高級生化考題(小字).doc

名詞解釋 蛋白質(zhì)部分1. 鹽溶：低濃度的中性鹽可以增加球狀蛋白的溶解度，此現(xiàn)象稱為鹽溶。2. 鹽析：當鹽濃度增高時，如半飽和或飽和狀態(tài)，蛋白質(zhì)溶解度降低，從水溶液中沉淀出來。此現(xiàn)象稱為鹽析。3. 透析：利用蛋白質(zhì)大分子不能透過半透膜，而小分子雜質(zhì)如無機鹽、單糖等能透過半透膜的性質(zhì)，使蛋白質(zhì)與小分子雜質(zhì)分開。4. 超過濾：利用壓力，強行使水和其他小分子雜質(zhì)透過半透膜，而蛋白質(zhì)被截留在膜上以達到分離目的的方法，對蛋白質(zhì)溶液有分級作用，且有濃縮和除鹽作用，可分離不同分子量的蛋白質(zhì)。5.高效液相層析：6. 電泳：指帶電粒子在電場中向與其自身帶相反電荷的電極移動的現(xiàn)象。7.親和層析：利用生物大分子物質(zhì)能與相應(yīng)的配基專一可逆結(jié)合的性質(zhì)，如蛋白質(zhì)分子能對配基專一性地結(jié)合或復(fù)合物，改變條件不能解離，利用這種特性而設(shè)計的一種層析技術(shù)。8. 離子交換層析：是一種用離子交換脂作為介質(zhì)，即離子交換劑的層析法。9.蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)：指多肽鏈上各種氨基酸的排列順序，即氨基酸殘基序列。10.二面角：由C2-N, 單鍵旋轉(zhuǎn)和C22-C2單鍵旋轉(zhuǎn)角度決定的相鄰二個肽平面在空間上的相對位置的夾角。 11.二級結(jié)構(gòu)：由多肽鏈主鏈骨架折疊產(chǎn)生的由H鍵等次級鍵系得構(gòu)象單元或局部空間結(jié)構(gòu)。 主要是肽鍵本身的盤旋方式而不涉及側(cè)鏈的構(gòu)象及其它鏈的關(guān)系。 12.超二級結(jié)構(gòu)：由若干相鄰的二級結(jié)構(gòu)單元組合在一起，彼此相互作用，形成有規(guī)則的在空間上能辨認的二級結(jié)構(gòu)組合體，充當三級結(jié)構(gòu)的構(gòu)體。 13.結(jié)構(gòu)域：對于較大的蛋白質(zhì)分子或亞基，多肽鍵在超二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上組裝或二個或倆個以上的相對獨立的三維實體，再締合成三級結(jié)構(gòu)，這種相對獨立的三維實體既結(jié)構(gòu)域。14.貝塔轉(zhuǎn)角：由四個連續(xù)的AA殘基組成，由第一個AA的C=0與第四個AA的H-N形成H鍵，兩個Ca原子之間的距離小于0.5nm.15.伽瑪轉(zhuǎn)角：伽瑪轉(zhuǎn)角由多肽鏈上3個連續(xù)的AA殘基組成，主鏈骨架以180度返回折疊，第一個殘基的C=0與第三個殘基上的N-H形成氫鍵。16.歐米格環(huán)：由不超過16個殘基組成的肽段，環(huán)的首尾兩個殘基間的距離小于0.1 nm ，以親水殘基為主，故總位于蛋白質(zhì)分子表面，該環(huán)與生物活性有關(guān)。 17.DNS-CL-EDMAN 法：是將高靈敏度的DNS技術(shù)與能連續(xù)降解的Edman反應(yīng)有機結(jié)合起來的一種測定氨基酸排列順序的方法。18.Bohr效應(yīng)：血紅蛋白與氧氣的結(jié)合，受PH及二氧化碳濃度的影響，在周圍組織低PH及高二氧化碳的情況下，血紅蛋白與氧氣的親和力下降，反之在肺部微血管中，二氧化碳被釋放，氫離子濃度下降，PH值升高，血紅蛋白與氧氣的親和力下降，這種PH與二氧化碳濃度對血紅蛋白與氧氣的結(jié)合及釋放的效應(yīng)稱為Bohr效應(yīng)。1、 簡述考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)含量的原理及該法的主要優(yōu)缺點？答：考馬斯亮G-250在游離狀態(tài)下是棕紅色，當它與蛋白質(zhì)通過疏水作用結(jié)合后，呈現(xiàn)藍色，前者的最大吸收在465nm，后者在595nm，在一定的范圍內(nèi)，吸收度與蛋白質(zhì)含量成正比?？捎糜诘鞍踪|(zhì)的定量測定。該法反應(yīng)十分迅速，僅2分鐘左右蛋白質(zhì)與考馬斯亮G-250即可達到穩(wěn)定結(jié)合，反映比較靈敏，重復(fù)性也好，但tris,EDTA,尿素等對測定有一定的干擾。2、 根據(jù)分子大小不同分離純化蛋白質(zhì)的方法有哪些？舉出三種方法簡述其原理？答：透析，超過濾，密度梯度區(qū)帶離心，凝膠過濾，高效液相層析。透析：利用蛋白質(zhì)大分子不能透過半透膜，而小分子雜質(zhì)如無機鹽、單糖等能透過半透膜的性質(zhì)，使蛋白質(zhì)與小分子雜質(zhì)分開。超過濾：利用壓力，強行使水和其他小分子雜質(zhì)透過半透膜，而蛋白質(zhì)被截留在膜上以達到分離目的的方法，對蛋白質(zhì)溶液有分級作用，且有濃縮和除鹽作用，可分離不同分子量的蛋白質(zhì)。