飼料級(jí)L-蘇氨酸產(chǎn)品檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn).doc

阜豐集團(tuán)研發(fā)中心 飼料級(jí)蘇氨酸產(chǎn)品化驗(yàn)操作規(guī)程飼料級(jí)L-蘇氨酸產(chǎn)品檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)目錄1 范圍32 技術(shù)要求33 試驗(yàn)方法43.1 鑒別試驗(yàn)43.2 L-蘇氨酸含量的測(cè)定53.3比旋光度的測(cè)定63.4 水分的測(cè)定73.5 飼料中粗灰分的測(cè)定113.6重金屬的測(cè)定（比色法）133.7飼料中鉛的測(cè)定143.8砷的測(cè)定18附3.9、硼氫化物還原光度法（快速法）25參考文獻(xiàn)：31飼料級(jí)L-蘇氨酸產(chǎn)品檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T21979-20081 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料級(jí)L-蘇氨酸產(chǎn)品的技術(shù)要求、實(shí)驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸和保質(zhì)期。本標(biāo)準(zhǔn)適用于以淀粉、糖質(zhì)為主要原料、經(jīng)發(fā)酵、提取制成的飼料級(jí)L-蘇氨酸?；瘜W(xué)名稱：L-2-氨基-3-羥基丁酸分子式：C4HNO3相對(duì)分子質(zhì)量：119.12（按2006年國(guó)際相對(duì)原子質(zhì)量）結(jié)構(gòu)式： OHCH3-CH-CH-COOH NH22 技術(shù)要求2.1外觀和性狀 本品應(yīng)為白色至淺褐色的結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，味微甜。能溶于水，難溶于甲醇、乙醚和三氯甲烷。有旋光性。2.2技術(shù)指標(biāo) 項(xiàng)目指標(biāo)一級(jí)二級(jí)含量（以干基計(jì)）/%98.597.5比旋光度D20-26.0 -29.0干燥失重/%1.0灼燒殘?jiān)?%0.5重金屬（以Pb計(jì)）/(mg/kg)20砷（以As計(jì)）/(mg/kg)22.3其它衛(wèi)生指標(biāo)應(yīng)符合GB13078的規(guī)定。3 試驗(yàn)方法除非另有規(guī)定，在分析中僅使用分析純?cè)噭?。水?yīng)符合GB/T6682三級(jí)水規(guī)定。試驗(yàn)中所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、制劑及制品，在沒(méi)有注明其它規(guī)定時(shí)，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的規(guī)定制備。3.1 鑒別試驗(yàn)3.1.1試劑茚三酮3.1.2 儀器紅外分光光度儀3.1.3 鑒別方法 取本品0.05g，加水50ml使溶解，加茚三酮0.05g，加熱溶液顯藍(lán)紫色，隨溫度升高顏色加重。 紅外鑒別：本品的紅外光吸收?qǐng)D譜與中華人民共和國(guó)藥典2005年版的對(duì)照?qǐng)D譜（光譜集957圖）一致3.2 L-蘇氨酸含量的測(cè)定3.2.1 試劑和溶液3.2.1.1 甲酸3.2.1.2 冰乙酸3.2.1.3 高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c（HClO4）=0.1 mol/L3.2.1.4 -萘酚苯基甲醇指示液；2g/L冰乙酸溶液。3.2.2 儀器自動(dòng)電位滴定儀或酸度計(jì)：以玻璃電極為指示電極，飽和甘汞電極為參比電極（或采用復(fù)合電極），并備有磁力攪拌器和滴定裝置。3.2.3 分析步驟稱取預(yù)先在105干燥至恒重的試樣0.2g，精確到0.2mg，加甲酸（3.2.1.1）3mL和冰乙酸（3.2.1.2）50mL使溶解，用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（3.2.1.3）滴定，用電位滴定儀滴定至終點(diǎn)?；蜻x用指示劑，加-萘酚苯基甲醇指示液（3.2.1.4）10滴，溶液由橙黃色變?yōu)辄S綠色。用時(shí)作空白實(shí)驗(yàn)。3.2.4 結(jié)果計(jì)算 L-蘇氨酸含量X以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示，按式（1）計(jì)算：X=（V-V0）119.12cm1 000100式中： V-試樣溶液消耗高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升（ml）V0-空白溶液消耗高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升（ml）119.12- L-蘇氨酸的摩爾質(zhì)量，單位為g/molc- 高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度，單位為摩爾每升（mol/L） m-試樣的質(zhì)量，單位為克(g) 1000-將體積V和V0由毫升換算為升計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后一位小數(shù)。