



免費預覽已結束,剩余1頁可下載查看
下載本文檔
版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
亞硝酸還原酶產(chǎn)生菌的篩選及酶學性質的研究2011年6月第6期(總第151期)廣西輕工業(yè)guangxijournaloflightindustry食品與生物亞硝酸還原酶產(chǎn)生茵的篩選及酶學性質的研究杜嬋娟,白先放,謝慶武(廣西大學生命科學與技術學院,廣西南寧530004)【摘要】以nano為唯一氮源,從土壤篩選出6株產(chǎn)亞硝酸還原酶的真菌.從其中酶活力最高的n4菌株提取胞內(nèi)酶,對其酶學性質進行研究.結果表明,該酶受edta,ni.和co抑制,被ba激活;最適反應溫度為35,最適反應ph為7.4;在60cvx下,ph7.07.8時穩(wěn)定.【關鍵字】亞硝酸還原酶;篩選;真菌;酶學性質【中圖分類號】tq925【文獻標識碼】a【文章編號】10032673(2011)060702亞硝酸鹽是一類致癌性物質,廣泛存在于蔬菜,食品和煙葉中,可使人體血液中的血紅蛋白失去攜氧功能,并可誘發(fā)各種癌癥_ll.降解亞硝酸鹽的方法主要有化學法和生物法日.生物法是利用亞硝酸還原酶(nitritereductase,ec1.7.2.1)對亞硝酸鹽進行分解,酶促反應需要nad(p)h等作為輔酶31.生物法的關鍵是獲得產(chǎn)亞硝酸還原酶的高產(chǎn)菌株,因此我們進行了相關的研究.1實驗材料1.1土樣來源土壤樣品從南寧市郊區(qū)菜地和周邊縣城農(nóng)田采集.1.2培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基(%):葡萄糖3.0,nano20.3,kc10.05,k2hpo40.1,mgso40.05,feso40.001,瓊脂1.5,ph自然;發(fā)酵培養(yǎng)基(%):葡萄糖3.0,nano0.3,kc10.05,k2hpo40.1,mgso40.05,feso40.001,ph自然;產(chǎn)酶培養(yǎng)基(%):葡萄糖3.0,蛋白胨0.2,nhc10.1,nano20.2,kc10.05,k2hpo40.15,mgso40.075,feso40.003,ph8.0.2實驗方法2.1菌株的分離與篩選取土樣1g,加9ml無菌水,混勻,濃度梯度稀釋后涂布于平板培養(yǎng)基,30c下培養(yǎng)34d,將生長旺盛的菌落轉接至nano濃度更高(110%)的平板培養(yǎng)基上,對生長快的菌株進行分離純化后,接人發(fā)酵培養(yǎng)基,30%,200r/m培養(yǎng)48h,選取酶活力最高的菌株進行下一步研究.2-2粗酶液的提取將菌種接入產(chǎn)酶培養(yǎng)基中,30c,200r/m培養(yǎng)48h,過濾收集菌體,用無菌水充分洗滌,加0.1mol/lph7.4的磷酸緩沖液,研磨破壁,離心所得上清液即為粗酶液.2.3酶活力測定將100110%葡萄糖和100l粗酶液混合,于30保溫12h,加入100150g/mlnano2,700l0.1mol/lph7.4磷酸緩沖液,40%水浴中反應15min,加入100l4g/l對氨基苯磺酸,50l2g/l鹽酸萘乙二胺溶液,顯色穩(wěn)定后測od計算酶活力.酶活力單位定義:在上述反應條件下,每分鐘分解0.1gnano:所需要的酶量為1個酶活力單位(u).3結果3.1菌種的篩選從土壤篩選到6株產(chǎn)亞硝酸還原酶的菌株,其中n菌株的酶活力最高,達到5.41u/ml(表1).表1各菌株的亞硝酸還原酶活力比較nlnsnrn0n醐力(u/m1)5.414.983723.524254413i2酶學性質的研究3.2.1edta和金屬離子對酶活力的影響將10mmol/l的edta或金屬離子溶液與酶液等體積混合,于40%下水浴保溫30min,測定酶活力.結果表明,edta,fe,co和ni對酶有抑制作用,ba,pb,na,ca,k,cu和mg對酶則有激活作用,其中ba:的激活作用最強(圖1).】e鞋】j赫1霰鎏80it督鞲4瞄2握r一一cd.