淺表病理講座.doc

第一章 電子顯微鏡 第一節(jié) 概述一、電子顯微鏡的發(fā)展簡史1、20世紀30年代，E.Ruska 在電子光學理論發(fā)展的基礎上發(fā)明了世界上第一臺投射式電子顯微鏡（transmission electron microscope，TEM）放大倍數(shù)僅為12倍；1935年電子顯微鏡基本定型；1939年德國西門子公司生產(chǎn)了世界上第一批作為商品的投射式電子顯微鏡，分辨率優(yōu)于10nm，放大倍數(shù)達到了10萬倍。自此，投射式電子顯微鏡的研究重點是改進設計，提高儀器分辨率。2、1935年法國knoll首先提出了掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope， SEM）的設計思想和工作原理，1942年劍橋大學D.M.Mullan首次制成了世界上第一臺反射掃描電子顯微鏡。1965年基本定型；70年代已發(fā)展成為性能完善、自動化程度高，功能齊全的一種電子光學儀器。二、電子顯微鏡與光學顯微鏡的比較光學顯微鏡的光學系統(tǒng)一般采用可見光作為光源，玻璃透鏡作為成像、放大透鏡。其成像過程是：可見光通過空氣和玻璃透鏡這兩種不同的物質界面時，光的運動速度改變，從而改變運動方向使之匯聚一點（焦點），然后再發(fā)散，這樣就可以把物體的細節(jié)加以放大成像，使人們觀察到物體的顯微結構。電子顯微鏡采用電子束作為照明系統(tǒng)中的光源，電磁透鏡作為成像、放大透鏡，其基本成像過程是：電子束通過電子磁透鏡時，由于電磁場的作用使電子改變其運動方向而聚在一點（焦點），然后發(fā)散，從而把物體的微細結構放大成像。不過此時所成的像，人眼不能直接觀察到，還須通過一個熒光屏才能看到。三、電子顯微鏡的分類從使用選擇的角度考慮，目前電子顯微鏡可分為三大類：透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡和分析電子顯微鏡。按系統(tǒng)分類：透射電子顯微鏡可分為超高壓電子顯微鏡、高壓電子顯微鏡、高分辨電子顯微鏡、普及型電子顯微鏡、簡易型電子顯微鏡五類。第二節(jié) 透射式電子顯微鏡一、透射電鏡的概念： 是以波長極短的電子束作為照明源，用電磁透鏡聚焦成像的一種高分辨率、高放大倍數(shù)的電子光學儀器。即用聚得很細的電子束照射在樣品上，接受透過樣品并帶有樣品內(nèi)部信息的電子，經(jīng)過物鏡聚焦放大成像，這種接收電子成像的顯微鏡稱之為透射電鏡。二、透射電鏡的基本結構透射電鏡主要由電子光學系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、電子學系統(tǒng)、冷卻系統(tǒng)四部分構成。1. 電子光學系統(tǒng) 相當于光鏡的光源和反光鏡（1） 照明系統(tǒng) 相當于光學顯微鏡的照明部分，由電子槍和聚光鏡組成 1）電子槍：由陰極、陽極、柵極組成。陰極：由直徑0.110.15mm粗的鎢絲制成，呈V字型，也稱燈絲。當通電達一定溫度時，即產(chǎn)生熱電子發(fā)射，形成強的照明電子束。陽極：是一個中間帶孔的金屬圓盤，位于陰極的對面，它與陰極之間有10kv120kv的電位差，這一負高壓用以加速由陰極發(fā)射的電子束。柵極：位于陰極和陽極之間，它的電位也比陰極低，起著控制電子束發(fā)射及改變電子槍中電場分布的作用。2）聚光鏡：將電子槍發(fā)射的電子束匯聚在樣品上，對樣品進行照明。 普通電鏡有一個聚光鏡；高分辨率的電鏡有兩個聚光鏡，在第二聚光鏡中裝有活動光闌(用白金片做成),上面有直徑為200m 、300m 和400m 的圓孔，利用光闌孔的大小，可以控制聚光鏡的孔徑角，即控制照明束的強弱，使樣品不致發(fā)生過熱現(xiàn)象。（2）樣品室樣品室是放置樣品用的，通過特殊的機械裝置更換樣品。另外，通過連動裝置，在真空外可以操縱樣品臺在X、Y軸方向上移動。（3）成像系統(tǒng)：物鏡：是電鏡中第一個成像的電子透鏡，要求有極高的加工精度及穩(wěn)定性，以保證成像質量。物鏡裝有消像散器可消除像散，還裝有活動光闌可提高反差。物鏡是電鏡中最關鍵的部件，電競的分辨率主要取決于物鏡的分辨率。中間鏡：是一個可改變放大倍數(shù)的弱透鏡，主要用于控制總放大倍數(shù)。如果一個中間鏡不能滿足要求時，還可用兩個中間鏡來控制放大倍數(shù)。投影鏡：是將中間鏡所成的像進一步放大并投影到熒光屏上，以供觀察。與物鏡和中間鏡比較，投影鏡的電流一般是不變的，即其放大倍數(shù)是固定的。中間鏡和投影鏡的數(shù)目根據(jù)最高分辨率所要求的有效放大倍數(shù)而定（總放大倍數(shù)為各透鏡放大倍數(shù)的乘積）。對它們的要求是：在盡可能縮短鏡筒高度的條件下，滿足高分辨率所需要的有效放大倍數(shù)；像差減到最小，保證圖像不失真；可以進行衍射分析等。 （4）觀察記錄系統(tǒng) 包括熒光屏、光學顯微鏡和照相機構三部分。熒光屏：是由電子束照射后能轉換成光訊號的熒光粉涂制而成，主要作用是呈現(xiàn)透射電子顯微像，使用者可以通過熒光屏選擇圖像區(qū)域，在照相前對圖像進行聚焦。光學顯微鏡：安裝在主觀察窗前，通常選用510倍餓雙筒顯微鏡，作用是在不提高電子光學放大倍數(shù)的情況下分析高倍的電子圖像，保證了在相應的倍數(shù)下，不損失圖像信息，不降低圖像亮度。有助于精確聚焦。