實驗五 大腸桿菌與沙門氏菌.ppt

實驗六細(xì)菌生化特性試驗 揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院2020年1月15日星期三 實驗原理 各種細(xì)菌在其新陳代謝中 由于利用營養(yǎng)物質(zhì)的能力有所差異 排泄的代謝產(chǎn)物亦不同 所以利用這點進行生化試驗 可達(dá)到鑒定細(xì)菌種的目的 尤其在鑒定腸道桿菌時 生化試驗是極其常用的一種方法 一 目的要求 學(xué)習(xí)常用的生化實驗方法 掌握大腸桿菌與沙門氏菌的主要生化特點 個體為桿狀 散在或成對 G 二 背景知識介紹 大腸桿菌 中等大小0 4 0 7 2 3 m 大腸埃希氏菌是這個菌群的代表成原 與廣泛的獸醫(yī)臨床病征有關(guān) 如 犢牛的腸道感染和水瀉 幼豬的水瀉和腹瀉 斷奶仔豬水腫病 狗的尿道感染 雞 臍炎 眼炎 腸炎 肝周炎 肺炎 氣囊炎 腹膜炎 肉芽腫等 個體為桿狀 散在或成對 G 沙門氏菌 是一大群寄生于人和動物腸道內(nèi) 生化特性和抗原結(jié)構(gòu)相似 G 兼性厭氧的無芽胞直桿菌 在醫(yī)學(xué) 獸醫(yī)和公共衛(wèi)生上均十分重要 絕大多數(shù)沙門氏菌對人和動物有致病性 能致人和動物多種不同臨床表現(xiàn)的沙門氏菌病 人類食物中毒的主要病原之一 傷寒沙門氏菌 鼠傷寒沙門氏菌 除雛沙門和雞沙門氏菌外 其余各菌具有周生鞭毛 三 實驗材料 常規(guī)接種工具 接種棒 酒精燈等革蘭氏染色液 玻片 滴管等菌種 大腸桿菌的普通瓊脂 或麥康凱 培養(yǎng)物 1個 組 沙門氏菌的普通瓊脂 或麥康凱 培養(yǎng)物 1個 組 大腸桿菌 沙門氏菌的鄧亨氏蛋白胨水培養(yǎng)物 大腸桿菌 沙門氏菌的葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物 培養(yǎng)基 三糖鐵斜面 1支 人 生化管 葡 乳 麥 甘 蔗 H2S 尿 枸 1套 人 試劑 吲哚試劑 M R試劑 V P試劑等 四 實驗內(nèi)容 觀察大腸桿菌在普通瓊脂上的生長表現(xiàn) 大腸桿菌在麥康凱平板上生長表現(xiàn) 沙門氏菌在普通瓊脂上的生長表現(xiàn) 沙門氏菌在麥康凱平板上生長表現(xiàn) 大腸桿菌與沙門氏菌的革蘭氏染色 鏡檢 記錄結(jié)果 三糖鐵瓊脂接種 挑取待試菌菌落穿刺接種三糖鐵底部并涂布于斜面 置37 培養(yǎng) 生化管接種培養(yǎng) 糖發(fā)酵試驗 葡乳麥甘蔗H2S試驗 尿素酶試驗 枸櫞酸鹽利用試驗 葡乳麥甘蔗H2S尿枸 葡乳麥甘蔗H2S尿枸 大腸桿菌 沙門氏菌 大腸桿菌 沙門氏菌 置37 培養(yǎng) 吲哚試驗 接種大腸桿菌或沙門氏菌于5mL鄧亨氏蛋白胨水中 置37 培養(yǎng)3 5d 靜置分層后 沿試管壁加入吲哚試劑1mL 上層變?yōu)榧t色者為陽性反應(yīng) 吲哚試驗原理 蛋白質(zhì)中的色氨酸 紅色 先用乙醇溶解試劑后加鹽酸 避光保存 M R試驗 接種大腸桿菌或沙門氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中 置37 培養(yǎng)3 5d 于培養(yǎng)物中加入幾滴試劑 變紅色者為陽性反應(yīng) 桔紅到黃色則為陰性 V P試驗 接種大腸桿菌或沙門氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中 置37 培養(yǎng)3 5d 于培養(yǎng)物中加入0 5mLV P甲液 隨后加V P乙液0 5mL 輕搖 靜置10 15min 15min內(nèi)變紅者為陽性 M R與V P試驗原理 M R試驗 甲基紅是一種pH指示劑 當(dāng)細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸且產(chǎn)酸量大時 在加入甲基紅指示劑后顯紅色為陽性 pH4 4 6 2紅 黃 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 2 3 丁二烯醇 某些細(xì)菌能發(fā)酵 二乙酰 堿 V P試驗 胨中的胍基化合物 注意 通常M R和V P試驗是密切相關(guān) 如果一個微生物M R是陽性 則V P是陰性 或者相反 粉紅色化合物 M R試劑 V P試劑 甲基紅0 02g95 酒精60mL蒸餾水40mL 甲液 萘酚酒精溶液 萘酚5g無水乙醇100mL 乙液 KOH溶液 KOH40g 水100ml 將甲液和乙液分裝棕色瓶中 于4 10 保存 五 結(jié)果觀察 大腸桿菌的生長表現(xiàn) 普通瓊脂 形成圓形 光滑 濕潤 半透明 灰白色菌落 直徑約2 3mm 麥康凱 瓊脂上形成紅色菌落較大的菌落 三糖鐵瓊脂 反應(yīng)模式表示 沙門氏菌的生長表現(xiàn) 普通瓊脂 生長不良 麥康凱 瓊脂上形成灰白色菌落 三糖鐵瓊脂 反應(yīng)模式表示 細(xì)菌的染色 鏡檢 大腸桿菌 沙門氏菌 G 直桿菌 大小0 4 0 7 2 3 m 無芽胞 兩端鈍圓 散在或成對 生化管接種培養(yǎng) 葡乳麥甘蔗H2S尿枸 葡乳麥甘蔗H2S尿枸 大腸桿菌 沙門氏菌 吲哚 M R V P試驗結(jié)果 大腸桿菌 沙門氏菌 吲哚試驗 M R試驗 V P試