注意：標(biāo)定高氯酸、滴定樣品一定注意溫度統(tǒng)一，最好在20。3.3比旋光度的測(cè)定3.3.1儀器 旋光儀：用鈉光燈（鈉光譜D線589.3nm）作光源。3.3.2測(cè)定方法試樣在105干燥至恒重，稱取干燥試樣約3g，精確到0.2mg,加水溫?zé)崛芙猓ㄈ魳悠啡芤侯伾^深，溶解后加少量活性炭，過(guò)濾，用水洗劑數(shù)次），并全部轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中，調(diào)節(jié)溶液溫度至20，并稀釋至刻度，中速定性濾紙過(guò)濾，濾液用旋光儀測(cè)定旋光度。3.3.3結(jié)果計(jì)算 L-蘇氨酸在20下，對(duì)鈉光譜D線的旋光度D20按下式計(jì)算：式中：-測(cè)得的旋光度 L-旋光管的長(zhǎng)度，單位為分米（dm）C每100ml溶液中所含試樣的質(zhì)量，單位為克（g）.3.4 水分的測(cè)定3.4.1原理根據(jù)樣品性質(zhì)的不同，在特定條件下對(duì)試樣進(jìn)行干燥所損失的質(zhì)量在試樣中所占的比例。3.4.2儀器和材料實(shí)驗(yàn)室常用及以下儀器、材料。3.4.2.1分析天平：感量 1mg。3.4.2.2稱量瓶：由耐腐蝕金屬或玻璃制成，戴蓋。其表面積能使樣品鋪開(kāi)約.3g/c.3.4.2.3電熱鼓風(fēng)干燥箱：溫度可控制在1032。3.4.2.4電熱真空干燥箱：溫度可控制在80 2，真空度可達(dá)13kPa.3.4.2.5應(yīng)備有通入干燥空氣導(dǎo)入裝置或以氧化鈣（CaO）為干燥劑的裝置。（20個(gè)樣品需300g氧化鈣）。3.4.2.6干燥器：具有干燥劑。3.4.2.7砂：經(jīng)酸洗。3.4.3采樣按GB/T 14699.1 采樣。樣品應(yīng)具有代表性，在運(yùn)輸和儲(chǔ)存過(guò)程中避免發(fā)生損壞和變質(zhì)。3.4.4試樣的制備按 GB/T 20195制備試樣。3.4.5 分析步驟3.4.5.1 試樣液體、粘稠飼料和以油脂為主要成分的飼料稱量瓶(3.4.2.2)內(nèi)放一薄層砂（3.4.2.7）和一根玻璃棒。將稱量瓶及內(nèi)容物和蓋一并放入103的干燥箱(3.4.2.3)內(nèi)干燥30min1min.蓋好稱量瓶，從干燥箱中取出，放在干燥器（3.4.2.5）中冷卻至室溫。稱量其質(zhì)量，準(zhǔn)確至1mg.稱取10g試樣于稱量瓶中，準(zhǔn)確至1mg。用玻璃棒將試樣與砂充分混和，玻璃棒留在稱量瓶中，按3.4.5.2操作。其它飼料將稱量瓶(3.4.2.2)放入103干燥箱(3.4.2.3)中干燥30min1min后取出，放在干燥器（3.4.2.6）中冷卻至室溫。稱量其質(zhì)量，準(zhǔn)確至1mg.稱取5g試樣于稱量瓶中，準(zhǔn)確至1mg.并攤勻。3.4.5.2測(cè)定將稱量瓶蓋放在下面或邊上與稱量瓶一同放入103干燥箱（3.4.2.3）中建議平均每升干燥箱空間最多放一個(gè)稱量瓶當(dāng)干燥箱溫度達(dá)103后，干燥4h0.1h。將蓋蓋上，從干燥箱中取出，在干燥器（3.4.2.6）中冷卻至室溫。稱量，準(zhǔn)確至1mg.以油脂為主要成分的飼料應(yīng)在103干燥箱（3.4.2.3）中在干燥30min1min.兩次稱量的結(jié)果相差不應(yīng)大于試樣質(zhì)量的0.1%，如果大于0.1%，按3.4.5.3操作。3.4.5.3 檢查實(shí)驗(yàn)為了檢查在干燥過(guò)程中是否有因化學(xué)反應(yīng)如美拉德（Maillard）反應(yīng)而造成不可接受的質(zhì)量變化，作如下檢查。在干燥箱中于103再次干燥 稱量瓶和試樣，時(shí)間為2h0.1h.在干燥器（3.4.2.6）中冷卻至室溫。稱量，準(zhǔn)確至1mg.如果經(jīng)第二次干燥后質(zhì)量變化大于試樣質(zhì)量的2%，就可能發(fā)生了化學(xué)反應(yīng)。在這種情況下按3.4.5.4所述步驟操作。3.4.5.4 發(fā)生不可接受質(zhì)量變化的樣品 按3.4.5.1取試樣。將稱量瓶蓋放在下面或邊上如稱量瓶一同放入80的真空 干燥箱（3.2.2.4）中，減壓至13 KPa。通入干燥空氣或放置干燥劑干燥試樣。在放置干燥劑的情況下，當(dāng)達(dá)到設(shè)定的壓力后斷開(kāi)真空泵。在干燥過(guò)程中保持所設(shè)定壓力。當(dāng)干燥箱溫度達(dá)到80后，家熱4h0.1h.小心的將干燥箱恢復(fù)至常壓。打開(kāi)干燥箱，立即將稱量瓶蓋蓋上，從干燥箱中取出，放入干燥器中冷卻至室溫稱量，準(zhǔn)確至1mg.將試樣再次放入80的真空干燥箱中干燥30min1min，直至連續(xù)兩次干燥質(zhì)量變化之差小于其質(zhì)量的0.2%。3.4.5.5 測(cè)定次數(shù) 同一試樣進(jìn)行兩個(gè)平行測(cè)定。