照相裝置：由暗盒（底片盒、接收盒）、底片傳送機構、快門和自動控制電路等組成。底片感光度、曝光時間確定后，快慢動作，底片傳送，各數(shù)字的顯示等全部自動化控制，使用的高壓值、放大倍數(shù)、底片序號等全部記錄在底片上。2. 真空系統(tǒng)：真空系統(tǒng)由機械泵、油擴散泵、真空管道、閥門及檢測系統(tǒng)組成。作用是排除鏡筒中的空氣，使鏡筒達到高真空狀態(tài)。否則，電子槍發(fā)射的高速電子會與氣體分子發(fā)生碰撞，產(chǎn)生電子散射，影響像的質量和反差；此外，在電子槍中會產(chǎn)生高壓放電，氣體會腐蝕燈絲，影響燈絲壽命，還會污染樣品。3. 電子學系統(tǒng)電鏡所用的電源比較復雜，同時對電源的穩(wěn)定性要求很高。在總的電源的供給上要求用專用線，對電源要先進行交流穩(wěn)壓，然后再進行整流、直流穩(wěn)壓，最后供給各部分使用。主要的電源供給包括高壓電源、電子槍燈絲電源等。4. 冷卻系統(tǒng) 作用：防止機器過熱。二、透射電鏡的成像原理透射電子顯微鏡成像系統(tǒng)包括樣品室、物鏡、中間鏡、反差光欄、衍射光欄、投射鏡以及其它電子光學部件。樣品室有一套機構，保證樣品經(jīng)常更換時不破壞主體的真空。樣品可在X、Y二方向移動，以便找到所要觀察的位置。經(jīng)過會聚鏡得到的平行電子束照射到樣品上，穿過樣品后就帶有反映樣品特征的信息，經(jīng)物鏡和反差光欄作用形成一次電子圖象，再經(jīng)中間鏡和投射鏡放大一次后，在熒光屏上得到最后的電子圖象。照明系統(tǒng)提供了一束相干性很好的照明電子束，這些電子穿越樣品后便攜帶樣品的結構信息，沿各自不同的方向傳播物鏡將來自樣品不同部位、傳播方向相同的電子在其背焦面上會聚為一個斑點，沿不同方向傳播的電子相應地形成不同的斑點，其中散射角為零的直射束被會聚于物鏡的焦點，形成中心斑點這樣，在物鏡的背焦面上便形成了衍射圖像而在物鏡的像平面上，這些電子束重新組合相干成像通過調(diào)整中間鏡的透鏡電流，使中間鏡的物平面與物鏡的背焦面重合，可在熒光屏上得到衍射圖像，若使中間鏡的物平面與物鏡的像平面重合則得到電子顯微鏡圖像，通過兩個中間鏡相互配合，可實現(xiàn)在較大范圍內(nèi)調(diào)整相機長度和放大倍數(shù)。第三節(jié) 掃描電子顯微鏡第四節(jié) 分析電子顯微鏡第二章 電子顯微鏡生物樣品的制備第一節(jié) 超薄切片法制備超薄切片的方法包括：普通超薄切片法、冰凍超薄切片法快速冰凍置換法普通超薄切片主要步驟分為組織處理、超薄切片和電子染色三個階段。一、組織處理（組織處理的必要性）（一）取材1、取材的要求：快、小、準、冷、細、標記 （1）操作迅速熟練：動物材料在中斷血液供應后，其細微結構幾乎立刻開始發(fā)生改變，故要求取材動作要迅速熟練，不致因耗時多而引起死后變化。 （2）組織塊體積?。褐苽潆婄R標本所用固定劑穿透能力弱，同時包埋劑的滲透能力也是有限的，為確保固定劑和包埋劑充分滲透到組織的各個部位，一般要求組織塊體積以1mm3為宜，因此，組織離體后，細切為1mm3或更小的組織塊是非常重要的。在超微病理活檢中，常會遇到因組織塊過大，未經(jīng)細切而引起組織自溶等人工損傷，失去診斷價值。 （3）取材部位準確：根據(jù)研究目的和觀察對象的要求，確定取材的位置。在臨床病理活檢時，要特別注意多點取材，避免電鏡一孔之見的弊病，才能對病變組織器官有全面了解，不致做出錯誤的診斷或評價。（4）低溫下操作：脫離血循環(huán)的生物材料，細胞內(nèi)的各種水解酶可以引起蛋白質、核酸水解，自溶作用使細胞的超微結構發(fā)生變化。為了減少細胞水解酶自溶作用的影響，要求在低溫（0-4）下進行取材，固定劑和取材器械、容器等應預冷。 （5）操作細致：電鏡取材的過程要求動作迅速，但不能粗糙。應盡可能地動作輕巧，所使用刀片器械等鋒利得手，切割時避免牽、拉、壓、擠，防止細胞的機械損傷。 （6）做好標記：進行電鏡觀察的目的無非是科學研究和病理診斷，因而組織塊投入固定液小瓶時，應注意做好標記，在瓶簽上著名組別、編號等，在取材以后得處理過程中也要注意這個問題。2、實驗動物取材：1mm3大小，12分鐘投入固定液。3、臨床活檢取材 （1）外科活檢： 14mm厚，修成1mm3大?。?（2）針刺活檢： 迅速投入固定液并細切成1mm長的小段。（二）固定1、固定的目的利用化學的或物理的方法，終止細胞的死后變化，盡可能完整地保存細胞生活狀態(tài)下的結構和成分。避免因細胞自身酶的分解作用而出現(xiàn)自溶或因外界微生物而發(fā)生腐敗，致使細胞超微結構遭受破壞。2、理想固定劑與良好固定的標準（1）理想的固定劑應具備的條件穿透力強；能夠穩(wěn)定細胞的結構和化學成分，使其保持在原位；將細胞內(nèi)的成分（蛋白質、脂類等）變?yōu)椴蝗軤顟B(tài)；保存細胞內(nèi)酶的活性和其它大分子物質的活性功能集團，以供電鏡細胞化學測定；能夠增強圖像的反差。（2）良好固定的形態(tài)學標準：固定效果良好時，一般來說細胞的膜系結構線條清晰、連續(xù)而不斷裂、細胞基質中充滿均勻的精細顆粒，不見明顯的空白區(qū)和顆粒聚集現(xiàn)象。細胞核結構（核膜、核仁、染色質等）層次清晰，無染色質不規(guī)則的聚集和異常的空白區(qū)。