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P16、 Ki67在宮頸病變中的表達(dá)及意義作者：王佩飛 陳建武 黃巨丹 陳良英 【關(guān)鍵詞】 P16 Ki67 宮頸病變 表達(dá)宮頸癌是嚴(yán)重威脅婦女健康的惡性腫瘤，占婦女惡性腫瘤的首位，其發(fā)病率有逐年上升和發(fā)病年輕化的趨勢，對宮頸癌的早期診斷、早期治療，尤其在癌前病變?nèi)巳褐邪l(fā)現(xiàn)癌變的高危個(gè)體，開展針對性較強(qiáng)的重點(diǎn)預(yù)防，降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率，具有重要意義。本次研究采用免疫組化方法檢測P16基因、Ki67抗原在宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia ,CIN）和宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況，探討與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。報(bào)道如下。 1資料與方法 1.1一般資料收集樂清市人民醫(yī)院2004年6月至2008年10月間宮頸活檢、宮頸Leep術(shù)及子宮全切標(biāo)本100例，患者年齡2865歲，平均年齡(42.123.12)歲。其中CIN級患者70例，年齡2860歲，平均年齡（42.203.61）歲；鱗癌30例，年齡3065歲，平均年齡（41.933.08）歲；20例患者正常宮頸黏膜來自子宮平滑肌瘤的手術(shù)切除標(biāo)本，年齡3270歲，平均年齡（42.603.50）歲。三組的年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均0.05）。 1.2方法全部組織經(jīng)10中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4um厚連續(xù)切片，免疫組化染色采用EnVision二步法，DAB顯色，以PBS緩沖液（0.01mol/L，pH7.4）代替第一抗體作陰性對照，用已知陽性組織切片作陽性對照。所用單克隆抗體P16、Ki67、EnVision試劑盒及DAB顯色劑均由Dako公司生產(chǎn)。操作按EnVision試劑盒說明進(jìn)行。 1.3結(jié)果判定根據(jù)Dako公司產(chǎn)品說明，P16陽性為胞核和/或胞漿著色，無棕黃色顆粒者為（-）；棕黃色細(xì)顆粒為（+）；棕黃色粗顆粒為(+)；棕褐色粗顆粒為（+）。Ki67陽性為胞核著色，陽性細(xì)胞僅位于基底層及副基底層或陽性細(xì)胞數(shù)5者為（-）；陽性細(xì)胞數(shù)625者為（+）；2650者為（+）；50者為（+）1。本次研究以陽性強(qiáng)度在（+）以上者列為陽性表達(dá)。 1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)；相關(guān)關(guān)系的分析采用Pearson積差相關(guān)分析法。設(shè)P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2結(jié)果 2.1P16、Ki67在宮頸各組病變組織中的表達(dá)比較結(jié)果見表1 由表1可見，鱗癌組和CIN組的P16、Ki67陽性率與對照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2分別=45.97、46.40、45.97、51.73，P均0.05）；CIN、CIN組的P16、Ki67陽性率與CIN組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2分別=12.50、10.29、9.52、7.78，P均0.05）。 2.2宮頸CIN組與鱗癌組中P16、Ki67表達(dá)的相關(guān)性見表2 由表2可知，經(jīng)Pearson積差相關(guān)分析法分析，P16、Ki67在宮頸CIN、CIN、CIN及宮頸鱗癌組中表達(dá)呈正相關(guān)（r0.51，P0.05） 3討論 目前認(rèn)為，宮頸癌尤其是鱗癌的發(fā)生是一個(gè)從異型增生到原位癌，最后發(fā)展為浸潤性癌的漸進(jìn)過程。在此過程中，多個(gè)癌基因的激活和抑癌基因的失活起著重要作用。 P16基因是人們發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)直接作用于細(xì)胞周期、抑制細(xì)胞分裂的基因，位于人類染色體9p21區(qū)，由三個(gè)外顯子和兩個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成，長約8.5kb2，是從細(xì)胞周期素依賴性激酶4（cyclindepedent kinase,CDK4）結(jié)合相互作用的蛋白質(zhì)的研究中被發(fā)現(xiàn)和分離出來的。若其編碼基因因甲基化、缺失等原因使細(xì)胞內(nèi)P16蛋白減少，會(huì)引起細(xì)胞周期調(diào)節(jié)紊亂，使細(xì)胞無限制增生，甚至癌變，因此，P16被認(rèn)為是一個(gè)抑癌基因。但進(jìn)一步研究卻發(fā)現(xiàn)，宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展并不涉及P16基因甲基化或缺失，在57的宮頸癌病例中存在P16基因的高表達(dá)，且會(huì)隨著宮頸癌病情的發(fā)生發(fā)展而呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢3。