3.4.5.6計(jì)算 未作預(yù)處理的樣品未作預(yù)處理的樣品，其水分和其它揮發(fā)性物質(zhì)的含量W1以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，數(shù)值以%計(jì)，按式（1）計(jì)算： - （1）式中： m3_試樣的質(zhì)量，單位為克（g）;m4_稱量瓶質(zhì)量，如使用砂和玻璃棒，也包括砂和玻璃棒的質(zhì)量，單位為（g）;m5_稱量瓶和干燥后試樣的質(zhì)量，如使用砂和玻璃棒，也包括砂和玻璃棒的質(zhì)量，單位為克（g）. 經(jīng)過(guò)預(yù)處理的樣品注：對(duì)難粉碎的樣品見(jiàn)GB/T 20195。樣品水分含量高于7%，脂肪含量低于12g/Kg,只需預(yù)干燥的樣品，其水分和其它揮發(fā)性物質(zhì)的含量W2億以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，數(shù)值以%計(jì)，按式（2）計(jì)算： -（2） M0 -試樣經(jīng)提取和/或空氣風(fēng)干前的質(zhì)量，單位為克（g）; M1-試樣經(jīng)提取和/或空氣風(fēng)干前的質(zhì)量，單位為克（g）;M3-試樣的質(zhì)量，單位為克（g）M4-稱量瓶（包括蓋）的質(zhì)量，如使用砂和玻璃棒，也包括砂和玻璃棒的質(zhì)量，單位為克（g）;M5-稱量瓶（包括蓋）和干燥后試樣的質(zhì)量，如使用砂和玻璃棒，也包括砂和玻璃棒的質(zhì)量，單位為克（g）;經(jīng)脫脂的高脂肪低水分試樣及經(jīng)脫脂和預(yù)干燥的高脂肪高水分試樣，其水分和其它揮發(fā)性物質(zhì)的含量w3,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，數(shù)值以%計(jì)，按式（3）計(jì)算： -（3）式中：M2-從試樣中提取脂肪的質(zhì)量，單位為克（g）;式中其它符號(hào)的含義同7.6.2.1 結(jié)果表示取兩次測(cè)定的算術(shù)平均值作為結(jié)果，兩個(gè)平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.2%，超過(guò)0.2%，重新界定，結(jié)果精確至0.1%。3.5 飼料中粗灰分的測(cè)定3.5.1 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物飼料中粗灰分的測(cè)定方法3.5.2 粗灰分本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的條件下，550灼燒所得的殘?jiān)?.5.3 原理試樣中有機(jī)質(zhì)經(jīng)灼燒分解，對(duì)所得的灰分稱量。注：灰分用質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示。3.5.4儀器設(shè)備除常用實(shí)驗(yàn)室設(shè)備外，其他儀器設(shè)備如下。分析天平:感量為0.001g. 馬弗爐：電加熱，可控制溫度，帶高溫計(jì)。馬弗爐中擺放煅燒盤(pán)的地方，災(zāi)550時(shí)溫差不超過(guò)20。干燥箱：溫度控制在（1032）。電熱板或煤氣噴燈。煅燒盤(pán)：鉑或鉑合金（如10%鉑，90%金）或在實(shí)驗(yàn)條件下不受影響的其他物質(zhì)（如瓷質(zhì)材料），最好是表面積約為20cm2、高約為2.5cm的長(zhǎng)方形容器，對(duì)易于膨脹的碳水化合物樣品，灰化盤(pán)的表面積約為30cm2、高為3.0cm的容器。 干燥器：盛有有效的干燥劑。3.5.5采樣重要的是實(shí)驗(yàn)室收到一份真正具有代表性的樣品，并且在運(yùn)輸及保存過(guò)程中不受到破壞或不發(fā)生變化。樣品應(yīng)以不破壞或不改變其組分的方式儲(chǔ)存。采樣按GB/T 14699.1執(zhí)行。3.5.6分析步驟3.5.6.1試樣制備試樣制備按GB/T20195 執(zhí)行。3.5.6.2實(shí)驗(yàn)步驟將煅燒盤(pán)放入馬弗爐中，與550，灼燒至少30min,移入干燥器中冷卻至室溫，稱量，準(zhǔn)確至0.001g.稱取約5g試樣（精確至.001）于煅燒盤(pán)中。3.5.6.3測(cè)定將盛有試樣（6.2）的煅燒盤(pán)放在電熱板或煤氣噴燈上小心加熱至試樣碳化，轉(zhuǎn)入預(yù)先加熱到550的馬弗爐中灼燒3h,觀察是否有碳粒，如無(wú)碳粒，繼續(xù)于馬弗爐中灼燒1h，如果有碳?；驊岩捎刑剂?，將煅燒盤(pán)冷卻并用蒸餾水潤(rùn)濕，在（1032）的干燥箱中仔細(xì)蒸發(fā)至干，再將煅燒盤(pán)置于馬弗爐中灼燒1h，取出于干燥器中，冷至室溫迅速稱量，準(zhǔn)確至0.001g。注：由上述步驟得到的粗灰分可用于測(cè)定鹽酸不溶性灰分（參見(jiàn)ISO 5985）。對(duì)同一試樣取兩分試料進(jìn)結(jié)果表示3.5.7結(jié)果表示粗灰分W，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示，按式（1）計(jì)算： （1） 式中： M2灰化后粗灰分加煅燒盤(pán)的質(zhì)量，單位為克（g）;M0-為空煅燒盤(pán)的質(zhì)量，單位為克（g）;M1-裝有試樣的煅燒盤(pán)的質(zhì)量，單位為克（g）;3.5.8精密度取兩次測(cè)定的算術(shù)平均值作為測(cè)定結(jié)果。