NY-T406-2000脫毒草莓種苗病毒檢測技術(shù)規(guī)程.pdf

8 1 5il l中華 人 民 共 和 國 農(nóng) 業(yè) 行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn)N Y / T 4 0 6 -2 0 0 0脫毒草毒種苗病毒檢測技術(shù)規(guī)程R u l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s - f r e e s e e d l i n g s t r a w b e r r i e s2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 發(fā)布2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 實(shí)施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā) 布N Y / T 4 0 6 -2 0 0 0前言 為了 有效地實(shí)施對脫毒草毒種苗質(zhì)量 檢驗(yàn)和管理， 規(guī)范脫毒種苗市場， 促進(jìn)脫毒技術(shù)的推廣， 實(shí)現(xiàn)脫毒草毒種苗病毒檢測的規(guī)范化、 標(biāo)準(zhǔn)化， 特制定本規(guī)程。本規(guī)程在參照國內(nèi)外草毒病毒檢測技術(shù)最新研究進(jìn)展的基礎(chǔ)上， 結(jié)合當(dāng) 前國內(nèi)生產(chǎn)實(shí)際， 力求達(dá)到快速、 準(zhǔn)確、 可操作性強(qiáng)的檢測要求。 檢測對象主要選擇生產(chǎn)上發(fā)生 分布范圍廣、 危害性大的病毒。 檢測方法主要采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測和指示植物檢測。 本規(guī)程內(nèi) 容包括脫毒草毒種苗病毒檢測的 適用范圍、 檢測對象、 抽樣方法、 檢測方法租質(zhì)量要求。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A是標(biāo)準(zhǔn)的附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位: 農(nóng)業(yè)部植物 脫毒種苗質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心( 濟(jì)南) 、 山東省植物保護(hù)總站。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人 : 華崇釗、 商明清、 孫作文、 李明立、 徐魯、 楊勤民。中 華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)N Y/ T 4 0 6 -2 0 0 0脫毒草毒種苗病毒檢測技術(shù)規(guī)程Ru l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s - f r e e s e e d l in g s t r a wb e r r i e s范圍本標(biāo)準(zhǔn) 規(guī)定了脫毒草毒種苗的 病毒檢測方法和操作規(guī)程。本標(biāo)準(zhǔn)適用于脫毒草萄母本株、 組培苗及脫毒草墓種苗的病毒檢測。2 引用標(biāo)準(zhǔn) 下列標(biāo)準(zhǔn)所 包含的條文， 通 過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。 本標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí)， 所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會(huì)被修訂， 使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。 N Y / T 4 0 1 -2 0 0 。 脫毒馬鈴薯種薯( 苗) 病毒檢測技術(shù)規(guī)程3 定義 本標(biāo)準(zhǔn)采用下列定義。3 . 1 脫毒草毒母本株 由 脫毒組培苗直接繁育并且不帶本規(guī)程規(guī)定的檢測對象、 用于提供草幕甸甸莖繁殖苗的母株。3 . 2 脫毒草萄種苗 由 脫毒草每母本株繁育并符合本規(guī)程規(guī)定合格標(biāo)準(zhǔn)的種苗。3 . 3 病毒病株允許率 脫毒草墓母本株及種苗繁殖田中病毒病株的允許比率。檢測對 象草萄輕黃邊病毒( S t r a w b e r r y m i l d y e l l o w e d g e - a s s o c i a t e d v i r u s , S M Y E V ) ;草萄鑲脈病毒( S t r a w b e r r y v e i n b a n d i n g v i r u s , S V B V ) ;草毒斑駁病毒( S t r a w b e r r y m o t t l e v i r u s , S M o V ) ;草毒皺縮病毒( S t r a w b e r r y c r i n k l e v i r u s , S C r V ) ;抽樣5 . 1 脫毒草毒母本株抽樣 每株均需檢測。繁育季節(jié)從待檢母本株選取幼嫩葉片作為檢測樣品。每年檢測 3 次以上。5 . 2 組培苗的抽樣5 . 2 . 1 脫毒核心材料: 每株均須檢測。5 . 2 . 2 擴(kuò)繁組培苗: 每擴(kuò)繁一次隨機(jī)抽取 1 0 0 2 寫檢測。5 . 3 出圃種苗抽樣5 . 3 . ， 采用分層取樣或隨機(jī)取樣等方法抽取樣品， 抽樣數(shù)量見表 1 ,中華人民共和國農(nóng)業(yè)部 2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 批準(zhǔn)2 0 0 0 一1 2 一0 1實(shí)施N Y/ T 4 0 6 -2 0 0 0表 1 草毒種苗抽樣數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)表種苗總數(shù)量， 株抽樣百分率， %抽樣最低數(shù)量， 株( 1 0 0 0 06 - 1 01 0 0 1 0 0 0 03 - 5注: 不足抽樣最低數(shù)量的全部作為混合樣品。3 . 2 將第一次抽取的樣品混合后進(jìn)行二次抽樣， 隨機(jī)抽取 1 0 %的混合樣品檢測。6 檢測方法6 . 1 雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測法 用于檢測草 毒輕黃邊病毒、 草幕 鑲脈病毒。 檢測方法按N Y/ T 4 0 1 -2 0 0 0中附錄A的方法執(zhí)行。6 . 2 指示植物檢測法 用于檢測草毒斑駁病毒、 草毒皺縮病毒、 草毒鑲脈病毒和草墓輕黃邊病毒， 檢測草毒病毒的指示植物及癥狀見表 2 , 檢測方法見附錄A。 表 2 檢測草毒病毒的指示植物及癥狀病 毒 種 類指示植物指示植物癥狀草幕斑駁病毒E M C UC 5葉片斑駁草幕皺縮病毒U C 5UC l o葉片皺縮草毒鑲脈病毒U C6呈鑲脈癥狀U C5葉片反轉(zhuǎn)草毒輕黃邊病毒U C4葉片枯死， 整株死亡U C5葉片邊緣逐漸變成淺黃7 質(zhì)t要求 只要酶聯(lián)免疫檢測或指示植物檢測呈陽性反應(yīng)的均為帶毒株。 脫毒草幕母本株: 病毒病株允許率是。 。 脫毒草毒種苗: 病毒病株允許率簇5。 %。NY / T 4 0 6 -2 0 0 0 附錄A ( 標(biāo)準(zhǔn)的附錄)指示植物檢測法A 1 縈育指示植物 采用歐洲草幕( F r a g a r i a v e s c a ) 及蘭毒( F r a g a r i a v i s g i n i a n a ) 中 的易感品種( 見表2 ) ， 在防蟲條件下將指示植物和待檢樣品分別栽植在花盆中， 不斷去掉指示植物的甸旬莖， 使葉柄加粗， 當(dāng)葉柄直徑達(dá)到2 m m左右時(shí)嫁接。A 2 燎接 小葉 嫁接法: 以待檢樣品成熟葉片( 只留中間小葉下半部) 為接穗， 將指 示植物剪去中間小葉 作為 砧木. 劈接后置于2 0 -2 5 C 、 光照充足的條件下。每個(gè)待檢樣品同時(shí)用兩種指示植物 進(jìn)行鑒定， 每個(gè)待檢樣品各嫁接 3 株指示植物， 每株指示植物嫁接 2 -3 個(gè)待檢小葉， 并設(shè)陰性對照和陽性對照。A 3 管理 將整株盆栽指示植物罩上塑料袋保濕， 每隔2 - 3天換一次氣， 1