凝膠過濾法：當大小不同的蛋白質(zhì)分子混合物流經(jīng)凝膠層析柱時，必凝膠珠網(wǎng)孔達的蛋白質(zhì)分子不能進入珠內(nèi)網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)，而被排除在凝膠珠外，隨著緩沖液在凝膠珠之間的空隙向下移動，并最先流出柱外，比網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)分子能夠不同程度地進出凝膠珠網(wǎng)孔內(nèi)外，從而這些大小不同的蛋白質(zhì)所經(jīng)的路徑不同，隨著緩沖液向下移動，較大的蛋白質(zhì)分子移動路程較短，先下來。較小的后下來。3、 根據(jù)溶解度差異分離純化蛋白質(zhì)的方法有哪些？舉出三種方法簡述其原理？答：鹽溶，鹽析，有機溶劑法，蛋白質(zhì)沉淀劑法，等電沉淀法。鹽溶：低濃度的中性鹽可以增加球狀蛋白的溶解度，此現(xiàn)象稱為鹽溶。主要是由于蛋白質(zhì)分子吸附某種鹽離子后代電層使蛋白質(zhì)分子彼此排斥，而蛋白質(zhì)分子與水分子之間的相互作用卻加強，因而溶解度增高。鹽析：當鹽濃度增高時，如半飽和或飽和狀態(tài)，蛋白質(zhì)溶解度降低，從水溶液中沉淀出來。此現(xiàn)象稱為鹽析。主要是由于大量中性鹽的加入，鹽離子與水這種偶極分子作用，使水分子的活度降低，原來溶液中的大部分甚至全部的自由水轉(zhuǎn)變?yōu)辂}離子的水化物，導(dǎo)致蛋白質(zhì)的水和程度減少，從而驅(qū)使蛋白質(zhì)的溶解度降低。蛋白質(zhì)沉淀劑法：向無細胞抽提液加入沉淀劑，如醋酸鋁，丹寧酸或離子型表面活性劑等，可以使一些雜蛋白或粘多糖發(fā)生沉淀，沉淀物可以用離心分離除去。4、 根據(jù)電荷的差異分離純化蛋白質(zhì)的方法有哪些？簡述其原理？答：電泳，離子交換層析。電泳：指帶電粒子在電場中向與其自身帶相反電荷的電極移動的現(xiàn)象。由于蛋白質(zhì)具有兩電性質(zhì)，當?shù)鞍踪|(zhì)溶液PH大于等電點時，該蛋白質(zhì)溶液帶負電荷，在電場中向正極移動，反之則帶正電荷，在電場中向負極移動。不同的帶電顆粒在同一電場中的速度不同，故可分離出不同的蛋白質(zhì)。離子交換層析：是一種用離子交換脂作為介質(zhì)，即離子交換劑的層析法。陽離子交換樹脂含有酸性基團，可以解離出H，當溶液中含有其他陽離子時，他們可以交換而結(jié)合在樹脂上。陰離子交換樹脂含有堿性基團，可以解離出OH，當溶液中含有其他陰離子時，他們可以交換而結(jié)合在樹脂上。由于蛋白質(zhì)有兩性性質(zhì)，當?shù)鞍踪|(zhì)溶液PH大于等電點時，該蛋白帶負電，可結(jié)合于陰離子交換劑上，當?shù)鞍踪|(zhì)溶液PH小于等電點時，該蛋白帶正電，可結(jié)合于陽離子交換劑上，即使帶同電荷的蛋白質(zhì)分子，由于所帶的電荷不同，與離子交換劑的親和能力也不同，利用這種出差異可分離蛋白質(zhì)。5、 測定蛋白質(zhì)分子量的方法有哪些？舉出三種方法簡述其原理？答：凝膠過濾法，凝膠薄板層析法，SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法，聚丙烯酰胺梯度凝膠電泳法，滲透壓法，超離心沉降速度法，沉降平衡法，毛細管電泳法。凝膠過濾法：當大小不同的蛋白質(zhì)分子混合物流經(jīng)凝膠層析柱時，必凝膠珠網(wǎng)孔達的蛋白質(zhì)分子不能進入珠內(nèi)網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)，而被排除在凝膠珠外，隨著緩沖液在凝膠珠之間的空隙向下移動，并最先流出柱外，比網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)分子能夠不同程度地進出凝膠珠網(wǎng)孔內(nèi)外，從而這些大小不同的蛋白質(zhì)所經(jīng)的路徑不同，隨著緩沖液向下移動，較大的蛋白質(zhì)分子移動路程較短，先下來。較小的后下來。后根據(jù)公式算出。凝膠薄板層析法：薄板層析即在玻璃上涂上一層支持劑作固定相，用緩沖液作流動相，根據(jù)樣品中各組分與固定相親和力的不同使物質(zhì)得到分離的裝置。當流動相溶液沿薄板點有樣品的一端向另一端流動時，全排組的大分子物質(zhì)在板上遷移的速度最快，小分子速度最慢。在同一塊板上，可以用一系列不同分子量的標準蛋白質(zhì)和未知蛋白質(zhì)同時層析，后可用濾紙復(fù)印，用適當方法染色，顯示出層析位置。在一定有效分離范圍內(nèi)，球形蛋白質(zhì)的相對遷移距離與分子量的對數(shù)作圖是一條直線，有未知蛋白質(zhì)的相對位移可求出分子量。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法：在含有琉基乙醇的SDS溶液中煮沸蛋白質(zhì)，SDS結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上，并使組成蛋白質(zhì)分子的各條鏈分開，SDS復(fù)合物的特性能使其在凝膠電泳中的遷移不受蛋白質(zhì)原有的電荷的影響，遷移率成為復(fù)合物長度的函數(shù)，而長度又與分子量成正比，所以其關(guān)系是6、 高效液相色譜儀是依據(jù)什么原理設(shè)計出來的？