3.6重金屬的測(cè)定（比色法）3.6.1、試劑和溶液3.6.2鹽酸：1+3溶液冰乙酸：6%（v/v）溶液硫化鈉：1g硫化鈉溶于10ml水中，臨用時(shí)新配。鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液：1ml含0.01mgpb,稱取硝酸鉛0.160g,于燒杯中，加硝酸5ml與水50ml溶解，移于1000ml容量瓶中，并用水稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液，臨用時(shí)準(zhǔn)確稀釋10倍。3.6.3測(cè)定方法稱取1.0000g試樣，置于瓷坩堝中，在電爐上小心炭化，再于550灼燒3h(或用灼燒殘?jiān)鼫y(cè)定后的殘灰)，在殘?jiān)屑尤?ml鹽酸，于水浴上加熱并蒸干，加10ml熱水并浸漬2min，全部轉(zhuǎn)入納氏比色管中，加2ml乙酸溶液，并用水稀釋至50ml,加2滴硫化鈉溶液，放置5min，移取2ml鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液與試樣同時(shí)同樣顯色作為標(biāo)準(zhǔn)，試樣的顏色不得深于此標(biāo)準(zhǔn)。3.7飼料中鉛的測(cè)定3.7.1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用原子吸收光譜法對(duì)飼料中鉛的測(cè)定方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種配合飼料、濃縮飼料、添加劑預(yù)混和飼料、單一飼料及飼料添加劑。干灰化法適用于含有有機(jī)物較多的飼料原料、濃縮飼料、配合飼料中鉛的測(cè)定。濕消化法分鹽酸消化法和高氯酸消化法。鹽酸消化法適用于不含有有機(jī)質(zhì)的添加劑預(yù)混料和礦物質(zhì)飼料中鉛的測(cè)定。高氯酸消化法適用于含有有機(jī)質(zhì)的添加劑預(yù)混料中鉛的測(cè)定。3.7.2原理3.7.2.1干灰化法 將試料在馬福爐55015溫度下灰化之后，酸性條件下溶解殘 渣，沉淀和過(guò)濾，定容制成式樣溶液，用火焰原子吸收光譜法，測(cè)量其在283.3nm處的吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。3.7.2.2濕消化法試料中的鉛在酸的作用下變成鉛離子，沉淀和過(guò)濾去除沉淀物，稀釋定容，用原子吸收光譜法測(cè)定。3.7.3試劑和材料 除特殊規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T6682中實(shí)驗(yàn)室二級(jí)用水。警告：各種強(qiáng)酸應(yīng)小心操作，稀釋和取用均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，適用高氯酸時(shí)注意不要燒干，小心爆炸。3.7.3.1 稀鹽酸溶液，c(HCl)=0.6mol/L3.7.3.2.鹽酸溶液，c(HCl)=6mol/L.3.7.3.3 硝酸溶液，c(HNO3)=6mol/L:吸取43ml硝酸，用水定容至100ml.3.7.3.4鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取1.598g硝酸鉛Pb(NO3)2,加硝酸溶液（7.3.3）10ml,全部溶解后，轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶中，加水至刻度，該溶液含鉛為1mg/Ml.標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液儲(chǔ)存在聚乙烯瓶中，4保存。3.7.3.5鉛標(biāo)準(zhǔn)工作液：吸取1.0 mL.鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（7.3.4），加入100 mL.容量瓶中，加水至刻度，此溶液含鉛為10ug/mL.工作液當(dāng)天適用當(dāng)天配制。3.7.3.6 乙炔：符合GB 6819的規(guī)定。3.7.4 儀器設(shè)備注：所用的儀器在使用前用稀鹽酸（3.7.3.1）煮。如果使用專(zhuān)用的灰化皿和玻璃器皿，每次使用前不需要用鹽酸煮。3.7.4.1 馬福爐，溫度能控制在55015。3.7.4.2 分析天平：稱量精度到0.0001g.3.7.4.3實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)。3.7.4.4原子吸收分光光度計(jì)附測(cè)定鉛的空心陰極燈。3.7.4.5無(wú)灰（不釋放礦物質(zhì)的）濾紙3.7.4.6瓷坩堝（內(nèi)層光滑沒(méi)有被腐蝕，使用前用稀鹽酸煮）3.7.4.7可調(diào)電爐3.7.4.8平底柱型聚四氟乙烯坩堝（60cm2）。