3、影響固定的因素（1）PH 7.27.4（2）滲透壓 （3）時間 取得充分的固定效果而時間盡可能短（4）溫度 04（5）固定液的濃度 四氧化鋨1%，醛類1%4%（6）固定液的用量 1020倍于組織塊的體積4、常用固定劑（1）常用四氧化鋨（OSO4）優(yōu)點：對脂類有良好的固定效果； 強氧化劑，與氮原子親和力強，與蛋白分子形成交聯(lián)，穩(wěn)定蛋白質； 鋨與固定的細胞成分結合后使圖像反差增高，即“電子染色”作用； 組織塊不發(fā)生變形，不收縮和膨脹。缺點：對糖類與核酸的固定效果差；因其分子較大，穿透力弱，進入組織速度較慢；是酶的鈍化劑，使細胞酶活性降低，不宜用于細胞化學研究；固定時間過長會使組織變脆，細胞成分抽提；其熔點較低，易揮發(fā)出蒸汽，傷害眼鼻等粘膜；價格昂貴。（2）戊二醛：優(yōu)點：有兩個醛基，可很好地固定蛋白質； 對糖原和糖蛋白有良好的保護作用，彌補了OSO4的不足；滲透力優(yōu)于OSO4；能很好地保存酶活性，可用于細胞化學的研究；可較長時間保存固定組織，適于臨床和野外取材遠距離攜帶或郵寄。 缺點：對脂類固定效果差， 無電子染色作用，不能增加圖像的反差。通常將戊二醛和四氧化哦聯(lián)合作雙固定，即戊二醛前固定，四氧化鋨后固定。（3）多聚甲醛：滲透力強，固定迅速，可以良好的固定結構致密的組織。多聚甲醛和戊二醛常結合使用。（4）高錳酸鉀： 強氧化劑，是磷脂蛋白的良好固定劑，可用于細胞膜性結構的固定。5、固定方式： （1）雙固定法：常用戊二醛作前固定，OsO4作后固定。適用于大多數(shù)情況（2）體內(nèi)原位固定法（3）灌注固定法：特別適于解剖取材困難的柔軟組織或難以滲透、死后變化快的組織和器官。（三）漂洗 1、目的：前固定后使用配制固定液所用同系緩沖液充分漂洗，以除去殘留的固定液，雙重固定時，必須將戊二醛洗凈，才能進入四氧化鋨；四氧化鋨固定后，必須充分洗去殘留的四氧化鋨，以免其與脫水劑作用。2、方法：0.1molPBS10min/次，共3次（四）脫水 1、目的包埋介質充分滲透到組織內(nèi)部；水分殘留會導致電鏡在真空狀態(tài)下引起樣品的急劇變化而無法觀察。2、常用脫水劑：乙醇、丙酮3、方法：梯度脫水，由低濃度向高濃度逐級脫水。50%-70%-80%-90%-95%-100%4、注意事項：脫水要充分；根據(jù)材料的致密度和塊的大小，適當增減脫水時間；如果脫水組織需過夜，可置留于70%乙醇或丙酮中。（五）浸透 目的：用包埋劑逐步浸入組織塊中完全替代、置換脫水劑，這是包買的重要步驟，浸透不充分，將給切片造成困難，若浸透時間長，細胞成分易被抽提。溫度對浸透亦有影響。（六）包埋 1、目的：使浸透到組織塊內(nèi)部的包埋劑在一定條件下（溫度或紫外光照射）聚合為包埋塊，使細胞、組織獲得適當?shù)挠捕?、韌度和彈性，以能承受切片力的作用，最后能夠切出超薄切片。2、理想的包埋劑：聚合前粘度適中，能迅速而均勻地滲透到組織細胞內(nèi)部聚合均勻充分，聚合前后體積變化小，不引起組織變形聚合后有良好的切割性，軟硬度易于調(diào)整能經(jīng)受電子束轟擊高倍放大時不顯示包埋劑本身的結構無毒3、常用的包埋劑環(huán)氧樹脂Epon812，618樹脂和Spurr樹脂 包埋劑配方：環(huán)氧樹脂 Epon812、加速劑 胺類DMP-30硬化劑 酸酐類DDSA 增塑劑 MNA4、包埋方法準備工作：膠囊或橡膠包埋模；硫酸紙；牙簽；注射器（均需在烤箱內(nèi)烤干）；包埋聚合（烤箱內(nèi)：3712h、4524h、6036h）（七）快速固定脫水包埋二、半薄切片 (一)半薄切片觀察的目的和意義選區(qū)和細胞學觀察半薄切片的厚度：0.52m(二)半薄切片的主要步驟1、修塊及切片2、半薄切片染色：甲苯胺藍染色 和 H-E染色三、超薄切片(一)超薄切片的準備工作1、包埋塊的再修整2、載網(wǎng)和支持膜的制備（1）載網(wǎng):常用的有銅網(wǎng)、鎳網(wǎng)，多用200300目，新的載網(wǎng)用前需進行清洗，用丙酮、乙醇浸泡清洗數(shù)次即可（2）支持膜氯仿配制的0.2%0.4%Formvar(聚乙烯醇縮甲醛)液制備支持膜3、切片刀的制備（1）玻璃刀：玻璃刀的制備、選擇，刀槽（2）鉆石刀（二）超薄切片1、超薄切片機的基本原理 超薄切片機的主要部件是進給機構，它的主要部分是一個活動臂，將修好的包埋塊固定在它的一端，進給機構攜帶著包埋塊向刀的方向微小推進，同時活動臂又向下進行切割運動，切下一定厚度的薄片。2、切片 主要步驟包括：裝塊、裝刀、對刀、向刀槽注雙蒸水、切片。 注意：切片時避免振動，保持室內(nèi)溫度恒定。3、展片與撈片：扣網(wǎng)法或牽引法將切片轉移到載網(wǎng)上4、切片厚度的判別 一般利用切片產(chǎn)生的反射光干涉色來判定切片的厚度，它是在日光下由于切片表面反射光與切片下水面反射光發(fā)生干涉，使不同厚度的切片在顯微鏡下呈現(xiàn)不同的干涉色。干涉色與切片厚度近似值關系如下：灰 色：4050 nm銀白色：5070 nm金黃色：7090 nm紫 色：90 nm以上四、染色1、定義 為了充分顯示細胞的微細結構，就要增加超薄切片樣品結構對電子的散射能力，改善反差，這種提高反差的方法叫電子染色2、電子染色現(xiàn)象 以高原子序數(shù)的重金屬鹽作為染色劑，染色中的重金屬鹽離子能與細胞的某些結構成分結合或吸附，而且不同的結構結合能力不同，因而在電鏡觀察時，各種細胞結構對電子產(chǎn)生不同程度的散射，最后得到反差對比明顯的圖像。3、電子密度的概念4、常用的電子染色劑（1）醋酸鈾：主要提高核酸、核蛋白和結締組織纖維成分的反差，但對膜染色效果差。