的檢查 一 皮膚試驗 是在皮膚進行的體內免疫學試驗 簡稱皮試 機制 型超敏反應 型超敏反應 皮內試驗點刺試驗 挑刺或刺痕試驗 斑貼試驗 一 試驗類型及方法 二 結果判定及分級標準 速發(fā)型皮膚試驗結果判定陽性反應以風團為主 點刺試驗的陽性反應以紅暈為主 遲發(fā)型皮膚試驗結果判定陽性結果以紅腫和硬結為主 相同超敏原不同稀釋度 速發(fā)型15 30min內觀察 遲發(fā)型48 72h內觀察 0 01 0 03ml 針 4mm 針 方法 結果 皮內試驗 比皮內試驗敏感性稍低 但假陽性較少 皮試液濃度要比皮內試驗高10 100倍 將試驗抗原與對照液分別滴于試驗部位的皮膚上 用針尖透過液滴輕挑一下以刺破皮膚而不出血為度 1min后拭 吸 去試驗抗原液 點刺試驗 第一次讀 48小時打開斑試器 間隔30min待斑試器壓痕消失后判定結果 第二次讀 第3天或第4天 如懷疑光過敏 在斑貼試驗的基礎上給予紫外線照射 操作過程相似 斑貼試驗 三 結果分析及注意事項 假陰性出現的常見原因 皮試液的濃度過低或失效 老年患者或過敏性休克或哮喘大發(fā)作之后 皮試前用過抗組胺藥或免疫抑制劑 操作不當將皮試液注入皮下或注入量過少等 三 結果分析及注意事項 假陽性出現的常見原因 皮試液含有非特異性刺激物 患者患有皮膚劃痕征 操作手法較重 注入量較大或濃度過高 注入少量空氣等 詢問病史 陽性對照 必備搶救藥品和設施 如何避免假性結果的出現 適應證 陰性對照 皮試液濃度 四 應用與評價 預防藥物或疫苗等過敏防治 型超敏反應性疾病結核菌素試驗評估機體細胞免疫功能預防皮膚接觸過敏 結核菌素試驗 是用結核菌素進行皮膚試驗 通過觀察局部是否出現遲發(fā)型超敏反應 判斷機體有無結核分枝桿菌感染和對該菌的免疫力 陽性 機體已感染過結核桿菌或BCG接種成功 強陽性 可能有活動性結核病 陰性 機體未感染過結核分枝桿菌 但應考慮 感染初期 老年人 重度結核病患者 機體處于免疫反應低下狀態(tài) 患有其他疾病 二 支氣管激發(fā)試驗 手捏式霧化器 bronchialprovocativetest BPT測定支氣管吸入某種刺激性物質后產生收縮反應程度的方法 亦稱氣道反應性測定 吸入一定量的激發(fā)物 比較吸入前后肺通氣功能指標 判斷氣道高反應性程度 霧化抗原顆粒 5微米 測定肺功能指標 用力肺活量 FVC 1秒用力呼氣容積 FEV1 最大呼氣流速 PEF 比氣道傳導率 sGaw 射流霧化器 特異性BPT將一定濃度的抗原刺激物裝入霧化器中使受試者經口或鼻吸入霧化顆粒 其攜帶激發(fā)物在支氣管樹及肺泡沉積而起作用 非特異性BPT將一定濃度的激發(fā)物裝入霧化器中 進行同特異性BPT的操作 吸氣流速 霧化顆粒直徑的大小以及氣道通暢與否均可影響霧化顆粒在氣道的沉積 從而影響氣道的反應性 一 試驗類型及方法 測基礎肺功能 激發(fā)物稀釋液 低濃度 小劑量 雙倍濃度 劑量遞增 陽性伴明顯氣促 喘息 口吸入 1 1分半鐘 測定肺功能 陽性標準 明顯不適 臨床癥狀 直至 激發(fā)物達到最高濃度 陰性反應 支氣管舒張劑 吸入 技術要點 二 測定指標及結果判斷 支氣管反應有三種類型 速發(fā) 遲發(fā)和雙重反應 每次觀察不能小于24小時 FEV1 重復性好 結果穩(wěn)定 PEF 峰流速儀價格低廉 方便 不受場地限制 與FEV1有較好的相關性 適合流行病學調查 sGaw 敏感性好 但重復性稍差 變應原的確定常以定性試驗判斷結果 陽性 氣道反應性增高FEV1 PEF較基礎下降 20 或sGaw下降 35 有時伴有明顯自覺癥狀或肺部聞及哮鳴音 二 測定指標及結果判斷 陰性 氣道反應性正常FEV1 PEF或sGaw 上述標準 正常值為陰性 無論激發(fā)試驗陽性或陰性 均應排除氣道反應性的影響因素 可疑者 間隔2 3周后復檢或2個月后再測 二 測定指標及結果判斷 三 注意事項及禁忌證 受試者在心肺功能不全 高血壓 甲亢 妊娠 嚴重咽喉炎 呼吸道感染或肺炎等情況下一般不適宜作激發(fā)試驗 有過敏性休克 嚴重的血管性水腫及嚴重的喉頭水腫病史者 一周之內預防接種 職業(yè)性過敏因素的接觸等 受試者在檢查前 48小時 停 抗組胺藥 色甘酸鈉及皮質激素類藥 