3.7.5試樣的制備選取有代表性的樣品，至少500g，四分法縮分至100g,粉碎，過(guò)1mm的尼龍篩，混勻裝入密閉中，低溫保存?zhèn)溆谩?.7.6、分析步驟3.7.6.1試樣溶解干灰化法 稱取約5g制備好的試樣，精確到0.001g，置于瓷坩堝中。將瓷坩堝置于可調(diào)電爐上，100-300緩慢加熱炭化至無(wú)煙，要避免試料燃燒。然后放入已在550下預(yù)熱15min的馬福爐，灰化2-4h,冷卻后用2ml水將炭化物濕潤(rùn)。如果仍有少量炭粒，可滴入硝酸使殘?jiān)鼭駶?rùn)，將坩堝放在水域上干燥，然后再放到馬福爐中灰化2h，冷卻后加2ml水。取5ml鹽酸，開(kāi)始慢慢一滴一滴加入到坩堝中，邊加邊轉(zhuǎn)動(dòng)坩堝，直到不冒煙，然后再快速放入，再加入5ml硝酸，轉(zhuǎn)動(dòng)坩堝并用水浴加熱直到消化液2-3ml時(shí)取下（注意防止濺出），分次用5ml的水轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶。冷卻后，用水定容至刻度，用無(wú)灰濾紙過(guò)濾，搖勻，待用。同時(shí)制備試樣空白溶液。 鹽酸消化法依據(jù)預(yù)期含量，稱取1-5g制備好的試樣，精確到0.001g，置于瓷坩堝中。用2ml水將試樣濕潤(rùn)，取5ml鹽酸，開(kāi)始慢慢一滴一滴加入到坩堝中，邊加邊轉(zhuǎn)動(dòng)坩堝，直到不冒煙，然后再快速放入，再加入5ml硝酸，轉(zhuǎn)動(dòng)坩堝并用水浴加熱直到消化液2-3ml時(shí)取下（注意防止濺出），分次用5ml的水轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶。冷卻后，用水定容至刻度，用無(wú)灰濾紙過(guò)濾，搖勻，待用。同時(shí)制備試樣空白溶液。 高氯酸消化法稱取1g試樣(精確到0.001g),置于聚四氟乙烯坩堝中，加水濕潤(rùn)樣品，加入10ml硝酸（含硅酸鹽較多的樣品需再加入5ml氫氟酸），放在通風(fēng)柜里靜置2h后，加入5ml高氯酸，在可調(diào)電爐上墊瓷磚小火加熱，溫度低入250，待消化液冒白煙為止。冷卻后，用無(wú)灰濾紙過(guò)濾到50ml的容量瓶中，用水沖洗坩堝和濾紙多次，加水定容至刻度，搖勻，待用，同時(shí)制備試樣空白溶液。3.7.6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別吸取0 ml、1.0 ml、2.0 ml、4.0ml、8.0ml鉛標(biāo)準(zhǔn)工作液，置于50ml容量瓶中，加入鹽酸溶液1ml,加水定容至刻度，搖勻，導(dǎo)入原子吸收分光光度計(jì)中，用水調(diào)零，在283.3nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.7.6.3測(cè)定試樣溶液和試劑空白，按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟進(jìn)行測(cè)定，測(cè)出相應(yīng)吸光值與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。3.7.6.4結(jié)果計(jì)算3.7.6.5測(cè)定結(jié)果按式(1)計(jì)算：X =(12)V11 000m1 000=(12)V1m. ( 1 ) X-試料中鉛含量的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）; m-試料的質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g);V1-試料消化液總體積的數(shù)值，單位為毫升（ml）; 1-測(cè)定用試料消化液鉛含量的數(shù)值，單位為毫克每毫升（ug/ml）；2空白試液中鉛含量的數(shù)值，單位為毫克每毫升（ug/ml）；3.7.7精確度 每個(gè)試樣取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定,以其算術(shù)平均值為結(jié)果,結(jié)果表示到0.01mg/kg3.8砷的測(cè)定本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中總砷的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種配合飼料、濃縮飼料、添加劑預(yù)混和飼料、單一飼料及飼料添加劑。最低檢測(cè)濃度：0.04mg/kg;原子熒光光度法為0.010 mg/kg。3.8.1銀鹽法（仲裁法） 原理： 樣品經(jīng)酸消解或干灰化破壞有機(jī)質(zhì)，使砷呈離子狀態(tài)存在，經(jīng)碘化鉀、氯化亞錫將高價(jià)砷還原為三價(jià)砷，然后被鋅粒和酸產(chǎn)生的新生態(tài)氫還原為砷化氫。在密閉裝置中，被二乙氨基二硫代甲酸銀（Ag-DDTC）的三氯甲烷溶液吸收，形成黃色或棕紅色銀溶膠，其顏色深淺與砷含量成正比，用分光光度計(jì)比色測(cè)定。形成膠體銀的反應(yīng)如下： AsH3+6Ag(DDTC)=6Ag+3H(DDTC)+As(DDTC)33.8.2試劑和溶液 以下試劑除特別注明外，均為分析純，水應(yīng)符合GB/T6682二級(jí)水要求。 