注意： 1、醋酸鈾遇光易分解，應密封避光保存； 2、鈾具有放射性，操作時應采取防護措施。（2）枸櫞酸鉛：主要與切片中的還原鋨作用，提高膜系結構和脂類的反差。注意： 鉛極易與空氣中的二氧化碳結合生成碳酸鉛而造成切片污染，所以保存時隔絕空氣。5、染色方法（1）超薄切片雙重染色：先鈾染后鉛染（2）塊染色：組織塊經(jīng)四氧化鋨固定后，脫水之前，可將之用醋酸鈾飽和液整體染色30min，不僅能提高反差，而且能增強組織成分的穩(wěn)定性。待包埋切片后再用鈾-鉛雙重染色。第二節(jié) 掃描電子顯微鏡樣品制備一、掃描電鏡生物樣品的制備原則（一）生物樣品的特點 1、生物樣品的主要特點是含水量較高，質地較軟，脫水干燥后易出現(xiàn)皺縮、變形，例如一個蘋果，失水干燥后表面出現(xiàn)許多皺紋；2、生物材料機械強度低，對電子束的轟擊耐受能力差；3、生物材料由原子序數(shù)較低的元素如碳、氫、氧、硫、磷等所組成，因而不易被激發(fā)產(chǎn)生二次電子；4、少生物材料的形貌結構易受PH、滲透壓、濕度等環(huán)境變化的影響。（二）掃描電鏡生物樣品制備原則1、盡可能完好地保持樣品表面形貌：這就要求取材小心，注意保護好所要觀察的面（如腸腔、血管腔、肺泡腔），使其不受損傷，并將材料進行適當?shù)那逑?，以除去表面的覆蓋物，但又不要損傷表面形貌。及時進行固定，使樣品保持自然形態(tài)，停止其運動，保持樣品內(nèi)部細胞的正常結構。固定還能使標本硬化，提高對后處理過程中的物理應力的耐受性。2、使樣品脫水干燥并避免因干燥引起的變形：若將含有水分的樣品放入電鏡樣品室，由于樣品水分的揮發(fā)必將破壞鏡筒的真空，影響電子束在鏡筒內(nèi)的行進，影響其在樣品表面的掃描，不能形成清晰地圖像。另一方面，含水樣品在真空下條件下，水分揮發(fā)干燥樣品表面皺縮干癟變形，失去其原來的形貌，也就失去了電鏡觀察研究的價值。因此對一切含水樣品必須進行脫水干燥處理。臨界點干燥法是目前普遍采用的干燥方法。增加樣品表面的導電性和二次電子發(fā)射率：生物樣品與金屬樣品不同，前者導電性不良，電阻率高，當掃描電子束轟擊樣品表面時，可能發(fā)生電荷累計充電，受轟擊區(qū)電子蓄積，與鄰近區(qū)域之間產(chǎn)生電位差，甚至會出現(xiàn)放電現(xiàn)象。而充電區(qū)的負電荷對后續(xù)的掃描電子又將產(chǎn)生排斥，影響其激發(fā)二次電子的能力，使二次電子軌跡偏斜甚至紊亂，影響成像。另外，生物樣品主要是由低原子序數(shù)元素構成，受電子束照射時，二次電子發(fā)射率低，訊號弱，成像質量差，因此在進行電鏡觀察前，需要對樣品表面進行處理，使之導電性增高，表面二次電子發(fā)射率增加。為此，可在樣品表面進行金屬鍍膜或組織導電處理等。金屬膜代替樣品表面發(fā)射二次電子，發(fā)射率提高，圖像訊號增強，并且可防止樣品的荷電效應。二、樣本的初步處理 生物樣品主要分為兩大類：一類是含水量少質硬的結構，如毛發(fā)、牙齒、植物花粉、孢子、種子等。這類樣品含鈣、矽、纖維素等成分，所以只需要進行表面清潔、裝臺（粘膠）、導電處理即可觀察。另一類是含水量較多的組織，如動物的組織器官屬于此類。這類樣品需經(jīng)取材、清洗、固定、脫水等初步處理，再經(jīng)干燥處理和鍍膜才能進行觀察。（一）取材 注意保護觀察面，所切取的樣品比透射電鏡樣品大些，可視樣品臺的大小而變化，一般應小于10mm2，并盡可能薄，厚度在5mm以下，若樣品是懸浮細胞則應注意不要過稀或過密。（二）清潔表面 清除表面粘液、雜質、灰塵等附著物，充分暴露樣品表面。常用的清洗液有蒸餾水、生理鹽水、緩沖液及含酶的清洗液等。根據(jù)研究對象樣品性質特點，采取不同的清洗方法。例如動物臟器腔面含有較多粘液，用含酶的清洗液洗效果好。附著在微絨毛及表面凹陷處的微小雜質顆粒，一般漂洗不易清除，可配以超聲波清洗方法。對于表面干燥的樣品，可用吹氣球或軟毛筆輕輕掃除的方法清潔表面。（三）固定和脫水 固定、漂洗和脫水等處理所用試劑基本上同于透射電鏡樣品的制備方法。常用的固定方法是戊二醛四氧化鋨雙重固定法，是目前公認的最好的方法。三、樣品的干燥 脫水后，需要將樣品中的化學脫水劑徹底揮發(fā)干凈，這就是樣品的干燥。 樣品干燥的方法有：（一）空氣干燥（二）真空干燥（三）冷凍干燥 將新鮮未經(jīng)固定的生物標本快速冷凍，然后在低溫真空條件下，使樣品中水分由冰態(tài)升華而達到干燥的目的。由冰態(tài)升華為氣態(tài)的過程，不形成液氣界面，所以消除或減少了表面張力引起的樣品變形損傷，效果較好，但升華所需時間較長。（四）臨界點干燥四、樣品表面導電處理樣品表面進行導電處理的目的，一是增強導電能力消除荷電效應，二是增加樣品表面二次電子發(fā)射率，加強訊號，提供圖像反差，通常使用的方法是金屬鍍膜法和組織導電處理技術。（一）金屬鍍膜 使樣品表面覆蓋薄層金屬膜，這層薄膜與樣品表面的凹凸形態(tài)完全一致，使標本標本表面的形貌得以反映。要求覆被的金屬有較高的原子序數(shù)，較大的密度，較好的導電性，較低的熔點，常用的金屬有金、鉑、鈀、或金/鉑、鉑/鈀合金。鍍膜的方法有真空鍍膜法和離子濺射法。1、離子濺射法 該法的原理是在低真空條件下產(chǎn)生輝光放電時，由于離子沖擊，使陰極金屬物質有飛散現(xiàn)象，稱為離子散射，濺射飛散的金屬顆粒在樣品表面沉積而使樣品表面鍍一層薄膜。