分子生物學(xué)實驗常用緩沖液的配制方法.doc

各種緩沖液的配制方法Na2HPO4-檸檬酸鈉緩沖液PH0.2mol/LNa2HPO4 (ml)0.1mol/L檸檬酸鈉 (ml)PH0.2mol/LNa2HPO4 (ml)0.1mol/L檸檬酸鈉 (ml)2.20.419.65.210.729.282.41.2418.765.411.158.852.62.1817.825.611.608.402.83.1716.835.812.097.913.04.1115.896.012.637.373.24.9415.066.213.226.783.45.7014.306.413.856.153.66.4413.566.614.555.453.87.1012.906.815.454.554.07.7112.297.016.473.534.28.2811.727.217.392.614.48.8211.187.418.171.834.69.3510.657.618.731.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55Na2HPO4。2H2O，分子量=178.05 0.2mol/L溶液含35.61g/L檸檬酸. H2O，分子量=210.14 0.1mol/L溶液含21.01g/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液（0.1mol/L）PH0.1mol/L檸檬酸（ml）0.1mol/L檸檬酸鈉（ml）PH0.1mol/L檸檬酸（ml）0.1mol/L檸檬酸鈉 (ml)3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.05.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.61.418.64.89.210.8檸檬酸. H2O，分子量=210.14 0.1mol/L溶液含21.01g/L檸檬酸鈉. 2H2O，分子量=294.12；0.1mol/L溶液含29.4 g/L醋酸緩沖液（0.2mol/L，18）PH0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)PH0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)3.60.759.254.85.904.103.81.208.805.07.003.004.01.808.205.27.902.104.22.657.355.48.601.404.43.706.305.69.100.904.64.905.105.89.400.60NaAC.3 H2O,分子量=136.09 0.2mol/L溶液含27.22g/L（1）醋酸鹽溶液的配制：醋酸醋酸鈉緩沖液(pH3.6) 取醋酸鈉5.1g,加冰醋酸20ml，再加水稀釋至250ml,即得。 醋酸醋酸鈉緩沖液(pH3.7) 取無水醋酸鈉20g,加水300ml溶解后，加溴酚藍(lán)指示液1ml及冰醋酸6080ml，至溶液從藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兙G色，再加水稀釋至1000ml，即得。 醋酸醋酸鈉緩沖液(pH3.8) 取2mol/L醋酸鈉溶液13ml與2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含銅1mg的硫酸銅溶液0.5ml,再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸醋酸鈉緩沖液(pH4.5) 取醋酸鈉18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀釋至1000ml,即得。 醋酸醋酸鈉緩沖液(pH4.6) 取醋酸鈉5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至4.6，再加水稀釋至100ml，即得。 醋酸醋酸鈉緩沖液(pH6.0) 取醋酸鈉54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀釋至500ml，即得。用醋酸和醋酸鈉配制的緩沖溶液的PH=PKa+lgC(NaAc)/C(HAc)（在此，C(HAc)指醋酸的濃度，C(NaAc)指醋酸鈉的濃度,Ka是醋酸的解離常數(shù)=1.8*10-5（1.8乘10的-5次方），PKa=-lgKa=4.75，將PH=5.5代入，可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6 通常我們配制時會使C(HAc)=0.1mol/L，或是C(HAc)=0.2mol/L等。若是配制C(HAc)=0.1mol/L，則C(NaAc)=0.56mol/L 稱量醋酸鈉固體質(zhì)量為82*0.56=46克 量取冰醋酸體積為0.1*1000/17.5=5.7mL。 將稱好的醋酸鈉和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、攪拌均勻即可。 當(dāng)然若想配制其它的濃度，也可照公式計算即可，通常緩沖溶液不能配的太稀，否則緩沖能力要下降，太濃的話又浪費試劑。苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉緩沖液PH0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L苯二甲酸氫鉀（ml）加水至(ml)4.00.4025.00100.004.23.6525.00100.004.47.3525.00100.004.612.0025.00100.004.817.5025.00100.005.023.6525.00100.005.229.7525.00100.005.435.2525.00100.005.639.7025.00100.005.843.1025.00100.006.045.4025.00100.006.247.0025.00100.000.2mol/L苯二甲酸氫鉀溶液：稱取在硫酸干燥器中干燥過24小時的苯二甲酸氫鉀20.44g溶于水中，稀釋至500ml。磷酸緩沖液（0.2mol/L）PH0.2mol/LNa2HPO4 (ml)0.2mol/LNaH2PO4 (ml)PH0.2mol/LNa2HPO4 (ml)0.2mol/LNaH2PO4 (ml)588.092.07.061.039.06.012.387.77.272.028.06.218.581.57.481.019.06.426.573.57.687.013.06.637.562.57.891.58.56.849.051.08.094.75.3Na2HPO4 .2 H2O ,分子量=178.05， 0.2mol/L溶液含35.61g/LNaH2PO4 . 2 H2O ,分子量=156.03， 0.2mol/L溶液含31.21g/LNaH2PO4 . H2O,分子量=138.03， 0.2mol/L溶液含27.6g/LNa2HPO4 .12 H2O,分子量=358.22， 0.2mol/L溶液含71.64g/L磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法0.01M PBS PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2)PBS緩沖液（pH7.27.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L稱7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml 蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1 L。保存于4冰箱中即可。需要注意的是，通常所說的濃度0.01 M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na 離子或K 離子的濃度，Na 離子和K 離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制： 0.2M Na2HPO4：稱取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：稱取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各種濃度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。