12小時 停 支氣管擴張劑 15分鐘 實驗室休息 病史 體檢排除BPT的禁忌證 三 注意事項及禁忌證 基礎FEV1占預計值70 以上才能進行試驗 受試者應為哮喘患者病情穩(wěn)定時或緩解期 吸入激發(fā)物的濃度應從小到大 逐漸遞增 應備有急救器械 藥品和有經驗的臨床醫(yī)生在場 三 注意事項及禁忌證 四 應用與評價 觀察癥狀 癥狀好轉或減輕 導致 三 食物激發(fā)試驗 基礎飲食 吃可疑的過敏食物 癥狀加重 1周后 疑似 過敏原 重復3次 確定 某食物為過敏原 癥狀未減輕 1周后 排除 食物所致過敏 四 其他方法 結膜激發(fā)試驗 將超敏原滴于一眼 陽性反應為結膜充血 水腫 分泌增加 搔癢 甚至眼瞼紅腫 注意假陽性對結果的干擾 返回章目錄 第二節(jié)IgE的檢測 一 IgE的測定 CLIA敏感度更高 特異性高 定量 測定方法 固相RIA是較傳統(tǒng)的IgE檢測方法 ELISA雙抗體夾心法 操作簡便 敏感性很高 是測定血清IgE最常用的方法 臨床意義正常人群血清IgE水平受地域環(huán)境 種族 遺傳 年齡 性別 寄生蟲感染 測定法及取樣等影響 結果有一定差異 參考值 0 1 0 9mg L 某些過敏體質者高于正常1000 10000倍 血清IgE高 特應癥 支氣管肺曲菌病 藥物性間質性肺炎 麻風 寄生蟲病及IgE型骨髓瘤等 二 特異性IgE的測定 用純化的過敏原去檢測相應的IgE抗體的一類試驗 酶聯免疫吸附試驗 常用間接法測特異性IgE 免疫印跡技術 操作簡單 能一次性測定多種變 應原的特異性IgE 故臨床已普遍采用IBT法 4 底物顯色 2 待檢特異性IgE抗體 1 已知變應原包被載體 3 酶標動物抗人IgE 洗滌 洗滌 洗滌 結果 ELISA間接法檢測特異性IgE 特異性變應原加入待檢血清 轉印至NC膜 NC膜 待檢血清特異性IgE 抗 IgE HRP 底物 特異性抗原條帶顯色 NC膜 變應原 特異性IgE 抗 IgE HRP IBT檢測特異性IgE 返回章目錄 第三節(jié)免疫復合物檢測 免疫復合物 immunecomplex IC 指由抗原與相應的抗體結合而成的復合物 局部免疫復合物 沉積在機體的某一局部 循環(huán)IC circulatingIC CIC 血液中存在的IC 型超敏反應 在傳染病或性病時 IC沉淀于局部后激活補體 最終導致組織損傷 形成IC病 抗原特異性IC 抗原非特異性IC 檢測已知抗原與相應抗體形成的IC 不考慮形成IC抗原的性質 檢測未知抗原與相應抗體形成的IC總量 一 抗原非特異性CIC檢測技術 CIC 分子量600kDa以上 沉降系數 19S 熱聚合人IgG heatagglutinationhumanIgG HAHG 作為參考標準品 繪制標準曲線進行CIC定量或測定A值代表CIC相當于HAHG的含量 CIC的檢測方法 按抗體分子在結合抗原后發(fā)生的物理學和生物學特性的改變而設計 PEG比濁法 ELISA法 胞法 Raji細胞法 抗球蛋白技術 mRF凝膠擴散試驗 一 PEG比濁法 1 基本原理聚乙二醇 polyethyleneglycol PEG 為不帶電荷 直鏈大分子結構的多糖 有強脫水作用 利用2 4 濃度的PEG可選擇性沉淀大分子CIC 2 技術要點生物化學檢驗 2 PEG沉淀大分子CIC 4 PEG沉淀較小分子CIC 超過5 PEG選擇性沉淀CIC的特性消失 溫度影響極大 需進行溫差校正 低密度脂蛋白使?jié)岫仍黾?空腹采血 高 球蛋白血癥和標本反復凍融濁度增加 3 注意事項 二 ELISA法 1 基本原理ELISA法測定的CIC 是能夠結合C1q的IgG類抗體與其特異性抗原形成的CIC 2 技術要點將聚苯乙烯包被上C1q 加入受檢血清 CIC中IgG的Fc段與C1q結合 再加抗人IgG HRP 形成C1q CIC 抗人IgG HRP復合物 加底物顯色 靈敏度高于PEG比濁法 檢測到0 1mg L 重復性好等優(yōu)點 C1q制品不易精制 純品不穩(wěn)定 只能檢出與補體結合的CIC 3 方法評價 三 細胞法 Raji細胞法 Raji細胞是從Burkitt淋巴瘤分離建株似B細胞系 在體外繁殖傳代 細胞表面有高密度的C1q