2、真空鍍膜法（二）組織導電技術第三節(jié) 負染色技術一、定義 負染色是相對于正染色而言的，也稱陰性反差染色，細微結構本身不被染色，而是樣品結構周圍被染色，即背景被染色而散射電子的能力強，在熒光屏上樣品結構周圍成像暗，結構本身成像淺，從而提高了結構與其背景的反差，顯示了樣品的結構。負染色技術主要用于細菌，病毒、生物大分子、分離細胞器等研究方面。二、負染色劑（一）負染色劑須具備條件1、密度大，散射電子能力強2、溶解度大不易析出結晶沉淀3、熔點高，經(jīng)電子束轟擊不易揮發(fā)4、分子小易于深入樣品周圍各個細微角落（二）常用的負染色劑 磷鎢酸、磷鎢酸鹽類（鈾、鉀）三、染色前的樣品準備1、提高樣品純度2、懸液樣品濃度要適中3、樣品懸液的pH要接近于負染色的pH四、染色方法1、懸滴法2、漂浮法3、噴霧法第二節(jié) 掃描電鏡樣品的制備第四章 細胞超微結構與病理改變概述超微結構：ultrastructure 利用普通的透射電鏡技術，觀察人體組織的超薄切片，可以看到各類細胞的細胞膜、細胞器、包含物、核膜、染色質及核仁等微細結構，通常稱之為“細胞超微結構”。細胞超微病理學（cell ultrastructure pathology） 利用普通透射電鏡技術，觀察正常細胞的超微結構，以及細胞受到嚴重刺激或代謝障礙時的超微病理改變，形成的一門獨立的學科，稱之為細胞超微病理學，簡稱超微病理學。 第一節(jié) 細胞膜及其特化物 1、細胞膜（cell membrane）又稱質膜（plasma membrane 或plasmalemma），是包裹細胞表面的一層薄膜厚度約710nm，在光學顯微鏡下看不到，此膜是細胞的重要組成成分，他不僅起著界膜和維持細胞代謝的作用，而且在細胞毗鄰面上形成細胞連接，在某些細胞的游離面和基底面也形成許多質膜特殊分化物。2、細胞膜作用：支持保護、細胞粘連、信息傳遞、免疫識別和細胞運動一、細胞膜超微結構及超微病理變化（一）細胞膜結構 化學成分：主要是類脂、蛋白質和少量糖類，還有水、無機鹽和金屬離子。分子結構：液態(tài)鑲嵌模型（雙層類脂分子是膜的結構基礎和主體，其中有磷脂糖脂和少量膽固醇，它們均為雙性分子，其一端為親水極，另一端為脂肪鏈組成的疏水極。兩層類脂分子的親水極都朝向膜的表面，疏水極都朝向膜的中央，它們以其親和力互相結合，類脂分子具有流動性）透射電鏡下，通常膜為一條高電子密度的細線，經(jīng)高倍放大后，觀察細胞膜的垂直切面時，質膜呈現(xiàn)“兩暗夾一明”的結構模式，一般認為兩側的電子致密層，是由于脂質分子的親水極和蛋白質易與鋨、鈾、鉛等重金屬離子結合之故。（二）細胞膜的功能 1. 物質交換作用 擴散：易化擴散（O2、CO2、某些脂溶性物質）；幫助擴散（葡萄糖、氨基酸、水和某些無機離子） 主動運輸：普通細胞膜上的“鈉-鉀泵” 、甲狀腺濾泡上皮細胞膜上的“碘泵”。 胞吞、胞吐：大分子物質2. 膜受體對細胞識別和細胞代謝的調(diào)節(jié)膜受體（membrane receptor）是存在于細胞上的鑲嵌蛋白，主要成分是糖蛋白和糖脂-糖蛋白復合物。它們與細胞外某化學信使（配體）相結合，轉變成細胞內(nèi)效應，以調(diào)節(jié)細胞內(nèi)代謝或是達到細胞相互識別的作用。膜受體有很強的特異性，能選擇性地與激素、神經(jīng)介質、藥物或生長因子等化學配體相結合，如腎上腺素與靶細胞膜（如肝細胞、肌細胞）上的腎上腺素受體結合，通過跨膜信息傳遞轉變或激活調(diào)節(jié)細胞內(nèi)代謝的第二信使，進而調(diào)節(jié)干細胞和肌細胞糖原分解代謝。膜受體的另一功能表現(xiàn)在同種或異種細胞的識別作用上，人體內(nèi)巨噬細胞和中性粒細胞對衰老紅細胞和異物細菌的識別也是比較典型的受體-配體作用。即衰老紅細胞表面唾液酸減少，暴露出半乳糖分子，巨噬細胞膜上有識別半乳糖的受體，所以巨噬細胞只識別衰老紅細胞而不能識別未衰老者。3. 膜抗原及免疫反應人體細胞的細胞膜上具有專用抗原群，如血型抗原和組織相容性抗原，這是標志個體特征的物質。物體器官或組織移植所表現(xiàn)的排斥反應，正是宿主淋巴細胞識別這種抗原物質所引起的免疫反應。(三)細胞膜的病理改變 1.膜破損：出現(xiàn)孔洞、線性中斷。 2.膜形態(tài)改變：形成皰突、囊泡嵌入 髓鞘樣結構。 3.大片膜破裂：胞質溢出。 膜損傷的轉歸：與損傷程度和持續(xù)時間有關 致膜損傷因素：化學性和生物性毒素、缺氧、氧過多、細胞免疫反應、 重金屬離子中毒二、細胞游離面特化物（一）纖毛 1、分布：呼吸道、生殖管道、腦室等柱狀上皮細胞的游離面 2、結構：9+2結構（中心處有兩條獨立微管，周圍有九組二聯(lián)微管，組成輻射輪狀排列形式）3、作用：幫助清除細胞表面粘附的塵埃及分泌物。生殖管道的纖毛擺動協(xié)助生殖細胞移動。4、病理變化：腫脹或膨大呈氣球狀，表現(xiàn)為基質增多，有時纖毛微管組合異常。（二）微絨毛1、分布微絨毛是細胞游離面細胞膜與細胞質伸出的指狀突起，他廣泛存在于各種細胞表面，在胃腸道粘膜柱狀上皮細胞和腎小管上皮細胞的游離面，微絨毛最發(fā)達。2、與纖毛的區(qū)別 微絨毛比纖毛短，細、不規(guī)則，可有分支；微絨毛的胞質成分沒有微管，而是充滿與長軸平行的微絲，它可使微絨毛伸縮；微絨毛的作用是增加細胞表面積，以利于細胞吸收和物質交換。3、病理變化 減少、粘連、融合、增大或出現(xiàn)氣球樣變（患消化道疾患時） 增多（肝炎或藥物中毒時） 稀少或缺如（肝癌時）三、細胞連接緊密連接：tight junction 又稱閉鎖小帶（zonulaocludens）,存在于柱狀上皮細胞的頂部，環(huán)繞細胞周圍呈帶狀。