然后 只需將0.2M PB (pH=7.4)按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋 即可，如：0.1M PB（PH=7.4） ：取 500ml 0.2M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。 若需要 NaCl的話，加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。另：其它各種另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方 ：pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）5.7 93.5 6.55.8 92 8 5.9 90 106.0 87.7 12.36.1 85 156.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51 496.9 45 557.0 38 627.1 33 677.2 28 727.3 23 777.4 19 817.5 16 847.6 13 877.7 10.5 90.57.8 8.5 91.57.9 7 938.0 5.3 94.7 0.01M 磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034105Pa)高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4冰箱中。需要注意的是，通常所說的濃度0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na 離子或K 離子的濃度，Na 離子和K 離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話，則需要在配置的時候分別加入100 u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH、定容、滅菌消毒。PH 7.6 7.4 7.2 7.0 H2O 1000 1000 1000 1000 NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5 Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2 NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4根據(jù)經(jīng)驗來看，新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過晝夜的時間后，PH值會明顯改變（我親自測過偏酸）。所以做實驗的同學(xué)可要注意了，PH值可能會影響實驗結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得這個時候和天氣，要加強實驗條件控制問題。每次使用前最好用試紙測一下過夜了的PBS，如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。 PBS緩沖液 稱取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4，加水定容至1L，常溫保存?zhèn)溆?。PBST緩沖液 取300l Tween-20 加入PBS 100ml中，混勻后即刻使用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。 如果是把所有固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時候十倍稀釋，那么，在剛配好濃縮液時，PH在6.5左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào)，但是有更方便的方法。 十倍稀釋以后，PH自動升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個可以先取少量試一試，配好之后再測一次 PH8.0的PBS配方詳細(xì)1. NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L 2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至8.0，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 0.05mol/L PBS(磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制： 甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液 ：稱取磷酸氫二鈉9.465g 7.099g,加蒸 餾水至1000ml ; 乙液：0.05mol/L KH2P04溶液: 稱取磷酸二氫鉀, 9.07g 6.803g,加蒸餾水至1000m1。 將甲乙液分裝在棕色瓶內(nèi)，于4冰箱中保存，用時甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見下表: pH 甲液ml 乙液mI 5.29 2.5 97.5 5.59 5.0 95.0 5.91 10.0 90.0 6.24 20.0 80.0 6.47 30.0 70.0 6.64 40.0 60.0 6.81 50.0 50.0 6.98 60.0 40.0 7.17 70.0 30.0 7.38 80.0 20.0 7.73 90.0 10.0 8.04 95.0 5.0 你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。硼酸緩沖液（0.2mol/L硼酸鹽）PH0.05mol/L硼砂（ml）0.2mol/L硼酸（ml）PH0.05mol/L硼砂（ml）0.2mol/L硼酸（ml）7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0硼砂Na2B4O7.10H2O,分子量=381.43,0.05mol/L溶液=0.2mol/L硼砂含19.07g/L硼酸，分子量=61.84,0.2mol/L溶液含12.37g/L硼砂易失去結(jié)晶水，必須在帶塞得瓶中保存；硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液代替鹽酸-氯化鉀緩沖液PH0.1mol/LHCl(ml)0.02mol/LKCl(ml)加水至(ml)PH0.1mol/LHCl(ml)0.02mol/LKCl(ml)加水至（ml）1.194.562.701001.723.7638.101001.275.1012.451001.818.6840.601001.359.6820.151001.914.9842.501001.447.4026.301002.011.9044.051001.537.6431.201002.19.4645.031001.629.9035.001002.27.5246.251000.02mol/LKCl溶液：溶7.455g氯化鉀于水中，稀釋至500ml苯二甲酸氫鉀-鹽酸緩沖液PH0.1mol/LHCl (ml)0.02mol/L苯二甲酸氫鉀（ml）加水至（mi）PH0.1mol/LHCl (ml)0.02mol/L苯二甲酸氫鉀（ml）加水至（mi）2.246.6025.001003.214.8025.001002.439.6025.001003.49.9525.001002.633.0025.001003.66.0025.001002.826.5025.001003.82.6525.001003.020.4025.001000.02mol/L苯二甲酸氫鉀溶液：稱取在硫酸干燥器中干燥過24小時額苯二甲酸氫鉀20.44g溶于水中，稀釋至500ml磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液PH0.1m