它有哪些優(yōu)點？答：采用大幅降低支持物的顆粒度，同時增加壓力，以維持必要的流速而設(shè)計的層析方法。利用混合中各組分理化性質(zhì)的差別，使各組分以不同程度分布在固相和流動相中，流動相推動樣品中各組分經(jīng)固定相向前遷移使各組分遷移速度不同，而對物質(zhì)進行分離的方法。優(yōu)點：分離效率高，應(yīng)用范圍廣，分析速度快，樣品用量少，易于自動化等。7、 以磺酸型陽離子交換柱為例，簡述從混合氨基酸中分離各種氨基酸的原理？答：離子交換樹脂是人工合成的，具有酸性基團或堿性基團，并具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高聚物。（1） 先用PH3.25的檸檬酸鈉緩沖液來平衡樹脂。即將其處理成鈉型。（2） 將氨基酸混合液調(diào)PH值至2.2，即小于等電點，在低PH離子強度下，由于緩沖液H離子濃度大，H離子解離被抑制，使氨基酸帶正電荷。（3） 灌注：由于靜電引力，帶正電荷的氨基酸被樹脂吸附，與樹脂上的鈉離子發(fā)生交換，將鈉離子交換下來。（4） 洗脫：用PH逐漸增高的緩沖液洗脫。分離出游離氨基酸。8、簡述蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)測定的基本步驟？ 答：（1）分離提純待分析的蛋白質(zhì)樣品。（2）測定蛋白質(zhì)的分子量（3）測定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈數(shù)目。（4）拆分蛋白質(zhì)分子中的多肽鏈。（5）對每條肽鏈進行氨基酸組成分析。 （6）鑒定多肽鏈的N-末端或C-末端殘基。（7）多肽鏈部分裂解及肽片斷的分離。（8）測定各肽段的氨基酸順序。（9）建立完整多肽的氨基酸順序。（10）確定二硫鍵的位置。9、蛋白質(zhì)N-端分析的方法有哪些？舉出三種方法簡述其原理答：2，4-二硝基氟苯法（DNP法），二甲氨基萘磺酰氯法（DNS法），Edman 降解法，DABIT/PITC雙偶合法，氨肽酶法。10、測定蛋白質(zhì)肽段氨基酸排列順序的方法有哪些？舉出兩種方法簡述其原理？答：減數(shù)Edman 降解法，DNSCLEdman法，酶法，蛋白質(zhì)自動順序分析儀法。DNSCLEdman法：該法是將高靈敏度的DNS技術(shù)與能降解的Edman反應(yīng)有機地結(jié)合起來的一種測序方法。將樣品用水溶解后，取少量樣品用DNSCL法測氨基酸N端的氨基酸，在一定條件下反應(yīng)后，抽取N端形成的PHT氨基酸棄去，此時第二個氨基酸變?yōu)镹末端，將上述抽取后的肽段，再以DNS法測定N端氨基酸，剩下的溶液再按Edman法將此N端氨基酸脫除 ，反復(fù)測定。11、簡述蛋白質(zhì)含量（濃度）測定的方法？ 1、凱氏定氮法：每一種蛋白質(zhì)都有其恒定的含氮量， 根據(jù)含氮量可計算蛋白質(zhì)的含量。降一定的蛋白質(zhì)用濃硫酸消化分解，使有機氮全部轉(zhuǎn)化為硫酸氨，再與NAOH生成氫氧化銨，加熱后得到的氨氣被吸收于標準鹽酸中，用反滴定法滴定剩余的酸?；蛴门鹚嵛?，吸收氨氣后，氫離子濃度降低，再用鹽酸滴定，使硼酸恢復(fù)到原來的氫離子濃度，所用的鹽酸即氨氣的MOL數(shù)，求得蛋白質(zhì)中含氮量， 再換算為蛋白質(zhì)的含量。 2、雙縮脲法：雙縮脲在堿性溶液中與銅離子作用生成紫紅色的絡(luò)合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)的肽鍵也能與銅離子結(jié)合，產(chǎn)生的紅色絡(luò)合物在540nm波長處有最大吸收，且顏色與蛋白質(zhì)的含量成正比，而與蛋白質(zhì)分子量和氨基酸組成無關(guān)，可以進行定量測定。該法常用于0.510mg/ml蛋白質(zhì)濃度的測定。 3、福林酚試劑法：第一步即雙縮脲反應(yīng)，第二步是生成的蛋白質(zhì)CU+絡(luò)合物，用磷鉬酸磷鎢酸試劑還原，生成深藍色的產(chǎn)物，其顏色深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比。定量范圍：0.020.5mg/ml。4、考馬斯亮G-250在游離狀態(tài)下是棕紅色，當它與蛋白質(zhì)通過疏水作用結(jié)合后，呈現(xiàn)藍色，前者的最大吸收在465nm，后者在595nm，在一定的范圍內(nèi)，吸收度與蛋白質(zhì)含量成正比?？捎糜诘鞍踪|(zhì)的定量測定。5、紫外吸收法：大多數(shù)蛋白質(zhì)在275280nm處有一吸收高峰， 在一定范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液在280nm的光吸收值與其濃度成正比。測定范圍：0.11mg/ml。12、簡述血紅蛋白的結(jié)構(gòu)特點及其氧和特點？ 答：血紅蛋白是一種球狀的色素蛋白，分子量66700，由珠蛋白和血紅素結(jié)合。