硝酸、硫酸、高氯酸、鹽酸、乙酸、碘化鉀、L-抗壞血酸 無(wú)砷鋅粒，粒徑3.00.2mm。 混合酸溶液（A）：HNO3+H2SO4+HCLO4=23+3+4 鹽酸溶液：C（1mol/L）,量取84.0ml鹽酸，倒入適量水中，用水稀釋到1L。鹽酸溶液：C（3mol/L）,量取250ml鹽酸，倒入適量水中，用水稀釋到1L。 乙酸鉛溶液：200g/L 硝酸鎂溶液：（150g/L），稱取30g硝酸鎂Mg(NO3)2.6H2O溶于水中，并稀釋至200ml。 碘化鉀溶液：（150g/L），稱取75g碘化鉀溶于水中，定容至500ml,儲(chǔ)存于棕色瓶中。 酸性氯化亞錫溶液（400g/L）：稱取20g氯化亞錫（SnCl2.2H2O）溶于50ml鹽酸中，加入數(shù)顆金屬顆粒，可用一周。 二乙氨基二硫代甲酸銀（Ag-DDTC）-三乙胺-三氯甲烷吸收溶液(2.5g/L):稱取2.5g(精確到0.0001g) 二乙氨基二硫代甲酸銀（Ag-DDTC）于干燥的燒杯中，加適量的三氯甲烷待完全溶解后，轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中，加入20ml三乙胺，用三氯甲烷定容，于棕色瓶中存放在冷暗處，若有沉淀應(yīng)過(guò)濾后使用。 乙酸鉛棉花：將醫(yī)用脫脂棉在乙酸鉛溶液（100g/L）浸泡約1h,壓除多余溶液，自然晾干，或在90-100烘干，保存于密閉瓶中。 砷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1.0g/ml):精確稱取0.660g三氧化砷（110、干燥2h），加5ml氫氧化鈉溶液（200g/L）使之溶解，然后加入25ml硫酸溶液（60ml/L）中和，定容至500ml，此溶液每毫升含1.00g砷，于塑料瓶中儲(chǔ)存。 砷標(biāo)準(zhǔn)操作溶液（1.0ug/ml）:準(zhǔn)確吸取5ml砷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1.0g/ml)于100ml容量瓶中，加水定容，此溶液含砷50ug/ml,準(zhǔn)確吸取溶液含砷50ug/ml溶液2.0ml于100ml的容量瓶中，加1ml鹽酸，加水定容，搖勻，此溶液每毫升相當(dāng)于1.0ug砷。 硫酸溶液（60ml/L）：吸取6.0ml硫酸，緩慢加入到約80ml水中，冷卻后用水稀釋至100ml。3.8.3 儀器砷化氫發(fā)生及吸收裝置砷化氫發(fā)生器：100ml帶30ml、40ml、50ml刻度線和側(cè)管的錐形瓶。導(dǎo)氣管：管徑為8.0-8.5mm，尖端孔為2.5-3.0mm。吸收瓶：下部帶5ml刻度線。分光光度計(jì)：波長(zhǎng)范圍360-800nm，分析天平：感量0.0001g.可調(diào)式電爐。瓷坩堝：30ml高溫爐：溫控0-950。3.8.4 分析步驟：3.8.4.1 試料的處理混合酸消解法配合飼料及單一飼料，宜采用硝酸-硫酸-高氯酸消解法。稱取試料3-4g（精確到0.0001g）,置于250ml凱氏瓶中，加水少許濕潤(rùn)試樣，加30毫升混合酸溶液，放置4h以上或過(guò)夜，置電爐上從室溫開(kāi)始消解。待棕色氣體消失后，提高消解溫度，至冒白煙（SO3）數(shù)分鐘（務(wù)必趕盡硝酸），此時(shí)溶液應(yīng)清亮無(wú)色或淡黃色，瓶?jī)?nèi)溶液體積近似硫酸用量，殘?jiān)鼮榘咨?。若瓶?jī)?nèi)溶液呈棕色，冷卻后添加適量硝酸和高氯酸，直到消解完全。冷卻，加10ml鹽酸溶液煮沸，稍冷，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，用水洗劑凱氏瓶3-5次，洗液并入容量瓶中，然后用水定容，搖勻，待測(cè)。試樣消解液含砷小于10ug時(shí)，可直接轉(zhuǎn)移到砷化氫發(fā)生器，補(bǔ)加7ml鹽酸，加水使瓶?jī)?nèi)溶液體積為40ml，從加2ml碘化鉀起，按以下步驟操作。同時(shí)于相同條件下，做試劑空白試驗(yàn)。 鹽酸溶樣法礦物元素飼料添加劑不宜加硫酸，應(yīng)用鹽酸溶樣。稱取試樣1-3g(精確到0.0001g)于100ml高型燒杯中，加水少許濕潤(rùn)試樣，慢慢地滴加10ml鹽酸溶液（3mol/L），待激烈反應(yīng)過(guò)后，再緩慢加入8ml鹽酸，用水稀釋至約30ml煮沸。轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，洗劑燒杯3-4次，洗液并入容量瓶中，用水定容搖勻、待測(cè)。試樣消解液含砷小于10ug時(shí)，可直接轉(zhuǎn)移到砷化氫發(fā)生器，用水稀釋到40ml并煮沸，從加2ml碘化鉀起，按以下步驟操作。另外，少數(shù)礦物質(zhì)飼料富含硫，嚴(yán)重干擾砷的測(cè)定，可用鹽酸溶解樣品后，往高型杯中加入5ml乙酸鉛溶液并煮沸，靜置20分鐘，形成的硫化鉛沉淀過(guò)濾除之，濾液定容至50ml，按以下步驟操作。同時(shí)于相同條件下做試劑空白試驗(yàn)硫酸銅、堿式氯化銅溶樣：稱取試樣0.12-0.5g（精確0.0001g） 于砷化氫發(fā)生器中（若遇砷含量高的樣品時(shí)，應(yīng)先定容，適當(dāng)分取試樣，使試樣中砷含量在工作曲線之內(nèi)），加5ml水溶解，加2ml乙酸及1.5g碘化鉀，放置5min后，加0.2gL-抗壞血酸使之溶解，加10ml鹽酸，然后用水稀釋至40ml，搖勻，按以下步驟操作。