本次研究結(jié)果顯示，在正常宮頸組織中P16蛋白表達(dá)率極低，而在CIN組及鱗癌組中表達(dá)率明顯增高（P0.05），且隨著病變組織學(xué)分級的增加，P16在宮頸CIN、組陽性表達(dá)率呈升高趨勢（P0.05），提示P16的高表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，P16的表達(dá)有明顯的分層現(xiàn)象，CIN陽性細(xì)胞主要局限于鱗狀上皮下1/3層，而CIN、CIN則超過上皮層的下2/3或達(dá)全層，據(jù)此可以對CIN病變進(jìn)行更客觀準(zhǔn)確的分級，有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。因此，P16被認(rèn)為是宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌的具有敏感性和特異性的標(biāo)志物，可作為宮頸病理和宮頸細(xì)胞學(xué)診斷的補(bǔ)充檢查4，并有助于對CIN病人的轉(zhuǎn)歸及宮頸癌病人預(yù)后的判斷5。 Ki67抗原是針對處于增殖周期的人類細(xì)胞核抗原，因其半衰期短，檢測結(jié)果明顯優(yōu)于半衰期長的增殖細(xì)胞核抗原，被視為較可靠且全面反映細(xì)胞群體增殖活性的指標(biāo)6。正常宮頸上皮Ki67陽性細(xì)胞集中在基底層或副基底層，隨著增生的不成熟鱗狀上皮的增多，Ki67陽性細(xì)胞數(shù)量也明顯增多。因此，判定宮頸病變除了觀察Ki67表達(dá)強(qiáng)度外，最重要的是觀察其出現(xiàn)的部位，如CIN時(shí)，Ki67陽性細(xì)胞局限在上皮層下1/3，而CIN則大量的上皮表層細(xì)胞出現(xiàn)Ki67陽性。本次研究用Ki67表達(dá)來進(jìn)一步驗(yàn)證宮頸從正常黏膜至CIN至鱗癌這一發(fā)展演進(jìn)過程中的變化，結(jié)果顯示：Ki67在CIN組和鱗癌組中的表達(dá)率顯著高于正常宮頸組織（P0.05），且隨著病變嚴(yán)重程度的增加而表達(dá)率增高。而且，Ki67的陽性表達(dá)及其分布層次與CIN分級密切相關(guān)，表明宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞增殖有關(guān)，且對鑒別良惡性疾病及預(yù)測良性病變是否癌變有參考價(jià)值，有利于選擇惡性腫瘤的早期治療方法和療效的評估。 本次研究經(jīng)相關(guān)分析法分析顯示，P16、Ki67陽性表達(dá)率在宮頸CIN組、鱗癌組中具有顯著正相關(guān)性（P0.05），結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)一致7，提示宮頸腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多基因突變的結(jié)果，并提示P16、Ki67在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用，聯(lián)合檢測P16基因和Ki67抗原在宮頸組織中的陽性表達(dá)，能協(xié)助診斷宮頸上皮內(nèi)病變、宮頸鱗癌，并可作為CIN分級診斷的輔助方法，有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。晉升網(wǎng)（）致力于成為醫(yī)務(wù)工作者晉升職稱心靈導(dǎo)師；是目前國內(nèi)收錄醫(yī)學(xué)期刊、醫(yī)學(xué)雜志最多最權(quán)威的醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)平臺；提供免費(fèi)醫(yī)學(xué)期刊在線閱讀；網(wǎng)羅和甄選海量優(yōu)秀醫(yī)學(xué)論文檢索，獨(dú)立研發(fā)醫(yī)學(xué)在線資源分享庫和醫(yī)學(xué)在線模擬考試庫；整合刊類、標(biāo)題、關(guān)鍵詞檢索及全文檢索，并獨(dú)家研發(fā)刊社管理和刊社加盟系統(tǒng)、在線投稿、在線查稿、在線閱讀、遠(yuǎn)程審稿、在線下載等系統(tǒng)；聚刊社力量，建服務(wù)平臺，讓晉升網(wǎng)通過“專業(yè)”走入每一個(gè)醫(yī)務(wù)人員的身邊是我們不懈的追求目標(biāo)；【參考文獻(xiàn)】 史健, 鄭軍生, 尹方, 等. 宮頸上皮內(nèi)瘤變P16、P53、Ki67 的表達(dá)與高危型HPV感染及其臨床意義J. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2007, 27（4）:515517.2 熊光武. 抑癌基因P16與腫瘤基因治療J. 實(shí)用婦產(chǎn)科雜志, 2002, 18（4）:210211.3 Klaes R, Friedrich T, Spitkovsky D, et al. Overexpression of P16(INK4A) as a specific marker for dysplastic and neopla-stic epithelial cells of the cervix uteriJ. Int J Cancer, 2001, 92(2):276284.4 黃惠英, 錢德英, 岑堅(jiān)敏. 免疫組化P16蛋白在不同級別宮頸病變中表達(dá)差異的研究J.現(xiàn)代醫(yī)院，2008,8(3):1415.5 鄧飛, 胡新榮. P16與宮頸癌J. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2006, 14（4):500502.6 Salvesen HB, Iversen OE, Akslen LA. Prognostic significance of angiogenesis and Ki67, P53,and P21 expression a popula-rtion based endometrial carcinoma study