主要作用是封閉細胞間隙，穩(wěn)定細胞環(huán)境。中間連接：intermediate junction常位于緊密連接的深側，也廣泛存在于心肌閏盤及平滑肌細胞間，作用是加強細胞間機械性連接。橋粒： 呈斑狀，廣泛存在于復層鱗狀上皮細胞之間及心肌閏盤處。作用是粘合和加固細胞間機械性連結?？p隙連接：呈斑狀，神經(jīng)細胞、骨細胞、平滑肌細胞和心肌細胞間。生理實驗證明，此處呈低電阻狀態(tài)，有利于興奮傳遞。四、細胞基底面特化物（一）基底膜 在上皮細胞與結締組織交界處，有一層薄膜，稱為基膜（basement membrane）,具有支持和連接作用，同時也是上皮與結締組織進行物質交換的半透膜，分為基板和網(wǎng)板。維生素C缺乏時，毛細血管基板脆弱，易斷裂，是易發(fā)生血管破裂而出血的原因之一。（二）半橋粒 Half desmosome 在上皮細胞與基膜相鄰處，有電子密度很高的附著板，并有許多張力絲附著其上，形如橋粒的一半而得名，半橋粒主要是加強細胞與基膜間的機械連接。（三）質膜內(nèi)褶Plasma membrane infolding,上皮細胞與基板相鄰接面呈基底面，基底面細胞膜向細胞內(nèi)褶疊，形成很深的褶，從而擴大了細胞基底面的表面積，有利于細胞的排泌作用。第二節(jié) 細胞器與包含物細胞質是由基質、細胞器、和包含物組成的?；|： 無定型物質，在電鏡下不易觀察；細胞器：是細胞內(nèi)具有一定形態(tài)結構和功能的小器官，其中包括線粒體、核糖體、內(nèi)質網(wǎng)、高爾基復合體、溶酶體、微絲、微管、微體和中心體等。包含物：細胞代謝的產(chǎn)物或分泌顆粒等一、線粒體(mitochondria)1、線粒體的結構與功能 雙層膜構成的線狀或粒狀小體外膜：7nm，平滑；內(nèi)膜：5nm，向腔內(nèi)褶疊形成線粒體嵴；外腔：內(nèi)外膜間的間隙；內(nèi)腔：內(nèi)膜圍成的腔；基質：內(nèi)外腔中有基質和高電子密度的基質顆粒。線粒體嵴的形狀、數(shù)目和排列方式，以細胞種類不同而異，如心肌、腎上腺皮質球狀帶細胞，其線粒體嵴呈板狀，束狀帶和網(wǎng)狀帶細胞的線粒體嵴呈管狀，觀察其切面呈泡狀。功能：線粒體-能量的供應站2、線粒體的病理變化（1）肥大與增生：肥大指的是體積增大，嵴的數(shù)目正?；蚵杂懈淖?；增生是指數(shù)目增多。服用強心藥地高辛或營養(yǎng)不良，心肌細胞線粒體肥大；慢性酒精中毒，慢性活動性肝炎和肝硬化時，肝細胞內(nèi)出現(xiàn)巨大線粒體；某些腺細胞（如甲狀腺、唾液腺、胰腺和甲狀旁腺）線粒體瘤性增生。（2）線粒體腫脹及水腫變性 線粒體內(nèi)有過多的水潴留，使線粒體的體積增大，質地變空，嵴變短或消失。組織缺血、缺氧及中毒如急慢性病毒性肝炎、酒精性肝炎、免疫性肝硬化時可見巨大線粒體及水中變性或膜斷裂，心肌線粒體也可見肥大或水腫變性。（3）線粒體固縮 體積變小，基質變深，嵴紊亂，顯示線粒體功能低下。心肌細胞內(nèi)出現(xiàn)線粒體固縮，常為心衰指征。（4）基質顆粒增多 正常心肌和肝細胞內(nèi)線粒體基質顆粒很少， 血鈣增多、貧血及中毒時，心肌和肝細胞線粒體基質顆粒明顯增多、增大。二、核糖體（ribosome）1、概念：是由蛋白質和核糖核酸組成的致密顆粒，成不規(guī)則橢圓形，直徑約15nm，由大小亞單位組成。2、存在形式 游離核糖體：游離在細胞質內(nèi)，電鏡下成菊花狀或螺旋念珠狀，合成自身代謝、生長、增殖所需要的內(nèi)源性蛋白質。附膜核糖體：附著在內(nèi)質網(wǎng)膜上，合成向細胞外輸出的分泌性蛋白質和結構蛋白質。3、功能 細胞內(nèi)合成蛋白質的裝配機。4、病理變化 大、小亞單位解聚，嚴重缺氧時，核糖體減少或消失。三、內(nèi)質網(wǎng)（endoplasmic reticulum）1、概念及分類 是一種以單位膜為主構成的重要細胞器，根據(jù)其表面有無核糖體附著分為： （1）粗面內(nèi)質網(wǎng) rough endoplasmic reticulum（RER）：有核糖體附著 （2）滑面內(nèi)質網(wǎng) smooth endoplasmic reticulum (SER）：無核糖體附著2、功能（1）RER：大多數(shù)為扁囊狀或管泡狀，它常與核膜外層相移行，以和高爾基體相連接。在合成蛋白質功能旺盛的細胞里很發(fā)達，如漿細胞和胰腺外分泌細胞。幼稚細胞、低分化細胞及生長迅速的腫瘤細胞，粗面內(nèi)質網(wǎng)不發(fā)達。根據(jù)胞質中粗面內(nèi)質網(wǎng)的多少來估價細胞分化程度和功能狀態(tài)。（2）SER：呈分支管狀或小泡狀，功能多種多樣。肝細胞中：參與解毒、膽汁分泌和脂類代謝；腎上腺皮質細胞、黃體細胞中：參與膽固醇的合成；胃腺壁細胞中：參與調(diào)節(jié)鹽酸分泌和滲透壓；肌細胞中：釋放和獲取鈣離子，與肌細胞收縮、舒張有關。3、病理變化（1）SER增生當細胞受到致癌劑刺激或藥物中毒時，由于細胞解毒功能增強，可以反應性地引起SER增生、聚集。服用巴比妥、黃曲霉素等藥或者在肝炎及膽汁潴留時，常見肝細胞SER增生。 （2）ER擴張及囊泡化輕度擴張常因水分進入扁囊或分泌物潴留所致，擴張進一步發(fā)展，即為許多孤立存在的囊泡，稱為囊泡化。