血紅蛋白由四個亞基組成（a2b2），每個亞基含一條多肽鏈和一個血紅素輔基。所以血紅蛋分子上有四個O2的結(jié)合部位。血紅蛋白的四個亞基按四面體排布，亞基間凹凸互補。在其四級結(jié)構(gòu)中，兩個a亞基之間或兩個b亞基間的接觸點很少，但在a1b1和a2b2之間的接觸點很多，很大部分由氨基酸殘基的疏水側(cè)鏈組成，在4條多肽鏈之間有一個中央空隙。 氧和特點： 1、O2與血紅蛋白結(jié)合后，能促使更多的02與同一血紅蛋白分子結(jié)合。2、血紅蛋白對O2的親和性有賴于PH值和co2的影響。3、血紅蛋白對O2的親和性還進一步受像2，3二磷酸苷油酸這樣的有機磷酸化合物影響，更有利于血紅蛋白在組織中釋放O2。13、H+，CO2，BPG對血紅蛋白結(jié)合氧的影響？ 答：血紅蛋白與氧氣的結(jié)合，受PH及二氧化碳濃度的影響，在周圍組織低PH及高二氧化碳的情況下，血紅蛋白與氧氣的親和力下降，反之在肺部微血管中，二氧化碳被釋放，氫離子濃度下降，PH值升高，血紅蛋白與氧氣的親和力下降。BPG濃度增高血紅蛋白與氧氣的親和力下降，反之親和力增高。核 酸 筆 記1、衛(wèi)星DNA：主要分布在染色體的著絲粒部位，由非常短的串聯(lián)重復(fù)DNA序列組成。因其具低復(fù)雜性，又稱簡單序列DNA，又因為其不同尋常的核苷酸組成，經(jīng)常在浮力密度梯度離心中從整個基因組DNA中分離成一個或多個“衛(wèi)星”條帶，故稱為衛(wèi)星DNA。2、小衛(wèi)星DNA：一般位于端粒處，是由高度重復(fù)序列組成的小基因簇。兩種形式：1.真核生物的端粒DNA，由幾千個堿基的特性的五核苷酸或六核苷酸串聯(lián)重復(fù)形成，2.高度可變的小衛(wèi)星DNA，位于亞端粒區(qū)域在不同的個體和基因的不同位點上。3、VNTRs序列：同向重復(fù)序列可變數(shù)，不僅用于基因范圍的遺傳作用，還廣泛用于DNA印跡的診斷標記。4、DNA指紋：在人類VNTRs位點15kb，但人的總DNA提取后用限制性內(nèi)切酶切成不同的片斷，然后以VNTRs中的特異序列為探針進行southerm雜交，可發(fā)現(xiàn)陽性片斷的大小各不相同。由于不同個體的這種串聯(lián)重復(fù)的數(shù)目和位置各不相同，所以VNTRs的southerm雜交帶譜就具有高度的個體特異性，稱DNA指紋。5、衛(wèi)星DNA：重復(fù)單位序列最短，具高度多態(tài)性，在遺傳上高度保守，是理想的遺傳標志。衛(wèi)星RNA：是指一些必須依賴于輔助病毒的才能復(fù)制的小分子單鏈RNA片段，它被包裝在輔助病毒的包體中。6、信息溝：大溝，小溝，特別是大溝，對于在遺傳上有重要功能的蛋白質(zhì)識別DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)上的特定信息是非常重要的，只有在溝內(nèi)pr才能識別。7、H-DNA：含有鏡像重復(fù)的多聚py/多聚pu序列的DNA可通過hoogsteen 堿基配對形成的分子內(nèi)三鏈結(jié)構(gòu)。8、變性：在加熱或極端ph條件下，核酸的黏度會突然消失，實質(zhì)是配對的堿基間的氫鍵斷裂和相鄰堿基間的堿基堆積力消失。變性因素：1.熱力2.強堿3.強酸（甲酸等）4.有機溶劑5.變性劑（尿素，甲酰胺等）6.射線7.機械力9、TM溶解溫度：DNA熱變性發(fā)生在一個很窄的溫度范圍內(nèi)，通常把熱變性過程中光吸收達最大吸收一半時的溫度稱TM。TM值的影響因素：1.核酸的均一程度，均一性越高的樣品變性過程的溫度范圍越小2.TM值與GC含量成正比3.與介質(zhì)離子強度成正比。10、復(fù)性：變性DNA在一定條件下又可使兩條彼此分開的鏈重新締合成雙螺旋結(jié)構(gòu)。復(fù)性條件：1.有足夠的鹽濃度消除靜電斥力，常用鹽濃度0.150.50mol/l的Nacl；2.有足夠的溫度破壞無規(guī)則的氫鍵，一般比TM低2025度。復(fù)性的影響因素：1.DNA片斷的大小2. DNA的濃度3. DNA重復(fù)性4. 溫度5.鹽濃度復(fù)性的檢測：1.減色效應(yīng),紫外光吸收減少30% 2. 羥基磷灰石柱層析，對雙鏈DNA吸附力較強，不易吸附單鏈。11、核酸的非酶促轉(zhuǎn)化：核酸作為遺傳信息的載體部分是因為它遺傳上的穩(wěn)定性，它并非一成不變的，即使在生理條件下，在無酶催化下，也發(fā)生很慢的化學(xué)轉(zhuǎn)化，1.脫氨基作用2.N-B-糖苷鍵的水解作用3. DNA鏈的呼吸作用12、核酸的酶促反應(yīng)：1.DNA的甲基化：甲基化通常限定在DNA分子的特定序列區(qū)域，A，C堿基頻率要比G，T要高。將甲基加入DNA中的酶稱為DNA甲基轉(zhuǎn)移酶或甲基化酶，都利用S-腺苷酰甲硫氨酸作為甲基供體。13、Hoogsteen配對：已配對的堿基上存在著潛在的氫原子供體與受體，能進一步形成氫鍵特別是大溝中一些功能基團的重排。14、超螺旋：如果DNA分子額外的多轉(zhuǎn)幾圈或少轉(zhuǎn)幾圈，都會使DNA中存在張力，此張力會使分子發(fā)生扭曲，這種扭曲態(tài)為超螺旋。