微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)經(jīng)典版

微生物的類群 原生生物：原核生物 :真菌 :病毒 :如酵母菌單細(xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等微生物包含了除 植物界 和 動(dòng)物界 以外的所有生物無 細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻 原核細(xì)胞課題 1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1.提供營養(yǎng)和條件2.防止污染一 .培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：思考：微生物 “吃 ”什么 ？碳源、氮源、水、無機(jī)鹽 碳源 無機(jī)碳源：有機(jī)碳源： CO2、 CO32-、 HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物 氮源 無機(jī)氮源：有機(jī)氮源： NH4 、 NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含 CHON的 有機(jī)物 為 異 養(yǎng)型微生物提供 碳源 、 氮源 、 能源概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。一 .培養(yǎng)基 ： 微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分 ： 碳源、氮源、水、無機(jī)鹽2.特殊營養(yǎng) ： 維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、 氧氣的需求 ：4.種類 ：固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基有 無 凝固劑瓊脂分離 鑒定工業(yè) 生產(chǎn)化學(xué)成分：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn) 培養(yǎng)基類型 配制特點(diǎn) 主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基 加入瓊脂較多 微生物的分離、計(jì) 數(shù)等半固體培養(yǎng)基 加入瓊脂較少觀察微生物運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種、保藏菌種等液體培養(yǎng)基 不加入瓊脂 工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培 養(yǎng)化學(xué)組成合成培養(yǎng)基 由已知成分配制而成， 培養(yǎng)基成分明確 菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基 由天然成分配制而成， 培養(yǎng)基成分不明確 工業(yè)生產(chǎn)目的用途鑒別培養(yǎng)基 添加某種指示劑或化學(xué)藥 品 鑒別不同種類的微生物選擇培養(yǎng)基 添加（或缺少）某種化學(xué) 物質(zhì) 培養(yǎng)、分離出特定 的微生物牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂 20.0g分析營養(yǎng)構(gòu)成？5. 配制原則 目的明確： 營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng) 適宜的 pH值：有機(jī)碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的 種類、培養(yǎng)目的 選擇原料自養(yǎng)型： 不 加碳源加入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸（ CO2碳源）生產(chǎn) 科研巴氏消毒法耐高溫需保持干燥的 物品， 160170 1 2小時(shí)接種環(huán)、接種針等 金屬用具7075 、 30min 80 、 15min100 、 56min消毒 滅菌定義方法較為 溫和 理化方法殺死 部分有害菌體（ 不 包括芽孢、孢子強(qiáng)烈 的理化方法，殺死 所有微生物煮沸消毒法化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等 高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121 、 15 30min二 .無菌技術(shù)： 防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（ 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（ 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（ 3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手練習(xí) :說出無菌技術(shù)及相應(yīng)的具體方法工作臺操作者的手、衣著培養(yǎng)基培養(yǎng)皿玻棒、試管接種環(huán)牛奶無菌水飲用水紗布涂布器2.無菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過程二 .無菌技術(shù) ： 防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺單個(gè)或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等 。3.功能：1.定義：三 .菌落鑒定菌種 的重要依據(jù)固體 培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂 20.0g四 .大腸桿菌的純化培養(yǎng)： 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：培養(yǎng)基用量依配方計(jì)算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解 取紙 蛋白胨、 NaCl 瓊脂 補(bǔ)水定容4.調(diào) pH、 分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個(gè)細(xì)胞 ,形成單個(gè)菌落倒平板倒平板約 50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基四 .大腸桿菌的純化培養(yǎng) ： 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌： 平板劃線法：菌種劃 3個(gè) 平板1個(gè) 不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對照）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。6支 試管，分別加入 9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106 稀釋涂布平板法 ：a.梯度稀釋菌液 ：菌液微量 移液器 稀釋涂布平板法 ：a.梯度稀釋菌液 ：b.涂布平板 ：不超過 0.1ml各 梯度分別涂布 3個(gè)平板1個(gè) 不涂布作空白對照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍 平板劃線法：四 .大腸桿菌的純化培養(yǎng) ： 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：1.接種： 稀釋涂布平板法 ：2.培養(yǎng)： 將 接種后 的培養(yǎng)基和一個(gè) 未接種 的培養(yǎng)基放入 37 恒溫箱中培養(yǎng) 12h 24h后，觀察并記錄五 .菌種的保藏：1.臨時(shí)保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上42.長期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油 1ml菌液 20一 .培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分 ： 碳源、氮源、水、無機(jī)鹽2.特殊營養(yǎng) ： 維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、 氧氣的需求 ：4.種類 ：固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基有 無