如果因為分泌物潴留，造成的擴張，可見內(nèi)容物有一定的電子密度，這種情況多見于炎癥、缺氧、中毒或營養(yǎng)不良等。（3）RER脫顆粒依附在膜表面的核糖體減少，使細胞合成分泌性蛋白質減少，如農(nóng)藥中毒時甲狀腺濾泡上皮細胞、病毒感染的肝細胞和癌變細胞中，均可見粗面內(nèi)質網(wǎng)脫顆?，F(xiàn)象。（4） 同心性小體 由粗面內(nèi)質網(wǎng)或滑面內(nèi)質網(wǎng)呈同心性膜狀小體，也可以由滑面內(nèi)質網(wǎng)夾以糖原顆粒圍成。小體中心常有線粒體、脂滴或溶酶體，這些小體多見于病毒感染或中毒的肝細胞及胚胎細胞。（5）池內(nèi)隔離由于粗面內(nèi)質網(wǎng)的囊泡內(nèi)突，也有些細胞質成分隨之突入擴張的內(nèi)質網(wǎng)腔內(nèi)，切面上可見到內(nèi)質網(wǎng)池中有許多帶蒂囊泡。這樣現(xiàn)象多見于變性、老化及壞死的細胞內(nèi)。四、 高爾基復合體1、高爾基體（Golgi body） 主體是38層扁平囊，它們成長弓形平行排列，扁囊的凸面稱生成面，有許多小泡，有人認為它們來自粗面內(nèi)質網(wǎng)，通過這些小泡，將內(nèi)質網(wǎng)合成的蛋白質運輸?shù)奖馄侥?。扁囊凹面為分泌面或成熟面，有許多大囊泡，也稱分泌泡，它們由扁平囊局部擴張，并脫落下來，形成分泌顆?；蛉苊阁w。2、高爾基復合體（Golgi complex）是由幾個高爾基體組成，其膜上含有多種糖基轉移酶，能把內(nèi)質網(wǎng)轉運來的蛋白質，加上各種糖的殘基，完成糖蛋白的加工過程，并將蛋白質和脂質分泌物濃縮，然后提供薄膜和運輸，使分泌顆粒以胞吐的形式將內(nèi)容物排出，其包膜參加細胞膜的更新過程。3、病理變化 Go增生和腫脹：囊泡擴張可占據(jù)細胞質的大部分區(qū)域，多見于藥物中毒 Go萎縮和解體：囊泡塌陷、數(shù)量減少或降解，見于中毒或腫瘤細胞。五、溶酶體 Ly：初級溶酶體（Ly ）、次級溶酶體（sLy ）1、概念Lysosome是含有酸性水解酶的小泡，直徑0.20.5m，呈圓形或橢圓形，外包一層單位膜，內(nèi)容物電子密度不等。根據(jù)其是否與底物接觸分為初級溶酶體和次級溶酶體。2、初級溶酶體：圓形、均質狀，電子密度中等或較高。 次級溶酶體：細胞吞噬物或自噬泡與溶酶體膜融合時，形成較大的，電子密度不均的溶酶體。根據(jù)其內(nèi)容物不同，分為自生性溶酶體和外源性溶酶體，其中未被消化的成分殘存其中，形成殘余體。常見的有脂褐素、多泡體和髓鞘樣結構：1）脂褐素：心肌、神經(jīng)細胞、肝細胞，數(shù)量與年齡有關2）多泡體：囊泡，初級溶酶體與吞飲小泡或高爾基復合體融合形成3）髓鞘樣結構：內(nèi)容物呈髓鞘樣同心圓排列，（磷中毒時，腎小管上皮細胞中多見）3、作用消化異物，消化清除細胞本身衰老過盛的細胞器，所以稱其為“細胞內(nèi)消化器官”。因其正常情況下不損傷細胞的其他成分，可視其為細胞內(nèi)防御結構。 Ly膜破裂，可造成細胞組織自溶、壞死。使用溶酶體活化劑，降低溶酶體膜的穩(wěn)定性，使細胞自溶，可用于腫瘤治療?；罨瘎┘耙蛩兀篤-A過多，細菌毒素，pH降低，高氧或缺氧。 使用溶酶體膜穩(wěn)定劑，增強膜的穩(wěn)定性，用于某些急性炎癥或過敏性疾病。穩(wěn)定劑如腎上腺皮質激素、水楊酸等。（六）微管、微絲、微體、中心粒1、微管是蛋白質性微小器官，由和球形微管蛋白分子串聯(lián)成微管絲，再由13根微管蛋白絲圍成中空的圓管，功能：細胞支架，參與細胞內(nèi)物質運輸或作為微器官流動的通路，參與細胞分裂時的運動。2、微絲由伸展性蛋白分子集合而成，含量少且分散，肌細胞，神經(jīng)細胞和上皮細胞中，微絲很發(fā)達，根據(jù)直徑分為細微絲、粗微絲和中間絲。 腫瘤細胞中微絲有增多趨勢，鑒別各類微絲束的性質，在腫瘤鑒別診斷中有重要意義；心肌發(fā)生嚴重病理變化時，常伴有肌絲紊亂和斷裂現(xiàn)象。二、包含物（inclusions）包含物是指胞質內(nèi)除細胞器之外，有一定形態(tài)表現(xiàn)的各種代謝物質的總稱。（一）蛋白質（protein）是細胞結構及機能活動的最重要成分，廣泛存在于各種細胞器內(nèi)外，散在于細胞中的蛋白質多成結晶狀，分子排列有一定規(guī)律，如睪丸間質細胞中的Reinkes結晶和嗜酸性細胞中特殊顆粒內(nèi)的晶體等。（二）糖原（glycogen） 高電子密度的不規(guī)則顆粒，它是碳水化合物在細胞內(nèi)的主要表現(xiàn)形式，廣泛存在，特別是肝細胞內(nèi)極其豐富?？梢苑譃?、兩型。（三）脂類（lipid）在細胞質內(nèi)呈大小不一、電子密度高低不等的球形或滴狀物。由脂肪酸、甘油三酯、膽固醇和膽固醇酯組成，簡稱脂滴。脂肪細胞和腎上腺皮質細胞中特別多。病理狀況下，心肌和肝細胞內(nèi)有大量脂肪堆積，形成大小不等的密集脂滴，通常稱之為脂肪變性。第三節(jié) 細胞核1、組成：分裂間期的細胞核由核膜、染色質、核仁和基質組成 2、功能：儲存信息的場所，同時控制著細胞的代謝、生長、分化和增殖過程 3、形狀：與細胞的外形有一定關系，柱狀細胞的核多呈橢圓形 ；梭形細胞的核多為桿狀；其他形狀的細胞，核多呈圓形，少數(shù)呈腎形或分葉形。