酵母菌細胞大小的測定.doc

實驗七 酵母菌細胞大小的測定一、實驗目的1. 了解測量微生物大小的原理；2. 學習并掌握接目測微尺的校正方法及微生物大小的測定方法，增強微生物細胞大小的感性認識。二、實驗材料1. 菌種：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌懸液2. 儀器或其他用具：顯微鏡，接目測微尺，鏡臺測微尺，載玻片，蓋玻片三、實驗原理微生物細胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物細胞個體較小，需要在顯微鏡下借助于特殊的測量工具測微尺來測定其大小。測微尺包括鏡臺測微尺和接目測微尺。鏡臺測微尺是一張中央部分刻有精確等分線的載玻片，專門用于校定接目鏡測微尺每小格的相對長度。通常，刻度的總長是1mm，被等分為100格，每格0.01mm（即10m）。鏡臺測微尺不直接用來測量細胞的大小。接目測微尺是一塊可以放入接目鏡的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度，有等分為50小格和100小格的兩種。在測量時將接目測微尺放在目鏡的隔板上，即可來測量經(jīng)顯微鏡放大后的細胞物象。也有專用的目鏡，里面已經(jīng)安放好了接目測微尺。由于接目測微尺所測量的是經(jīng)顯微鏡放大后的細胞物象，因此，在不同的顯微鏡或不同的目鏡和物鏡組合放大倍數(shù)不同，接目鏡測微尺每一小格所代表的實際長度也不一樣。所以，在用接目測微尺測量微生物大小之前，必須先用鏡臺測微尺校定接目鏡測微尺，以確定該顯微鏡在特定放大倍數(shù)的目鏡和物鏡下，接目鏡測微尺每一小格所代表的實際長度，然后根據(jù)微生物細胞相當于的接目鏡測微尺格數(shù)，計算出微生物細胞的實際大小。圖7-1測微尺的安裝 圖7-2目鏡測微尺 圖7-3用鏡臺測微尺校正接目測微尺四、操作步驟1. 裝接目測微尺：取下顯微鏡的目鏡，換上專用目鏡。如果沒有專用的目鏡，則取下顯微鏡的目鏡，旋下透鏡，將接目鏡測微尺刻度朝下放在接目鏡的隔板上，再旋上目鏡透鏡，將裝有測微尺的目鏡裝回鏡筒。2. 接目測微尺的標定：1) 放鏡臺測微尺：將鏡臺測微尺刻度面朝上固定在顯微鏡的載物臺上，注意不可放反。2) 標定：將低倍鏡轉入光路，鏡臺測微尺有刻度的部分移至視野中央，調節(jié)焦距，當清晰地看到鏡臺測微尺的刻度后，轉動目鏡使接目測微尺與鏡臺測微尺的刻度相平行。利用移動鈕移動鏡臺測微尺，使兩尺在某一區(qū)域內兩線完全重合，然后分別數(shù)出兩重合線之間鏡臺測微尺和接目測微尺所占的格數(shù)。（使接目測微尺的一條刻度線與鏡臺測微尺的一條刻度線相重合，再尋另一重合線，分別數(shù)出其間鏡臺測微尺和接目測微尺所占的格數(shù)）3) 用同樣的方法，在高倍鏡下對接目測微尺進行標定。（觀察時光線不宜過強，否則難以找到鏡臺測微尺的刻度，換高倍鏡標定時，務必十分細心，防止接物鏡壓壞鏡臺測微尺和損壞鏡頭）4) 計算：已知鏡臺測微尺每格長10m，根據(jù)下列公式即可分別計算出在不同放大倍數(shù)下，接目測微尺每格所代表的長度。接目測微尺每格長度（m）=10n/mn：兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)m：兩重合線間接目測微尺格數(shù)3. 微生物細胞大小的測量接目測微尺標定完畢后，取下鏡臺測微尺，換上微生物標本片，將其固定在載物臺上，先用低倍鏡找到標本片圖象，然后根據(jù)不同的微生物對象分別轉換到高倍鏡下，用接目測微尺測量微生物細胞的直徑或寬和長所占的格數(shù)，再依據(jù)所標定的高倍鏡每一格的實際長度計算細胞的實際大小。通常測定對數(shù)生長期菌體來代表該菌的大小，為了盡量減小實驗誤差，應在同一標本片上測量1020個細胞，取其平均值作為該菌的大小。維護：測量完畢，換上原有顯微鏡目鏡（或取出接目測微尺，目鏡放回鏡筒），用擦鏡紙將測微尺擦拭干凈后放回盒內保存，并按照顯微鏡的使用和維護方法擦拭物鏡。五、實驗內容1. 分別在低倍鏡、高倍鏡下對接目測微尺進行標定。2. 高倍鏡下測定釀酒酵母細胞的大小。六、實驗報告1. 目鏡測微尺標定結果：低倍鏡下倍目鏡測微尺每格長度是m。高倍鏡下倍目鏡測微尺每格長度為m。2. 菌體大小測