15、三鏈DNA：單鏈DNA與雙鏈分子中的堿基互相作用，通過雙鏈DNA的大溝，第三條鏈與雙鏈中的一條鏈的堿基形成非WAHEN-CRICK配對，而是形成loosteen堿基配對形成的三鏈。16、DNA雙螺旋的呼吸作用：DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中的H鍵處于不斷的裂解和復(fù)合的熱平衡狀態(tài)，這種H鍵的快速斷裂和再生過程成為DNA的呼吸作用。17、分子雜交：不同來源的DNA分子放在一起熱變性，然后慢慢冷卻，讓其復(fù)性，若這些異源DNA之間有互補或部分互補序列，則復(fù)性時會形成“雜交分子”，DNA與互補的RNA之間也可以發(fā)生雜交。18、穩(wěn)定雙螺旋結(jié)構(gòu)的力：1.堿基堆積力，電子云交錯而形成的一種力，最主要的力；2.氫鍵，互補堿基間可形成氫鍵；3.離子鍵，對維持DNA的空間結(jié)構(gòu)起作用。4.堿基分子內(nèi)能19、減色及增色效應(yīng)：20、回文結(jié)構(gòu)：又稱反向重復(fù)序列，是一段能夠自我互補的序列，能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)或十字形結(jié)構(gòu)。不配對的地方形成凸環(huán)。21、鏡像重復(fù)序列：在同一條DNA鏈上沒有互補序列，不能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)和十字形結(jié)構(gòu)。能形成HDNA。22、拓撲異構(gòu)酶：可以改變DNA拓撲異構(gòu)體的L值，使雙鏈超螺旋DNA轉(zhuǎn)變成松弛型環(huán)狀DNA或使松弛型環(huán)狀DNA變成負超螺旋DNA的一種蛋白質(zhì)。23、基因文庫：是一群細菌克隆，每個克隆含有一個帶有某一供體生物不同DNA片段的質(zhì)?；蚴删w載體；這群克隆有95-99的可能性使基因組DNA的每一片段至少存在于一個克隆中。24、4.416螺旋（螺旋）：每轉(zhuǎn)一圈需要4.4個氨基酸殘基，殘基高度為0.12nm，螺旋半徑為0.3nm，n=4.不穩(wěn)定.25、a-螺旋（3.613螺旋）：是非整數(shù)螺旋，每轉(zhuǎn)一圈需要3.6個氨基酸殘基，螺距為0.54nm，=-55 =-45，由相鄰螺旋間形成鏈內(nèi)氫鍵，由氫鍵所封閉成13環(huán)。26、r-螺旋（310）：每轉(zhuǎn)一圈需要3個氨基酸殘基，靠氫鍵所形成的環(huán)由10個原子組成，為r-螺旋（310），=-49=-26,殘基高度為0.2nm，螺距為0.6nm，螺旋半徑為0.2nm。27、衛(wèi)星病毒：能編碼自身蛋白，因此由它介導(dǎo)感染，而在感染周期中必須利用輔助病毒的復(fù)制酶才能進行復(fù)制和增殖，與此同時也干擾了輔助病毒的復(fù)制，衛(wèi)星病毒的基因組與輔助病毒的基因組沒有同源性，抗原性也不同。28、CDNA文庫：是由細胞全部MRNA反轉(zhuǎn)錄生成的CDNA克隆的總合。29、載體：將外源DNA帶入宿主細胞并進行復(fù)制的運載工具稱為載體。30、穿梭載體：通常是指那些既能在真核細胞中繁殖又能在原核細胞中繁殖的載體。31、轉(zhuǎn)化：細菌或細胞吸收質(zhì)粒DNA的過程。32、轉(zhuǎn)染：細菌或細胞吸收噬菌體DNA的過程。33、轉(zhuǎn)導(dǎo)：DNA通過正常的噬菌體感染途徑進入細胞的過程。34、southern印跡法：將凝膠上分離的DNA片段轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，再通過同位素標記的單鏈DNA或RNA探針的雜交作用檢測這些被轉(zhuǎn)移的DNA片段的方法?；静襟E：1、限制性酶切DNA分子2、瓊脂糖凝膠電泳分離3、堿變性4、轉(zhuǎn)膜5、探針雜交6、洗膜除去未雜交的探針7、放射性自顯影。35、nouthern印跡法：將RNA分子從電泳凝膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素過濾膜或其它化學(xué)修飾的活性濾紙上，然后再進行核酸雜交的一種實驗方。36、wouthern印跡法：將蛋白質(zhì)從電泳凝膠中轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素過濾膜上，然后與放射性同位素I125標記的特定蛋白質(zhì)的抗體進行反應(yīng)。37、基因工程：是指在體外將核酸分子插入病毒，質(zhì)?；蚱渌d體分子，構(gòu)成遺傳物質(zhì)的新組合，并使之參與原先沒有這類分子的寄主細胞， 并能持續(xù)穩(wěn)定地繁殖。一、DNA的多態(tài)性及產(chǎn)生多態(tài)性的原因：脫氧核糖和磷酸組成的骨架上的許多鍵都可以轉(zhuǎn)動，隨熱力學(xué)的變化，可使鏈彎曲，伸展或堿基分開。這就使具有同樣堿基配對的DNA雙螺旋可以采取另一些構(gòu)象，DNA構(gòu)象上這種差異稱為多態(tài)性。