圖1edta和金屬離子對酶活力的影響3.2.2溫度對酶活力的影響在不同溫度(2570%)下測定酶活力,結果表明,在3o40%范圍內(nèi)都具有較高的酶活力,最適酶促反應溫度為35(圖2).【作者簡介】杜嬋娟(1984一),女,廣西南寧人,碩士研究生,研究方向:微生物生物技術.7i匿c圖2溫度對酶活力的影響3.23溫度對酶穩(wěn)定性的影響將酶液分別在3090c下水浴保溫05h,測定剩余酶活力.結果表明,該酶在60以下時基本穩(wěn)定,在80c下保溫5h后.剩余的相對酶活力為50.48%,而在90下保溫4h后,仍有42.2%(圖3).圖3溫度對酶的穩(wěn)定性的影響3.2.4ph對酶活力的影響在ph5.88.0測定酶活力.結果表明,酶促反應最適ph為7.4,在ph7.07.8內(nèi)相對酶活力都在65%1)j,jt_(圖4).口h圖4ph對酶活力的影響3.2,5ph對酶穩(wěn)定性的影響將酶液分別與o.1mot/l,ph5.88.0的磷酸緩沖液等量混合,40c恒溫5h后,將ph調(diào)至7.4,測定剩余酶活力.結果表明,該酶在ph7.07.8范圍內(nèi)穩(wěn)定,剩余酶活力都在98%以上(圖5).圖5ph對酶活力穩(wěn)定性的影響83.2.6糖濃度對酶活力的影響將03%(w/v)濃度的葡萄糖溶液與酶液等量混合,3012下保溫12h后,測定酶活力.結果表明,當糖濃度為1%時,酶活力最高(圖6).音|錄度圖6糖濃度對酶活力的影響4分析國內(nèi)外的學者進行亞硝酸還原酶活力的測定時,都需要價格昂貴的nadh或nadph等為電子供體.本研究制備的粗酶液中,除了含有亞硝酸還原酶以外,還有參與糖酵解反應的酶系.用該酶系酵解葡萄糖所得的nadh來進行亞硝酸還原酶活力的測定,可降低研究成本.目前對亞硝酸還原酶產(chǎn)生菌的研究,大部分都集中在以乳酸菌為代表的細菌,真菌類的研究較少.細菌來源的亞硝酸還原酶對熱穩(wěn)定,可被edta激活.本研究所得的真菌亞硝酸還原酶的熱穩(wěn)定性優(yōu)于細菌類的,在90qc水浴下保溫4h仍有40%左右的酶活力.該酶edta抑制,可能是因為edta絡合了酶活性中心上的cu:等金屬離子.如果將該酶用于食品加工,水質治理以及煙草處理等行業(yè)中,可將反應溫度控制在60以上以防止微生物的生長,具有較好的應用前景.參考文獻11-圣,朱法華,張景榮等.飲用水中亞硝酸鹽及微量元素對癌癥發(fā)病率的影響研究】l江蘇環(huán)境科技.2005,18(1):13.2】唐發(fā)書,賈仁勇,彭順清等.葡萄糖和維生素c(vitc)對香腸中亞硝酸鹽殘留量的影響uj.四川畜牧獸醫(yī)學院,2000,14(3):3638.【3pagegv,solbergm,carmangm.nitritereductas
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 農(nóng)產(chǎn)品采購合同進度與市場行情聯(lián)動管理
- 古建筑拆除修復安全責任協(xié)議書
- 拆除工程安全監(jiān)管與施工合同范本
- 2025年大宗商品交易與管理考試試卷及答案
- 2025年心理學專業(yè)碩士入學考試題及答案
- 房屋買賣雙方產(chǎn)權登記及過戶手續(xù)協(xié)議
- 車輛過戶手續(xù)代理及車輛購置協(xié)議
- 2025年中考考前最后一卷化學(廣州卷)(全解全析)
- 建設工程檢測項目取樣品標準
- 超臨界機組工程各種報驗表格
- 焊接施工流程圖
- 阜陽混凝土框架結構高層住宅項目實體檢驗及材料送檢專項方案
- 2023年江蘇省無錫市梁溪區(qū)小升初語文試卷
- 2023年貴州省六盤水市鐘山區(qū)數(shù)學六下期末達標檢測試題含解析
- 2023年黑龍江省高校畢業(yè)生三支一扶計劃招募考試真題
- 新加坡介紹-課件
- 北科大2023年微機原理期末試卷
- 四川省工程造價咨詢收費服務標準
- 成人禮儀式策劃書
- GB/T 12022-2014工業(yè)六氟化硫
- 2023年上海市學業(yè)水平物理合格性考試試卷
評論
0/150
提交評論