4、核、質比例：多數(shù)細胞小于1；幼稚細胞或腫瘤細胞的多為大于或等于15、核畸變：細胞受到病理因素的刺激后，細胞核發(fā)生變形，首先表現(xiàn)為核周邊發(fā)生鋸齒形改變，之后發(fā)生扭曲或不規(guī)則分葉等畸形變化，通稱核畸變。各種惡性腫瘤細胞中核畸形現(xiàn)象最為常見。6、病理變化：核固縮、核破裂及核溶解。 核固縮：核膜皺縮，染色質凝集呈致密團塊 核破裂：核膜部分斷裂，染色質凝聚成小塊，并可逸出核膜外核溶解：核膜保存，但核內(nèi)容物部分或全部喪失上述病理變化多伴有細胞壞死性變化一、核膜（nuclear membrane）（一）核膜的結構 雙層膜：內(nèi)層膜常有染色質附著，并且附有2080nm厚的纖維狀物質，電子密度稍高，稱為致密層；外膜表面常有許多核糖體附著，并常與粗面內(nèi)質網(wǎng)相連接 核周隙：內(nèi)外膜間，寬約1530nm，一般見不到有形物質。其寬度受固定、染色技術、生理病理狀態(tài)的影響 核 孔：核孔處核膜內(nèi)外層融合，核孔的多少與細胞種類和功能狀態(tài)有關，一般代謝旺盛的細胞核孔多且大，幼稚細胞或腫瘤細胞、成熟及衰老的細胞核孔逐漸減少（二）核膜的病理變化1、假包涵體：核膜曲折，內(nèi)陷較深，胞質隨之陷入，在切片上可見細胞核內(nèi)由核膜包裹的胞質小體。2、病毒感染引起核膜曲折不平3、核膜外突及大泡形成，或卷曲成同心圓小體二、染色質（chromatin）1、概念 主要由DNA和蛋白質按一定的比例組合而成的絲狀物，也含有極少量的RNA（0.5%1%）。根據(jù)他們的功能狀態(tài)不同，分裂間期核內(nèi)染色質可區(qū)別為常染色質和異染色質。2、常染色質：電子密度很低的細絮狀物，高分辨電鏡下為直徑3nm的細原纖維絲，它是分裂間期染色體非卷曲部分，其中DNA參與RNA及蛋白質合成，細胞間期的代謝活動有一定的控制作用。異染色質：分裂間期不活動的卷曲部分，此處的DNA與組蛋白結合緊密，經(jīng)過固定染色后，高分辨電鏡下，其是由直徑1025nm的原纖維絲緊密纏繞而成。根據(jù)異染色質的分布，可區(qū)別為核仁相隨染色質、周圍染色質和分散染色質三種。3、病理變化（1）染色質均質化、斑塊狀 見于細胞壞死、凋亡出現(xiàn)核固縮、核碎裂（2）圈形細胞核 核壞死時，異染色質邊集，核的中部電子 密度低，使核呈圈狀。 見于某些惡性腫瘤細胞三、核仁（nucleolus）1、功能：合成核蛋白體和核糖核酸的場所2、組成：顆粒 原纖維成分 無定形基質 核仁相隨染色質3、核仁的病理變化 1）核仁增多、增大：見于新生細胞、惡 性腫瘤細胞和胚胎細胞等 2）核仁解離：藥物中毒或致癌因素刺激 3）圈狀核仁：核仁退變，蛋白合成受阻四、核基質1、組成：水、酶類、無機鹽2、病理變化： 1、核內(nèi)小管 2、核小體 3、包涵體（真、假）第四節(jié) 常見病態(tài)細胞的超微結構特征一、急性致死性損傷及壞死(一)可逆階段的細胞超微結構受損細胞發(fā)生改變到不可逆之前，若損傷因素去除細胞有可能恢復正常，表現(xiàn)特點為：1核染色質凝集2Mi腫脹，嵴紊亂或減少，擴張成空泡狀，甚至外膜破裂，或Mi基質致密。3ER擴張，RER脫顆粒4Ly腫脹5細胞基質腫脹，糖原減少。(二)不可逆階段的細胞超微結構細胞受損嚴重而不可恢復，將進入死亡，其變化除了上述可逆階段變化外，還可見：1Mi內(nèi)出現(xiàn)大量絮狀致密斑。2ER、Gi膜破裂中斷，質膜破損。3Ly破裂，釋放也酶，因水解作用產(chǎn)生大量髓鞘樣結構。4核糖體消失。 5核固縮、溶解或破碎，或核膜呈齒狀、核質均質化。二、缺氧性損傷缺氧是細胞損傷最常見的因素，如血管梗塞、CO中毒、窒息、呼吸道阻塞等。缺氧早期：細胞超微結構改變同可逆階段變化較長時間缺氧：同不可逆階段變化三、病毒性損傷細胞膜：病毒吞飲泡、多核巨細胞內(nèi)質網(wǎng)：擴張產(chǎn)生巨大囊泡、內(nèi)質網(wǎng)脫顆?；蛟錾鼗乇P曲細胞核：核膜下陷或突出 、髓鞘樣結構、染色質濃縮或聚集、DNA轉錄受阻或變異四、肥大、萎縮和老化的細胞五、免疫性損傷1、細胞膜上抗原抗體結合，使細胞膜發(fā)生小孔性破壞，進而導致細胞內(nèi)外水、電解質平衡失調(diào)2、外來抗原在體內(nèi)形成抗原-抗體復合物，進而抗原-抗體復合物吸附在細胞膜上，激活補體、破壞細胞膜3、抗原抗體復合物沉積在毛細血管基底膜上，使基板和內(nèi)皮細胞膜破壞。白細胞游出和浸潤，釋放其溶酶體酶，造成細胞破壞六、凋亡細胞1、細胞凋亡(apoptosis)：又稱細胞程序性死亡，是多細胞有機體為調(diào)控機體發(fā)育，維護內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞主動死亡過程2、細胞凋亡的意義：多細胞生物保證個體正常發(fā)育成熟和維護生命3、特征： 1）凋亡的起始 2）凋亡小體形成第五章 骨骼肌超微病理改變第一節(jié) 骨骼肌超微結構（ultrustructure of skeletal muscles）一、骨骼肌一般結構骨骼肌纖維表面的質膜稱為肌膜（sarcolemma）肌膜外面有基板緊密貼附。肌纖維內(nèi)有多個甚至幾百個橢圓形細胞核，一般位于肌纖維邊緣近肌膜處。骨骼肌纖維的細胞質也成為肌質（sarcoplasm），肌質內(nèi)充滿與細胞長軸平行排列的肌原纖維（mylfibril），肌原纖維間有較多線粒體，糖原顆粒等，此外還含有肌紅蛋白及脂滴。肌原纖維很細，肌原纖維上出現(xiàn)的明暗相間的橫紋對應地排列