原因：（1）脫氧核糖的五元環(huán)能折疊成各種構(gòu)象 （2）組成磷酸脫氧核糖骨架的連續(xù)鍵可以轉(zhuǎn)動 （3）C1N糖苷鍵可以自由轉(zhuǎn)動。二、特殊序列及特殊結(jié)構(gòu)的意義：（1）是DNA結(jié)合蛋白的識別位點 （2）與基因信息表達調(diào)控有關(guān) （3）通過特殊序列調(diào)控細胞代謝的方法，在醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)上具有潛在的應(yīng)用價值，正成為具有商業(yè)開發(fā)價值的領(lǐng)域。三、真核生物基因組與與和原核生物基因組的區(qū)別：1 真核基因組的長度比原核的大2 真核基因組中有內(nèi)含子 經(jīng)過翻譯后被剪切而原核中沒有內(nèi)含子 3 真核基因表達調(diào)空正性調(diào)節(jié)為主要 原核生物負調(diào)節(jié)為主 4 有的原核基因組可以整合到真核基因中 例如逆轉(zhuǎn)錄病毒基因 5 原核生物的細胞中除了主染色體以外，還含有各種質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座因子。真核生物除了核染色體以外，還存在細胞器DNA，如線粒體和葉綠體的DNA，為雙鏈環(huán)狀，可自主復(fù)制。6 原核生物的DNA位于細胞的中央，稱為類核（nucleoid）。真核生物有細胞核，DNA序列壓縮為染色體存在于細胞核中。7 真核基因組都是由DNA序列組成，原核基因組還有可能由RNA組成，如RNA病毒。四、簡述核酸DNA測序的主要方法及原理方法？1、Sanger酶法-雙脫氧鏈末端終止法：利用噬菌體r13在生活周期上的特點，使用DNA重組技術(shù)，建立了通用模板和通用引物的快速檢測方法。原理及方法：、分別進行4組反應(yīng)，每組反應(yīng)中含有4dNTP及其中的一種ddNTP。、通過控制反應(yīng)系統(tǒng)中dNTP與ddNTP的比例，可以是雙脫氧核苷酸隨機的參入互補鏈并在不同的位置上終止合成反應(yīng)。最后得到一組長短不同，而3“末端均以雙脫氧核苷酸結(jié)尾的DNA片段。4組反應(yīng)就得到4套片段，而5端一律從引物開始有相同起點帶放射性標記。、在高分辨率的聚丙酰變性凝膠上電泳分離，可以按片段從小到大的順序讀出氨基酸順序。 2、MaxamGilbert化學(xué)法：在對末端標記的DNA進行堿基特異性切割反應(yīng)后進行凝膠分離的方法。此方法不需要酶，對單鏈和雙鏈DNA都適用，不受DNA二級結(jié)構(gòu)的干擾。適用于微克隆過的基因組DNA的測序。原理及方法：放射性標記末端 、堿基特異性切割 、聚丙酰變性凝膠上電泳分離，對測序凝膠的4個泳道進行分析就可以確定出序列。特定的堿基修飾反應(yīng)。3、雜交測序法與芯片技術(shù)：利用一組已知序列的寡聚核苷酸端序列作為探針，同某一特定的較長的靶DNA分子雜交，從而測定其核苷酸序列。原理及方法：把靶DNA分子同一組已知核苷酸順序的寡核苷酸探針雜交。、然后對那些能夠同靶DNA形成完全上連體分子的寡核苷酸探針之間的堿基重疊關(guān)系作比較分析，并據(jù)此推出靶DNA的核苷酸順序。4、PCR測序5、單核苷酸測序法五、理想載體的條件？ 1、具有自主復(fù)制能力2、分子量小，便于與DNA體外合作。3、含有多種限制性內(nèi)切酶的單一識別序列。4、攜帶易于篩選的選擇性標記，常用抗藥性，營養(yǎng)缺陷型和形成噬菌體的能力等作為選擇標記。5、使用安全。六、簡述RNA的功能？ 1、控制蛋白質(zhì)的合成2、作用于RNA轉(zhuǎn)錄后加工修飾3、基因表達及細胞功能的調(diào)節(jié)4、生物催化及其他細胞功能5、遺傳信息的加工與進化6、染色體、核糖體、核酶等骨架構(gòu)成的成分7、信號識別與傳導(dǎo)。七、RNA世界（RNA的多樣性）？ 1、mRNA:編碼蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，攜帶翻譯信息。 2、tRNA：翻譯過程中的適配器，將mRNA的三聯(lián)體密碼子翻譯成蛋白質(zhì)的序列，在反轉(zhuǎn)錄病毒中tRNA可作為DNA的引物。 3、rRNA:核糖體的骨架構(gòu)成，翻譯機制的中心，催化肽鏈的形成。 4、hnRNA：mRNA剪接前體，真核生物基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物經(jīng)加工形成大小不等的中間產(chǎn)物。 5、snRNA：核質(zhì)中低分子量的RNA，參與mRNA、tRNA、rRNA前體的加工，協(xié)調(diào)胞內(nèi)物質(zhì)運輸，參與分泌蛋白的運輸，代謝穩(wěn)定進化上保守，有些5端有帽子結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)連在一起以核糖核蛋白RNP形式存在。 