同時(shí)于相同條件下做試劑空白試驗(yàn) 干灰化法添加劑預(yù)混合飼料 、濃縮飼料、配合飼料、單一飼料及飼料添加劑可選擇干灰化法。稱取試樣2-3g（精確到0.0001g）于30ml瓷坩堝中，加入5ml硝酸鎂，混勻，于低溫或沸水浴中蒸干，低溫炭化至無(wú)煙后，然后轉(zhuǎn)入高溫爐于550恒溫灰化3.5-4h，取出，冷卻，緩慢加入10ml鹽酸溶液（3mol/L），待激烈反應(yīng)后，煮沸并轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，用水洗劑坩堝3-5次，洗液并入容量瓶，定容、搖勻、待測(cè)。試樣消解液含砷小于10ug時(shí)，可直接轉(zhuǎn)移到砷化氫發(fā)生器，補(bǔ)加8ml鹽酸，加水使溶液體積為40ml，加入1g抗壞血酸溶解后，按以下步驟操作。同時(shí)于相同條件下，做試劑空白試驗(yàn)。3.8.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制準(zhǔn)確吸取砷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1.0ug/ml）0.00ml、1.00ml、2.00ml、4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml于發(fā)生瓶中，加10ml鹽酸，加水稀釋至40ml,從加入2ml碘化鉀起，以下按9.4.3規(guī)定步驟操作，測(cè)其吸光度，求出回歸方程各參數(shù)或繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)更換鋅粒批號(hào)或新配制Ag-DDTC吸收液、碘化鉀溶液和氯化亞錫溶液，均應(yīng)重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.8.6 還原反應(yīng)與比色測(cè)定從3.8.4.1處理好的待測(cè)液中，準(zhǔn)確吸取適量溶液（含砷量應(yīng)1.0ug）于砷化氫發(fā)生器中，補(bǔ)加鹽酸至總量為10ml,并用水稀釋到40ml,使溶液鹽酸濃度為3mol/L,然后向試樣溶液、試劑空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各發(fā)生器中，加入2ml碘化鉀溶液，搖勻，加入1ml氯化亞錫溶液，搖勻，靜置15min.準(zhǔn)確吸取5.00mLAg-DDTC吸收液于吸收瓶中，連接好發(fā)生吸收裝置（勿漏氣，導(dǎo)管賽又蓬松的乙酸鉛棉花）。從發(fā)生器側(cè)管迅速加入4g無(wú)砷鋅粒，反應(yīng)45min,當(dāng)室溫低于15時(shí)，反應(yīng)延長(zhǎng)至1h.反應(yīng)中輕搖發(fā)生瓶2次，反應(yīng)結(jié)束后，取下接收瓶，用三氯甲烷定容至5ml，搖勻，測(cè)定。以原吸收液為參比，災(zāi)20nm處，用1cm比色池測(cè)定。3.8.7分析結(jié)果的計(jì)算與表達(dá)3.8.7.1結(jié)果計(jì)算試樣中總砷含量X，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg/kg）表示，按式（1）計(jì)算： 式中： V1試樣消解液定容體積，單位為毫升（ml）;V2分取試液體積，單位為毫升（ml）;A1測(cè)試液中含砷量，單位為微克（ug）；A3 試劑空白中含砷量，單位為微克(ug):m 試樣質(zhì)量，單位為克（g）。若樣品中演砷含量很高，可用是（2）計(jì)算：式中：V1試樣消解液定容總體積，單位為毫升（ml）;V2 分取試液體積，單位為毫升（ml）;V3分取液在定容體積，單位為毫升（ml）;V4測(cè)定時(shí)分取V3的體積，單位為毫升(ml);A2測(cè)定用試液中含砷量，單位為微克（ug）；A3試劑空白液中含砷量，單位為微克(ug);m_試樣質(zhì)量，單位為克（g）. 3.8.7.2結(jié)果表示每個(gè)樣品應(yīng)做平行樣，以其算數(shù)平均值為分析結(jié)果，結(jié)果表示到0.01mg/kg.當(dāng)每千克試樣中含砷量1.0mg時(shí)，結(jié)果取三位有效數(shù)字。3.8.7.3允許差分析結(jié)果的相對(duì)偏差，應(yīng)大于表1所列允許差。表1 分析結(jié)果允許差飼料中含砷量/（mg/kg）允許相對(duì)偏差/（%）1.00 20%1.005.00 10%5.0010.00 5%10.00 3%附3.9、硼氫化物還原光度法（快速法）3.9.1原理樣品經(jīng)酸消解或干灰化破壞有機(jī)質(zhì)，使砷成離子狀態(tài)存在，在酒石酸環(huán)境中，硼氫化鉀將砷離子還原成氫化砷（AsH3）氣體.在密閉裝置中，被Ag-DDTC三氯甲烷溶液吸收，形成黃色或棕紅色銀溶膠，其顏色深淺與砷含量成正比，用分光光度計(jì)比色測(cè)定。3.9.2、試劑溶劑除下列試劑外，其它試劑同上混合酸溶液：HNO3+H2SO4+HCLO4=20+2+3 甲基橙水溶液：1g/L;pH3.0（紅）4.0（橙） 氨水溶液：1+1酒石酸溶液：200g/L 稱取100g酒石酸加水適量，稍加熱溶解，冷卻后定容500ml。 