C3b C3d等補體受體 而且不易脫落 1 基本原理 將定量待檢血清 HAHG和Raji細胞混合 使補體 CIC或HAHG與Raji細胞形成復合物 加入抗人IgG FIC 形成Raji細胞 補體 CIC 或HAHG 抗人IgG FIC復合物 檢測熒光強度 2 技術要點 培養(yǎng)條件能改變Raji細胞其表面受體的數量及親和性 影響檢測敏感性 待檢血清中如有抗淋巴細胞的抗體 能和Raji細胞反應 SLE血清中的抗DNA也能和Raji細胞反應 使測定結果偏高 3 影響因素 敏感性高 6mg LHAHG 實用性強 缺點需培養(yǎng)Raji細胞和同位素標記抗人IgG 操作繁瑣 Raii細胞培養(yǎng)較困難 不易長期穩(wěn)定保持其特性 培養(yǎng)條件受限 4 方法評價 四 抗球蛋白技術 mRF凝膠擴散試驗 1 基本原理IgG或IgM類自身抗體與IC中IgG的Fc段結合而不與游離IgG結合的特性 mRF與CIC親和力較強 2 技術要點將mRF和待檢血清中的CIC在瓊脂凝膠中擴散 mRF CIC結合形成沉淀現象 進行CIC定性或定量 3 方法評價敏感度較低100mg L HAHG mRF來源受限 操作費時 難于常規(guī)應用 二 CIC檢測方法評價及應用 自身免疫性疾病病程中連續(xù)動態(tài)觀察或輔助診斷 試驗方法本身不完善 IC形成的復雜性 如在生理狀態(tài)下IC是由各種抗原與相應抗體所構成的 維持動態(tài)平衡 在病理狀態(tài)下往往是單一種類IC增高 而此種單一成分增高發(fā)展到足以影響IC總體水平情況下 才能被試驗檢出 一 檢測方法評價 腎臟疾病 急性腎小球腎炎 移植腎 IgA腎病 消化系統(tǒng)疾病 慢活肝炎 原發(fā)性膽淤性肝硬化 皮膚病 蕁麻疹 天皰瘡 皮疹性皮炎 型超敏反應性疾病 SLE RA 硬皮癥 自身免疫性溶血性貧血等 此外 CIC的檢測對于腫瘤 肝癌 白血病 霍奇金病 神經肌肉萎縮性側索硬化癥等疾病的診斷 二 臨床應用 固定或沉積于病變局部組織中的IC測定常用免疫組化技術 如熒光免疫組化技術檢測到組織標本有Ig和補體 受累組織的成分 構型和特定的部位可為疾病的嚴重程度和預后提供依據 三 沉積于組織中IC的測定 返回章目錄 類型 第四節(jié)抗人球蛋白試驗 Coombs試驗 不完全抗體 抗體分子較短小 只能與顆?？乖环较嘟Y合 不出現可見的凝集現象 但能封閉抗原決定簇 使其不能再與完全抗體結合 抗人球蛋白試驗 antiglobulintest AGT 將人球蛋白注入異種動物 誘導動物產生抗人球蛋白血清 antiglobulinserum AGS AGS加入表面結合有不完全抗體的紅細胞復合物中 就能出現可見的凝集現象 作用 檢測紅細胞表面結合的不完全抗體 臨床意義 新生兒溶血癥和自身免疫性溶血性貧血的診斷 RBC為Rh 7S的IgG 體內發(fā)生 抗IgG 體外測試 抽血 一 直接抗球蛋白試驗 檢測游離在血清中的不完全抗體或紅細胞表面的抗原 RBC為Rh 不完全抗體試劑 抗IgG 體外測試 二 間接抗球蛋白試驗 技術要點 凝集為陽性 表明受檢血清有不完全抗體或紅細胞上有相應抗原 同時具備陽性對照管凝集陰性對照管不凝集 如有不完全抗體 可將血清以作倍比稀釋進行效價測定 結果判斷 在37 水浴中 抗體吸附相應紅細胞上的結合程度 與致敏的時間 離子強度有關 離心速度和時間十分重要 原則應以最小的離心力和最短的離心時間使陽性對照管出現反應為宜 是一種極為敏感的檢查不完全抗體的方法 也是RhD檢出的確證試驗 操作繁雜 受試驗條件影響較大 注意事項 方法評價 血液病的檢測 鑒定血型和檢查血清中不完全抗體 有助于RhD的檢出 多用于檢測母體RhD抗體 輸血前交叉配血試驗及其他特殊研究 及早發(fā)現和避免新生兒溶血癥的發(fā)生 紅細胞不相容的輸血所產生的血型抗體進行檢測 返回章目錄 臨床意義 方法 熒光分光光度法 放射免疫分析法及酶免疫分析法測定 變應原刺激劑致嗜堿粒細胞釋放組胺 可以檢測出嗜堿粒細胞的釋放能力 變應原刺激劑可以特異性確定變應原的類型 類型 第五節(jié)藥物過敏篩選實驗 一 組胺含量測定 BHRT是變應原刺激劑刺激純化 洗滌后的嗜堿粒