6、siRNA：RNA干涉現(xiàn)象中，中介入細胞中特定雙鏈RNA加工裂解成的21-23nt的正義和反義鏈組成等干擾基因表達的小分子RNA，其引發(fā)的RNAi是轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象的機制之一。 7、micRNA(反義RNA)：與mRNA互補，可與其形成雙螺旋結(jié)構(gòu)阻斷蛋白質(zhì)的合成，在翻譯水平上調(diào)節(jié)G的表達。 8、ribozyme: 具有高效特異催化功能的RNA。 9、脫氧核酶（dexy ribozyme）:具有催化活性的單鏈RNA分子，具有ASODN的反義抑制作用和核酶的靶向性剪切活性，穩(wěn)定性好。 10、ASODN（反義寡聚脫氧核糖核酸）：人工合成的，與靶mRNA配對互補，以激活Rnaseh來降解RNA/DNA雜交分子中的靶RNA，阻斷RNA的加工、翻譯、抑制G的表達。 11、iRNA：在DNA復(fù)制過程中作為后滯鏈合成引物的短RNA片段。 12、端粒RNA：端粒酶的組成部分，可作為形成端粒重復(fù)序列的模版。 13、snoRNA(核仁小RNA)：核仁中RNA加工與堿基修飾所必需的。 14、scRNA（胞質(zhì)內(nèi)小RNA）：在胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的多種功能的低分子量RNA。八、基因文庫與CDNA文庫的建立？基因文庫的建立：1、染色體DNA的片斷化2、載體DNA的制備3、體外聯(lián)結(jié)與包裝4、重組噬菌體感染E.coli 5、基因組文庫的鑒定與增CDNA文庫的建立：1、制備mRNA 2、合成cDNA 3、制備載體DNA 4、雙鏈cDNA的分子克隆5、對構(gòu)建的cDNA文庫進行鑒定與擴增。1、Ribozyme：具有高效特異催化功能的RNA。2、抗體酶：用酶反應(yīng)中間物作為抗原而誘導(dǎo)產(chǎn)生的具有對中間物催化能力的抗體稱為抗體酶。3、探針酶：既保持高度反應(yīng)性，又能在DNA中任意選定區(qū)域內(nèi)進行切割的酶。4、人工酶：人工合成的具有催化活性的蛋白質(zhì)或多肽。5、模擬酶：利用在有機化學(xué)合成的一些比酶結(jié)構(gòu)更加簡單的具有催化功能的蛋白質(zhì)分子。6、克隆酶：用基因工程技術(shù)大量生產(chǎn)的酶。7、突變酶：用基因定位突變技術(shù)修飾天然酶基因，然后用基因工程技術(shù)生產(chǎn)該突變基因的酶，被稱為突變酶。8、單純酶：從化學(xué)組成來看，除了蛋白質(zhì)外不含有其它蛋白質(zhì)的酶。 9、單體酶：只含有一條多肽鏈的酶。10、結(jié)合酶：從化學(xué)組成來看，除蛋白質(zhì)外還含有其它物質(zhì)的酶，一般為一些對熱穩(wěn)定的非蛋白質(zhì)小分子物質(zhì)或金屬離子。11、寡聚酶：由兩個或兩個以上的亞基組成的酶，這些亞基可以是相同的也可以是不同的。12、多酶復(fù)體：幾種酶靠共價鍵彼此嵌合而成，其催化的反應(yīng)依次連接，有助于一系列反應(yīng)的進行。13、固定化酶：將水溶性的酶用物理或化學(xué)的方法處理，使之成為不溶于水的但仍具有酶的狀態(tài)而得到的酶。14、同工酶(isozyme)：催化相同的反應(yīng)，但蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)，理化性質(zhì)免疫特性等方面都存在明顯差異的一組酶。原級同工酶：基因性同工酶編碼基因不同而產(chǎn)生的同工酶。等位基因同工酶：由等位基因編碼而產(chǎn)生的同工酶。次級同工酶：翻譯后同工酶，酶蛋白的翻譯產(chǎn)物，經(jīng)不同的修飾反應(yīng)，而產(chǎn)生的不同形式。 15、別構(gòu)酶：（alloseric E）一種調(diào)節(jié)酶分子的非催化部位與某些化合物可逆的非共價結(jié)合后發(fā)生構(gòu)象的變化進而改變酶活性，稱為酶的變構(gòu)調(diào)節(jié)，具有該調(diào)節(jié)作用的酶稱為別構(gòu)酶。通過別構(gòu)效應(yīng)降低酶活性的抑制劑稱為別構(gòu)抑制劑。16、酶活力（enzyme activity)：酶催化某一反應(yīng)的能力，大小可以用在一定條件下催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力來表示。17、酶活力單位：特定條件下，1min內(nèi)，能轉(zhuǎn)化1 mol底物所需要的酶量。18、比活力: 每毫克酶蛋白所具有的酶活力單位數(shù)。（U/mg蛋白）比活力越高，表示酶制劑越純。19、酶的活性部位（active site）：活性中心是酶與底物結(jié)合，形成E-S復(fù)合體，并將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的部位?；钚灾行氖且粋€三維體，只占酶體積的一小部分，通常位于酶分子表面的縫隙內(nèi)，底物就通過次級鍵在該部位與酶結(jié)合。20、自殺性底物（suiside substrate）：是指那些底物類似物能為酶所催化，其形成產(chǎn)物與酶的活性中心共價結(jié)合，不可逆地抑制酶的活性的物質(zhì)。