硼氫化鉀片： KBH4:NaCl=1:5,將硼氫化鉀和氯化鈉按質(zhì)量比1：5比例混勻，于90-100干燥2h，壓力為2kPa的條件下，壓制成直徑10mm,厚5mm，每片質(zhì)量為1.00.1g。壓制及儲(chǔ)存中應(yīng)防潮濕。3.9.3設(shè)備：3.9.4 分析步驟3.9.4.1試料的處理混合酸消解法配合飼料及單一飼料，宜采用三酸消解法。稱取試樣2.0-3.0g(精確到0.0001g)，于250ml凱氏燒瓶中，加水少許濕潤(rùn)式樣，加25ml混合酸溶液（20+2+3），置電路上從室溫開(kāi)始消解，待樣液煮沸后，關(guān)閉電路10-15min，繼續(xù)加熱消解，直至冒白煙（SO3）數(shù)分鐘，此時(shí)溶液應(yīng)清亮無(wú)色或淡黃色，體積近似硫酸用量，殘?jiān)鼮榘咨?。稍冷，轉(zhuǎn)移到100ml砷化氫發(fā)生器中，洗劑凱氏燒瓶3-4次，用水洗液并入發(fā)生器中，使瓶?jī)?nèi)溶液體積為30ml左右（消解時(shí)趕盡硝酸，否則結(jié)果偏低）。發(fā)生器中加入2滴甲基橙指示劑，用氨水調(diào)pH值至橙色，再滴加鹽酸溶液（1mol/L）至剛好變紅色，加入6.0ml酒石酸溶液，用水稀釋至50ml。準(zhǔn)確吸取5.00ml吸收液于吸收瓶中，連接好發(fā)生吸收裝置（勿漏氣，導(dǎo)管塞有膨松德乙酸鉛棉花），從發(fā)生器側(cè)管迅速加入硼氫化鉀一片，立即蓋緊塞子，反應(yīng)完畢再加第二片，反應(yīng)時(shí)輕輕搖動(dòng)發(fā)生器2-3次，待反應(yīng)結(jié)束后，以原吸收液作參比，在520nm處，用1cm比色池測(cè)定。（注：還原反應(yīng)時(shí)，應(yīng)防止有毒砷化氫氣體泄漏）同時(shí)于相同條件下，做試劑空白試驗(yàn)。鹽酸溶樣法礦物元素飼料添加劑不宜加硫酸，應(yīng)用鹽酸溶樣，稱取試樣0.5-2.0g，（精確到0.0001g）于發(fā)生器中，慢慢滴加5ml鹽酸溶液（3mol/L）,待激烈反應(yīng)過(guò)后，再緩慢加入3-4ml鹽酸，用水稀釋至30ml煮沸，試樣溶解后，發(fā)生器中加入2滴甲基橙指示劑，用氨水調(diào)pH值至橙色，再滴加鹽酸溶液（1mol/L）至剛好變紅色，加入6.0ml酒石酸溶液，用水稀釋至50ml。準(zhǔn)確吸取5.00ml吸收液于吸收瓶中，連接好發(fā)生吸收裝置（勿漏氣，導(dǎo)管塞有膨松德乙酸鉛棉花），從發(fā)生器側(cè)管迅速加入硼氫化鉀一片，立即蓋緊塞子，反應(yīng)完畢再加第二片，反應(yīng)時(shí)輕輕搖動(dòng)發(fā)生器2-3次，待反應(yīng)結(jié)束后，以原吸收液作參比，在520nm處，用1cm比色池測(cè)定。（注：還原反應(yīng)時(shí)，應(yīng)防止有毒砷化氫氣體泄漏）同時(shí)于相同條件下，做試劑空白試驗(yàn)。 干灰化法添加劑預(yù)混合飼料、濃縮飼料、配合飼料、單一飼料及飼料添加劑可選擇干灰化法。稱取試樣1-2g（精確到0.0001g）于30ml瓷坩堝中，低溫炭化完全后轉(zhuǎn)入高溫爐中，于550恒溫灰化3h，取出冷卻，緩慢加入10ml鹽酸溶液，待激烈反應(yīng)完全過(guò)后煮沸并轉(zhuǎn)移到砷化氫發(fā)生器中，加水至30ml左右，加入1g抗壞血酸溶解后，發(fā)生器中加入2滴甲基橙指示劑，用氨水調(diào)pH值至橙色，再滴加鹽酸溶液（1mol/L）至剛好變紅色，加入6.0ml酒石酸溶液，用水稀釋至50ml。準(zhǔn)確吸取5.00ml吸收液于吸收瓶中，連接好發(fā)生吸收裝置（勿漏氣，導(dǎo)管塞有膨松德乙酸鉛棉花），從發(fā)生器側(cè)管迅速加入硼氫化鉀一片，立即蓋緊塞子，反應(yīng)完畢再加第二片，反應(yīng)時(shí)輕輕搖動(dòng)發(fā)生器2-3次，待反應(yīng)結(jié)束后，以原吸收液作參比，在520nm處，用1cm比色池測(cè)定。（注：還原反應(yīng)時(shí)，應(yīng)防止有毒砷化氫氣體泄漏）同時(shí)于相同條件下，做試劑空白試驗(yàn)。 3.9.5標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制準(zhǔn)確吸取砷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1.0ug/ml）0.00ml、1.00 ml、2.00ml、4.00ml、6.0ml、8.0ml于發(fā)生瓶中，加水至60ml,加入6ml酒石酸溶液（200G/L）,準(zhǔn)確吸取5.00ml吸收液于吸收瓶中，連接好發(fā)生吸收裝置（勿漏氣，導(dǎo)管塞有膨松德乙酸鉛棉花），從發(fā)生器側(cè)管迅速加入硼氫化鉀一片，立即蓋緊塞子，反應(yīng)完畢再加第二片，反應(yīng)時(shí)輕輕搖動(dòng)發(fā)生器2-3次，待反應(yīng)結(jié)束后，以原吸收液作參比，在520nm處，用1cm比色池測(cè)定。（注：還原反應(yīng)時(shí)，應(yīng)防止有毒砷化氫氣體泄漏）附：氫化物原子熒光光度法3.9.1原理樣品經(jīng)酸消解或干灰