21、競爭抑制（competitive inhibition）:抑制劑與酶的正常底物結(jié)構(gòu)相似，它與底物競爭的結(jié)合到酶活性中心，從而阻礙酶與底物的結(jié)合。22、非競爭抑制（non-competitive inhibition）：非競爭抑制劑與酶活性中心以外的其它位點可逆性結(jié)合，其結(jié)構(gòu)與底物無共同之處，底物與抑制劑無競爭關(guān)系。23、反競爭抑制（uncompetitive inhibition）：抑制劑不與酶結(jié)合，僅與酶和底物分子形成的中間復(fù)合物結(jié)合，使中間復(fù)合物ES明顯下降，酶的活性被抑制。24、效應(yīng)物（effecter）：不作用于活性中心，而是活性中心以外的部位，引起分子構(gòu)象變化，來調(diào)節(jié)酶活力的物質(zhì)。25、協(xié)同指數(shù)（cooperative index, CI）：也稱飽和比值（saturation ratio, Rs) E分子中的結(jié)合位點被S飽和90%和飽和10%時S的比26、酶原（zymogen）：酶的無活性前體，通常在有限度的蛋白質(zhì)水解作用后，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂谢钚缘拿浮?7、催化亞基和調(diào)節(jié)亞基：酶分子上負責對底物分子結(jié)合和催化的亞基，酶分子上負責調(diào)節(jié)物，對催化中心的酶活性起調(diào)節(jié)作用的亞基。28、米氏常數(shù)（Km值）：用m值表示，是酶的一個重要參數(shù)。m值是酶反應(yīng)速度（V）達到最大反應(yīng)速度（Vmax）一半時底物的濃度（單位M或mM）。米氏常數(shù)是酶的特征常數(shù)，只與酶的性質(zhì)有關(guān)，不受底物濃度和酶濃度的影響。29、底物專一性：酶的專一性是指酶對底物及其催化反應(yīng)的嚴格選擇性。通常酶只能催化一種化學(xué)反應(yīng)或一類相似的反應(yīng)，不同的酶具有不同程度的專一性，酶的專一性可分為三種類型：絕對專一性、相對專一性、立體專一性。30、輔基：酶的輔因子或結(jié)合蛋白質(zhì)的非蛋白部分，與酶或蛋白質(zhì)結(jié)合得非常緊密，用透析法不能除去。31、抑制劑：能使酶的必需基團或酶活性部位中的基團的化學(xué)性質(zhì)改變而降低酶的催化活性甚至使酶的催化活性完全喪失的物質(zhì)。32、誘導(dǎo)酶：是指當細胞中加入特定誘導(dǎo)物后誘導(dǎo)產(chǎn)生的酶，它的含量在誘導(dǎo)物存在下顯著增高，這種誘導(dǎo)物往往是該酶底物的類似物或底物本身。問答題一、為什么酶具有高催化效率？（催化原理） 催化本質(zhì)降低反應(yīng)的活化能1.鄰近定向：E與S結(jié)合形成的中間產(chǎn)物，使s與s，s與e的催化基團的結(jié)合于同一分子，大大提高了有效濃度。相當于將底物從溶液中取出來，使它們固定在酶分子表面的活性中心部位，它們的反應(yīng)基團相互鄰近，同時使反應(yīng)基團的分子的軌道以正確方位相互交蓋，大大提高了反應(yīng)效率。2、扭曲變形和構(gòu)象變化的催化效應(yīng)3、酸堿催化：酶活性部位上的某些基團可以作為良好的質(zhì)子供體或受體對底物進行酸堿催化。4、金屬離子催化5、共價催化6、微環(huán)境的影響：X射線衍射研究指出，酶能設(shè)置不尋常的反應(yīng)環(huán)境，例如溶菌酶分子上形成活性中心裂縫中，排滿了許多疏水氨基酸側(cè)鏈非極性環(huán)境，更利于反應(yīng)，利于敏感鍵極化。二、酶活力的測定方法及測定時應(yīng)注意的問題？1、終點法（化學(xué)反應(yīng)法）：對于SP反應(yīng)，間隔一定時間，分幾次取出一定體積的反應(yīng)液，用化學(xué)法或物理法立即終止酶反應(yīng)，然后測定S或P的量。2、動力學(xué)法：a、分光光度法：在酶促反應(yīng)中，利用反應(yīng)物或產(chǎn)物在紫外光或可見光區(qū)域內(nèi)有光吸收的特性。b、熒光法3、酶偶聯(lián)法：是在被測定的酶反應(yīng)系統(tǒng)中，加入過量的高度專一的“偶聯(lián)工具酶”使反應(yīng)繼續(xù)進行到某一可直接準確測定的階段。4、電化學(xué)法：是用離子選擇性電極跟蹤反應(yīng)過程所生成的離子或氣體分子的濃度，從而得到反應(yīng)物的初始濃度。應(yīng)注意的問題：1、嚴格控制實驗條件，最適溫度、最適pH 2、ES 3、做對照實驗 4、酶液不宜放置過久 5、有些反應(yīng)不一定在水溶液中進行三、酶活力的可逆抑制有哪些類型？如何區(qū)分？1、競爭抑制:抑制劑與酶的正常底物結(jié)構(gòu)相似，它與底物競爭的結(jié)合到酶活性中心，從而阻礙酶與底物的結(jié)合。2、非競爭抑制：非競爭抑制劑與酶活性中心以外的其它位點可逆性結(jié)合，其